血清肌酸激酶活性测定和前白蛋白测定

1、血清肌酸激酶血清肌酸激酶活性测定活性测定连续监测法测连续监测法测定血清肌酸激酶定血清肌酸激酶一、检验原理：一、检验原理： 磷酸肌酸磷酸肌酸ADP CK ADP CK 肌酸肌酸ATPATP ATP ATP葡萄糖葡萄糖 HK 6HK 6磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖ADPADP 6 6磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖NADP G6P-DH NADP G6P-DH 6 6磷酸葡萄糖酸磷酸葡萄糖酸NADPHNADPH原理：原理：v利用酶偶联反应原理连续监测利用酶偶联反应原理连续监测NADP,后后者引起者引起340nm吸光度的增高，在吸光度的增高，在340nm监测单位时间内监测单位时间内NADPH的生成量，可的生成量，可计算

2、出计算出CK的活性浓度。的活性浓度。二、试剂二、试剂v1.128mmol/L咪唑咪唑-醋酸盐缓冲储存液醋酸盐缓冲储存液（pH7.0， 0.25）v2.应用试剂应用试剂v3.应用试剂应用试剂v4.待测标本待测标本三、操作步骤三、操作步骤v1.手工操作手工操作 现以具有现以具有37恒温比色池的分光光度计为例，说恒温比色池的分光光度计为例，说明操作过程。明操作过程。（1）吸应用试剂）吸应用试剂2mL加入测定管中，加血清加入测定管中，加血清100LL，混合，放入，混合，放入37水浴至少水浴至少5min。（2）在）在37水浴中预温应有试剂水浴中预温应有试剂至少至少5min。（3）加入应有试剂）加入应有试

3、剂200LL，混合，转入，混合，转入3m3mL L比比色皿色皿（1.0cm1.0cm光径），立即放入恒温比色槽内。光径），立即放入恒温比色槽内。（4 4）待）待120s120s的延滞期后，在的延滞期后，在340nm340nm波长处，连续波长处，连续监测线性反应期吸光度变化速率（监测线性反应期吸光度变化速率（120s120s），以吸），以吸光度增加的速率计算血清中光度增加的速率计算血清中CKCK的活性浓度。的活性浓度。v2.自动化生化分析仪操作程序的设置自动化生化分析仪操作程序的设置 按手工操作要求设置参数为：系数按手工操作要求设置参数为：系数3698、温、温育时间育时间min、滞留时间、滞留时

4、间120s、比色皿光径、比色皿光径1.0cm、稀释倍数、稀释倍数23、血清占反应液体积分、血清占反应液体积分数数0.0430四、临床意义v1、CK主要存在于骨骼肌和心肌，在脑组织主要存在于骨骼肌和心肌，在脑组织中也有存在。正常人血浆中酶活性很低。血中也有存在。正常人血浆中酶活性很低。血清中清中CK活性的变化主要见于下列情况。活性的变化主要见于下列情况。v(1) CK主要用于心肌梗死的诊断：心肌梗死主要用于心肌梗死的诊断：心肌梗死会出现血清会出现血清CK活性明显变化。心肌梗死发病活性明显变化。心肌梗死发病的早期，即发病后的早期，即发病后24小时此酶即开始升高，小时此酶即开始升高，1248h达最高

5、值，可高达正常上限的达最高值，可高达正常上限的1012倍，在倍，在24天降至正常水平。此酶对诊断心天降至正常水平。此酶对诊断心肌梗死较其他的心肌酶谱肌梗死较其他的心肌酶谱AST、LD的阳性率的阳性率高，特异性强，是用于心肌梗死早期诊断，高，特异性强，是用于心肌梗死早期诊断，估计病情和判断预后的较好指标。病毒性心估计病情和判断预后的较好指标。病毒性心肌炎时肌炎时CK也有明显升高，而且样品溶血情况也有明显升高，而且样品溶血情况不影响不影响CK活性的测定。活性的测定。v（2）肌营养不良症、皮肌炎、骨骼肌损伤等）肌营养不良症、皮肌炎、骨骼肌损伤等也可导致也可导致CK升高。脑血管意外，脑膜炎，甲升高。脑

