实验九卵磷脂的提取和鉴定ppt课件

1、实验九实验九 卵磷脂的提取、纯化和鉴定卵磷脂的提取、纯化和鉴定20192019年年1212月月n是细胞膜磷脂双分子层的重要成分。是细胞膜磷脂双分子层的重要成分。 n卵磷脂又称磷脂酰胆碱，是甘油磷脂的一种。在动植物卵磷脂又称磷脂酰胆碱，是甘油磷脂的一种。在动植物体内均有分布，在动物的脑、精液、心、肝、肾上腺和体内均有分布，在动物的脑、精液、心、肝、肾上腺和卵细胞中含量较多，蛋黄中含量可达卵细胞中含量较多，蛋黄中含量可达8-108-10。n其结构式为：其结构式为： 胆碱胆碱HO 物质提取、纯化受到多种因素的影响，如抽提物的种类及其配比、抽提条件温度、时间等都能影响提取的结果。这种多因素的试验可以通

2、过正交法，即用一特制的表格正交表来安排试验，计算和分析试验结果。这样就能通过少量试验取得较好的效果。 本实验运用正交法抽提物的种类及其配比、时间温度和料液比这4个因素对卵磷脂提取和纯化的影响，并求得在什么样的条件下可以达到最佳的试验效果。正交法实验设计正交法实验设计水平水平影响因素影响因素乙醇乙醇 乙醚乙醚温度温度时间（时间（min）料液比料液比15 14101 424 125201 533 160301 6表表1 1 抽提物、温度、时间和料液比抽提物、温度、时间和料液比4 4因素因素3 3水平水平表表3 L9 3 L9 表表按一般方法，如对4个因素3个水平的各种搭配都要考虑，共需做3*3*3

3、*3=81次试验，而用正交表只需做9次试验，即选用L9表(L是正交表的代号，下标数字表示试验次数)。试验号试验号影响因素影响因素试验结果试验结果乙醇乙醇 乙醚乙醚温度温度时间（时间（min）料液比料液比11 5 11 41 101 1 421 5 12 252 202 1 531 5 13 603 303 1 642 4 11 42 203 1 652 4 12 253 301 1 462 4 13 601 102 1 573 3 11 43 302 1 583 3 12 251 103 1 693 3 13 602 201 1 4I （I水平试验结果总合）水平试验结果总合）II （II水平试

4、验结果总合）水平试验结果总合）III（III水平试验结果总合）水平试验结果总合）I/3II/3III/3级差级差表表4 试验安排试验安排将本试验的4个因素依次放在L9表的第1，2，3，4列，再将各列的水平数用该列因素相应的水平写出来，就得到上表的试验安排。 （二薄层层析（二薄层层析 薄层层析薄层层析TLCTLC是一种微量而快速的层析方法。是一种微量而快速的层析方法。其层析是在吸附剂固相支持物均匀涂布的的薄其层析是在吸附剂固相支持物均匀涂布的的薄层上进行的，故称薄层层析。而待分析的样品，是层上进行的，故称薄层层析。而待分析的样品，是点加到薄层板的一端，然后将该端浸入适宜的展层点加到薄层板的一端，

5、然后将该端浸入适宜的展层剂中，在密闭的层析缸中展层。剂中，在密闭的层析缸中展层。 由于各种物质的结构和性质的不同，其在吸附由于各种物质的结构和性质的不同，其在吸附剂表面的吸附能力各异。吸附力大的易被吸附剂吸剂表面的吸附能力各异。吸附力大的易被吸附剂吸附，而较难被展层剂所解吸。吸附力小的则不易被附，而较难被展层剂所解吸。吸附力小的则不易被吸附剂吸附，而易被展层剂携带至较远的距离。这吸附剂吸附，而易被展层剂携带至较远的距离。这样，各种物质在吸附剂和展层剂之间反复多次的被样，各种物质在吸附剂和展层剂之间反复多次的被吸附与解吸附，就表现出不同的迁移率而得以分离，吸附与解吸附，就表现出不同的迁移率而得以

6、分离，并可以通过与显色剂的显色反应而得到鉴定与区分。并可以通过与显色剂的显色反应而得到鉴定与区分。（一卵磷脂的提取和纯化（一卵磷脂的提取和纯化1、实验材料：鸡蛋黄、实验材料：鸡蛋黄2、仪器：恒温水浴锅、仪器：恒温水浴锅 蒸发皿蒸发皿 漏斗漏斗 磁力搅拌磁力搅拌器器 天平天平3、试剂：、试剂： 95乙醇乙醇 乙醚乙醚 丙酮丙酮三、实验材料、仪器和试剂三、实验材料、仪器和试剂1、实验材料：提取的卵磷脂、实验材料：提取的卵磷脂2、仪、仪 器：器： 电热鼓风干燥箱、电热鼓风干燥箱、 层析玻璃板、层析玻璃板、 层析层析 缸、吹风机、小型喷雾器缸、吹风机、小型喷雾器 。3、试、试 剂：剂： （1硅胶硅胶-

