DNA的提取原理及提取技术学习教案

1、会计学1DNA的提取的提取(tq)原理及提取原理及提取(tq)技术技术第一页，共42页。第1页/共42页第二页，共42页。主要用于分离目的基因。第2页/共42页第三页，共42页。第3页/共42页第四页，共42页。第4页/共42页第五页，共42页。第5页/共42页第六页，共42页。第6页/共42页第七页，共42页。第7页/共42页第八页，共42页。第8页/共42页第九页，共42页。第9页/共42页第十页，共42页。(qi ngj)。第10页/共42页第十一页，共42页。第11页/共42页第十二页，共42页。第12页/共42页第十三页，共42页。第13页/共42页第十四页，共42页。1-2hDNA

2、琼脂糖凝胶；第14页/共42页第十五页，共42页。第15页/共42页第十六页，共42页。第16页/共42页第十七页，共42页。第17页/共42页第十八页，共42页。第18页/共42页第十九页，共42页。第19页/共42页第二十页，共42页。第20页/共42页第二十一页，共42页。 组份组份 Tris-HCl （pH8.0）EDTA （pH8.0） NaCl CTAB-巯基乙醇巯基乙醇 终浓度终浓度 100 mM 20 mM 1.4M2%(W/V)0.1%（V/V）使）使用前加入用前加入Tris-HCl （pH8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； Tri

3、s (三羟甲基氨基甲烷三羟甲基氨基甲烷 )EDTA螯合螯合Mg2+或或Mn2+离子，抑制离子，抑制DNase活性；活性；NaCl 提供一个高盐环境，使提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在充分溶解，存在(cnzi)于液相中；于液相中；CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除第21页/共42页第二十二页，共42页。 组份组份 Tris-HCl （pH8.0）EDTA （pH8.0）NaCl CTAB PVP40-巯基乙

4、醇巯基乙醇 终浓度终浓度 100 mM 20 mM1.4M3%(W/V)5%(W/V)2%（V/V）使）使用前加入用前加入vPVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚形成一种不（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染中酚的污染(wrn)；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。第22页/共42页第二十三页，共42页。混匀。第23页/共42页第二十四页，共42页。第24页/共42页第二十五页，共42页。第25页/共42页第二十六页，共42页。第26页/共42页第二十七页，

5、共42页。第27页/共42页第二十八页，共42页。CTAB法流程图法流程图植物植物(zhw)材料材料裂解裂解(li ji)液液上层上层(shngcng)溶液溶液液氮研磨液氮研磨抽提抽提细胞裂解细胞裂解干燥溶解干燥溶解离心洗涤离心洗涤酒精沉淀酒精沉淀DNA溶液溶液第28页/共42页第二十九页，共42页。第29页/共42页第三十页，共42页。第30页/共42页第三十一页，共42页。第31页/共42页第三十二页，共42页。dun)与变性蛋白质和细胞碎片与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀，而复性的超螺旋结合形成沉淀，而复性的超螺旋质粒质粒DNA分子则以溶解状态存在分子则以溶解状态存在液相中，从而可通过离心将两者液相中，从而可通过离心将两者分开。分开。第32页/共42页第三十三页，共42页。n作用：酸性下质粒作用：酸性下质粒DNADNA复性，变复性，变性蛋白、线性性蛋白、线性DNADNA沉淀。沉淀。第33页/共42页第三十四页，共42页。第34页/共42页第三十五页，共42页。第35页/共42页第三十六页，共42页。第36页/共42页第三十七页，共42页。第37页/共42页第三十八页，共42页。第38页/共42页