药物分析课件第11章A-抗生素类药物的分析hao

1、第十一章第十一章进入进入返回主目录返回主目录思考与练习第一节 概 述第二节 内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素第五节 抗生素类药物中高分 子杂质的检查基本要求基本要求基本要求基本要求一、掌握抗生素类药物的结构特点与分析方法一、掌握抗生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。之间的关系。二、掌握抗生素类药物的鉴别原理与方法。二、掌握抗生素类药物的鉴别原理与方法。三、掌握抗生素类药物法定含量测定方法的原三、掌握抗生素类药物法定含量测定方法的原理、测定方法与计算。理、测定方法与计算。四、熟悉抗生素类药物杂质检查的方法

2、。四、熟悉抗生素类药物杂质检查的方法。五、了解抗生素类药物中高分子聚合物检查。五、了解抗生素类药物中高分子聚合物检查。返返 回回第一节第一节 概述概述1. 抗生素药物的特点抗生素药物的特点化学纯度较低化学纯度较低活性组分易发生变异活性组分易发生变异稳定性差稳定性差2. 微生物学法与理化法的比较微生物学法与理化法的比较微生物检定法微生物检定法理化法理化法以抗生素对微生物的杀伤或抑制程以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为指标衡量抗生素的生物效价度为指标衡量抗生素的生物效价 根据抗生素结构特点，利用其根据抗生素结构特点，利用其特有的理化性质测定其含量特有的理化性质测定其含量已知或新发现的抗生素、精制品

3、或已知或新发现的抗生素、精制品或粗制品均能测定粗制品均能测定 测定化学结构已知、已提纯的测定化学结构已知、已提纯的抗生素抗生素灵敏度高、样品需用量小、反映抗灵敏度高、样品需用量小、反映抗生素的医疗价值，但操作步骤多、生素的医疗价值，但操作步骤多、费时、费时、误差大误差大 迅速、准确、专属性高、样品迅速、准确、专属性高、样品需用量小、操作简单、省时需用量小、操作简单、省时3.3.抗生素的活性以效价单位来表示：抗生素的活性以效价单位来表示： 每每mlml或每或每mgmg中含有某种抗生素的有效成中含有某种抗生素的有效成分的多少，用单位（分的多少，用单位（u u）或）或g g 表示。表示。 1 1mg

4、mg青霉素青霉素G G钠盐定为钠盐定为16671667单位单位 1 1mgmg青霉素青霉素G G钾盐的单位（钾盐的单位（u u） =1667=1667356.4/372.5=1595u/mg356.4/372.5=1595u/mg分类分类（按结构与性质）：（按结构与性质）： 内酰胺类、氨基糖苷类、内酰胺类、氨基糖苷类、 四环素类、大环内酯类、四环素类、大环内酯类、 氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类 林可霉素类、其他抗生素类林可霉素类、其他抗生素类返返 回回第二节第二节 内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 青霉素类青霉素类NSCH3CH3COOHOHN1234567RCO母核（母核

5、（6-6-氨基青霉烷酸）氨基青霉烷酸）AB头孢菌素类头孢菌素类7654321NONHSCH2R1COOH母核（7-氨基头孢菌烷酸）RCOABCONSOHNCOOHCH3CH3CH2青霉素青霉素（青霉素钾、钠）（青霉素钾、钠）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH2氨苄西林氨苄西林（氨苄青霉素）（氨苄青霉素）阿莫西林阿莫西林（羟氨苄青霉素）（羟氨苄青霉素）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素头孢氨苄头孢氨苄NONHSCH3COOHOCNH2CH2头孢拉啶头孢拉啶CH2NH2

6、CONONHSCH3COOH头孢羟氨苄头孢羟氨苄NONHSCH3COOHOCNH2CH2HO头孢噻吩钠头孢噻吩钠SCH2CONONHSCH2OCOCH3COONaNSOHNCOOKCH3CH3OCCH2酸性酸性结构特点与性质结构特点与性质一、一、NaNa与碱金属与碱金属(Na(Na+ +、K K+ +) )成盐成盐 （一）羧基（一）羧基 易溶于水易溶于水 与有机碱与有机碱( (普鲁卡因普鲁卡因) )成盐成盐 难溶于水难溶于水普鲁卡因普鲁卡因青霉素青霉素C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2NSO1234567（二）（二）手性手性C C 87654321NO