6、血管意外，脑膜炎，甲状腺机能低下症等疾病及一些非疾病因素状腺机能低下症等疾病及一些非疾病因素（如剧烈运动，各种插管及手术，肌肉注射（如剧烈运动，各种插管及手术，肌肉注射冬眠灵和抗生素等）也可能引起冬眠灵和抗生素等）也可能引起CK活性增高。活性增高。肌酸显色法测肌酸显色法测定血清肌酸激酶定血清肌酸激酶一、原理一、原理v磷酸肌酸磷酸肌酸+ADP CK 肌酸肌酸+ATPv肌酸肌酸+双乙酰双乙酰+-萘酚萘酚 Mg 红色化合物红色化合物(=540nm)v在一定范围内，红色深浅与肌酸量成正比，在一定范围内，红色深浅与肌酸量成正比，从而可求得血清中从而可求得血清中CK活性。在反应性体系中活性。在反应性体系中

7、加入加入Mg 做激活剂，半胱氨酸供给巯基，保做激活剂，半胱氨酸供给巯基，保持持CK活性中心必需基团不被氧化；氢氧化钡活性中心必需基团不被氧化；氢氧化钡和硫酸锌沉淀蛋白质并中止反应。和硫酸锌沉淀蛋白质并中止反应。二、试剂二、试剂v1、混合底物溶液、混合底物溶液v2、储存碱溶液、储存碱溶液v3、双乙酰溶液、双乙酰溶液v4、 -萘酚溶液萘酚溶液v5、1.7mmol/L肌酸标准溶液肌酸标准溶液v6、50g/L硫酸锌溶液硫酸锌溶液v7、60g/L氢氧化钡溶液氢氧化钡溶液v8、待测标本、待测标本三、操作步骤三、操作步骤v（1）取）取4支试管，分别标明空白管、标准管、对照支试管，分别标明空白管、标准管、对照

8、管和测定管。管和测定管。v（2）按书的表格进行操作。）按书的表格进行操作。v（3）混匀，在）混匀，在540nm波长处，用空白管调零，读波长处，用空白管调零，读取各管的吸光度。取各管的吸光度。v（4 ）单位定义：）单位定义：1mL血清在血清在37与底物作用与底物作用1h产产生生1molmol肌酸为肌酸为1 1个个CKCK活性单位，若此单位乘以活性单位，若此单位乘以1000/601000/60或或16.716.7可换算成国际单位（可换算成国际单位（U/LU/L）。）。前白蛋白的前白蛋白的测定测定原理原理v样本中的样本中的PA（前白蛋白）与试剂中相应的抗（前白蛋白）与试剂中相应的抗体相遇，立即形成抗

9、原抗体复合物，在特定体相遇，立即形成抗原抗体复合物，在特定的缓冲环境中形成浊度，其浊度在合适的抗的缓冲环境中形成浊度，其浊度在合适的抗体浓度存在时与抗原含量成正比，与相同条体浓度存在时与抗原含量成正比，与相同条件操作的较准品比较，即可求出样本中件操作的较准品比较，即可求出样本中PA的的含量。含量。临床意义临床意义 课本课本P109v1.作为营养不良的评价标准。其评价标准：作为营养不良的评价标准。其评价标准：PA0.20.4g/L为正常，为正常，0.10.15g/L为轻度缺为轻度缺乏，乏，0.050.1g/L为中度缺乏，为中度缺乏，0.05g/L为严为严重缺乏。重缺乏。v2.作为肝脏损害的评价指标。作为肝脏损害的评价指标。PA作为营养不作为营养不良和肝功能不全的指标比清蛋白和