7、S头孢菌素类头孢菌素类 C6 C7青霉素类青霉素类 C3 C5 C6 旋光性旋光性 （三）共轭体系（三）共轭体系 NSO头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系 青霉素类青霉素类 母核无明显母核无明显UVUV 多数有苯环取代基多数有苯环取代基 NOS UVUV（四）（四）内酰胺环内酰胺环 水溶液水溶液 不稳定不稳定 干燥纯净干燥纯净 稳定稳定 不稳定不稳定性因素性因素四元环张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 青霉素类青霉素类 某些氧化剂某些氧化剂酸、碱、青霉素酶酸、碱、青霉素酶（某些金属离子）（某些金属离子） （温度）（温度）降解降解失效失效例例青霉素的降解反应青霉素的降解

8、反应青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑青霉噻唑酰基羟胺酸酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2头孢菌素类头孢菌素类酸、碱、胺类酸、碱、胺类 -内酰胺酶内酰胺酶降解降解失效失效（一）呈色反应（一）呈色反应1. 1. 羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应-内酰胺类内酰胺类呈色呈色羟肟酸衍生物羟肟酸衍生物Fe3+/3H+鉴别试验鉴别试验 二、二、NaOH2 2HClNOHH- - 内酰胺类内酰胺类NSONSCOHNHOHH2NOH HClNSCHNHOFe3+3OH+Fe3+/3 （红、棕、褐）（红、棕、

9、褐）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH22. 茚三酮反应茚三酮反应 - -氨基氨基 -氨基氨基茚三酮茚三酮 蓝紫色蓝紫色3. 双缩脲反应双缩脲反应- - -CONH（开环分解）（开环分解） - 内酰胺类内酰胺类碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜紫紫4. 与重氮苯磺酸反应与重氮苯磺酸反应橙黄色橙黄色重氮苯磺酸重氮苯磺酸- - -5 56 6OHHC（偶合）（偶合）酚羟基酚羟基头孢哌酮头孢哌酮5. 与变色酸与变色酸- -硫酸反应硫酸反应活泼活泼“-CH2-”青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨苄西林氨苄西林HCHOCHSOH- - - 2 22 2”羰基侧链含“羰基侧链含“（分解分解）变色酸变色酸显色显

10、色1. K+、Na+的火焰反应的火焰反应（二）各种盐的反应（二）各种盐的反应 焰色焰色鲜黄色鲜黄色 + 醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼钠四苯硼钠 + Ac白白 K+2. 沉淀反应（青霉素盐）沉淀反应（青霉素盐）遇酸遇酸白白青霉素青霉素青霉素钠青霉素钠青霉素钾青霉素钾緘緘+ +H3. 重氮化重氮化 - - 偶合反应偶合反应 青霉素青霉素普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素+ + + +H重氮化重氮化-偶合反应偶合反应红红 芳伯氨基芳伯氨基4. 与三硝基苯酚反应与三硝基苯酚反应 三硝基苯酚三硝基苯酚二苄基乙二胺二苄基乙二胺苄星青霉素苄星青霉素NaOH

11、二苄基乙二胺二苄基乙二胺三硝基苯酚三硝基苯酚H2OHOH-HCONSOHNCOOHCH3CH3CH2CH2NCH2CH2NHCH2OHNO2O2NNO2CH2NCH2CH2NHCH2光谱法光谱法（三）（三）1、 UV法法样品、分解产物样品、分解产物nm339HA + +苯苯唑唑青青霉霉烯烯酸酸苯苯唑唑青青霉霉素素Cu2+A,Emin,max,%1cm1 光光谱谱图图头孢氨苄头孢氨苄 max = 262nm青霉素青霉素V钠钠 A280nm/A264nm = 1.301.50NOCONHCH3NOSCH3CH3COONaNOCHCH3OCOCNHNCHHCCH3CH3SHCHCOOHpH3.8分子

12、重排分子重排2、IR法法3180cm-1 N-H内酰胺内酰胺 C=O1780cm-13470cm-1 O-H1690cm-1仲酰胺仲酰胺 C=O1250cm-1 C-O以阿莫西林为例以阿莫西林为例色谱法色谱法（四）（四）1、 TLC法法对照品对照法对照品对照法和斑点颜色和斑点颜色比较比较供试品供试品对照品对照品相同条件相同条件fR2、 HPLC法法Rt比较比较供试品供试品对照品对照品相同条件相同条件三、杂质检查三、杂质检查 药物药物 检查项目检查项目 检查方法检查方法 头孢他啶头孢他啶 聚合物聚合物 HPLCHPLC法法 头孢曲松钠头孢曲松钠 头孢哌酮钠头孢哌酮钠 头孢噻肟钠头孢噻肟钠 头孢呋

13、辛酯头孢呋辛酯 有关物质和异构体有关物质和异构体 HPLCHPLC法法 头孢氨苄头孢氨苄 有关物质有关物质 反相反相TLCTLC法法 青霉素钾（钠）青霉素钾（钠） 吸收度吸收度 紫外分光光度法紫外分光光度法 1. 1.头孢他啶聚合物的测定头孢他啶聚合物的测定 固定相：葡聚糖凝胶固定相：葡聚糖凝胶G-10G-10（ 4012040120m m ） 流动相流动相A A：3.5%3.5%硫酸铵的硫酸铵的0.01mol/L0.01mol/L磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液 流动相流动相B B：0.01%0.01%十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠 对照品溶液：头孢他啶对照品对照品溶液：头孢他啶对照品 100100g

14、/mlg/ml1 1）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子用用1mg/ml1mg/ml蓝色葡聚糖蓝色葡聚糖20002000、流动相、流动相A A测定；重测定；重复性用对照品溶液、流动相复性用对照品溶液、流动相B B测定。测定。 N N不低于不低于900900，拖尾因子，拖尾因子0.0.751.5.5，峰面积的，峰面积的RSDRSD应小于应小于5.0%5.0%。2 2）测定方法）测定方法 进样供试液，用流动相进样供试液，用流动相A A；进样对照液，；进样对照液，用流动相用流动相B B。以外标法计算，含头孢他啶聚合。以外标法计算，含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不

15、得超过物以头孢他啶计不得超过0.3%0.3%。2.2.头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查 固定相：固定相：ODSODS 流动相：流动相：0.2mol/L0.2mol/L磷酸二氢铵磷酸二氢铵- -甲醇（甲醇（62:3862:38） 1 1）头孢呋辛酯）头孢呋辛酯2 2- -异构体的制备：头孢呋辛酯对异构体的制备：头孢呋辛酯对 照品照品+ +流动相流动相 头孢呋辛酯头孢呋辛酯2 2- -异构体。异构体。2 2）系统适用性试验：各异构体之间的）系统适用性试验：各异构体之间的R1.5R1.5，以，以 头孢呋辛酯头孢呋辛酯A A异构体计算异构体计算n1500n1500。

16、 3 3）异构体：）异构体： ttR1R1 相对保留时间相对保留时间 r r1212=- 1-=- 1-被测物被测物 ttR2 R2 2-2-标准物标准物异构体异构体 相对保留时间相对保留时间 判断判断B B异构体异构体 0.85 0.85 供试液谱图中供试液谱图中A A异构体的峰面积异构体的峰面积A A异构体异构体 1.0 1.0 与与A A、B B异构体峰面积和之比应异构体峰面积和之比应 为为0.0.480.55.55。 3.3.头孢氨苄中有关物质的检查头孢氨苄中有关物质的检查-反相反相TLCTLC法法 固定相：活化后的硅胶固定相：活化后的硅胶G G板置板置5%5%（V/VV/V）正十四）正十四 烷的正己烷溶液中，展至顶部，凉干烷的正己烷溶液中，展至顶部，凉干 展开剂：展开剂：0.1mol/L0.1mol/L枸橼酸枸橼酸-0.2mol/L-0.2mol/L磷酸氢二磷酸氢二 钠钠- -丙酮（丙酮（120120：8080：3 3） 供试液：本品供试液：本品 50mg/ml 50mg/ml 对照液（对照液（1 1）：本品）：本品 0.5 mg/ml0.5 mg/ml 对照