7、G； （20. 2%羧甲基纤维素钠溶液；羧甲基纤维素钠溶液； （3展层剂展层剂 ：氯仿：氯仿 甲醇甲醇 水水(65 25 4) ； （4显色剂：显色剂：1% 碘液。碘液。（二卵磷脂的薄层层析（二卵磷脂的薄层层析1 1、卵磷脂的粗提、卵磷脂的粗提 蛋黄蛋黄10g10g放入洁净的带塞三角瓶中，加入放入洁净的带塞三角瓶中，加入95%95%乙醇乙醇40ml40ml，搅拌，搅拌15min15min后，静置后，静置15min15min；然后加入；然后加入10ml10ml的乙醚，搅的乙醚，搅拌拌15 min15 min后，静置后，静置15min15min；过滤；滤渣进行二次提取，加入；过滤；滤渣进行二次提取

8、，加入乙醇与乙醚乙醇与乙醚( (体积比为体积比为3 3：1)1)的混合液的混合液30ml30ml，搅拌、静置一定，搅拌、静置一定时间；第二次过滤，合并二次滤液，加热浓缩至少量，加入时间；第二次过滤，合并二次滤液，加热浓缩至少量，加入一定量丙酮除杂，卵磷脂即沉淀出来，即得到卵磷脂粗品。一定量丙酮除杂，卵磷脂即沉淀出来，即得到卵磷脂粗品。 四、实验步骤四、实验步骤（一卵磷脂的提取（一卵磷脂的提取 2 2卵磷脂的纯化卵磷脂的纯化 取一定量的卵磷脂粗品，取一定量的卵磷脂粗品，用无水乙醇溶解，得到约用无水乙醇溶解，得到约10% 10% 的的乙醇粗提液，加入相当于卵磷脂乙醇粗提液，加入相当于卵磷脂质量的质

9、量的10% 10% 的的ZnCl2ZnCl2水溶液，室水溶液，室温搅拌温搅拌0.5h0.5h；分离沉淀物，加入；分离沉淀物，加入适量冰丙酮适量冰丙酮44）洗涤，搅拌）洗涤，搅拌1h1h，再用丙酮反复研洗，直到丙，再用丙酮反复研洗，直到丙酮洗液为近无色止，得到白色腊酮洗液为近无色止，得到白色腊状的精卵磷脂；枯燥；称重。状的精卵磷脂；枯燥；称重。（二卵磷脂的薄层层析（二卵磷脂的薄层层析1、调浆：称取硅胶、调浆：称取硅胶-G 4.5g 烧杯烧杯 12ml 0. 2%羧羧甲基纤维素钠溶液甲基纤维素钠溶液用玻璃棒调匀搅拌为浆状液。用玻璃棒调匀搅拌为浆状液。2、涂布：取洁净、干燥玻璃板一块、涂布：取洁净、

10、干燥玻璃板一块下衬一张白纸下衬一张白纸在桌面上放平在桌面上放平用烧杯将浆状物均匀倒在玻璃板上，用烧杯将浆状物均匀倒在玻璃板上，从一端开始，保持均匀一致，涂布面积从一端开始，保持均匀一致，涂布面积1 4/5 。3、枯燥：在室温下凉干、枯燥：在室温下凉干2分钟分钟60干燥箱烘干燥箱烘30分钟。分钟。4、活化：将干燥箱升温至、活化：将干燥箱升温至120 ，活化，活化30分钟后，关分钟后，关闭电源，当玻璃板面温度降至不烫手时取出。闭电源，当玻璃板面温度降至不烫手时取出。5 5、点样：样点距玻璃板一端下缘、点样：样点距玻璃板一端下缘1cm 1cm ，相互间隔，相互间隔1 11.2 cm 1.2 cm ；

11、每位点重复点五次，每次用冷风吹干；每位点重复点五次，每次用冷风吹干后再点，每次点样直径不超过后再点，每次点样直径不超过2mm 2mm 。6 6、展层：在层析缸中加入展层剂、展层：在层析缸中加入展层剂0.5cm0.5cm深，加盖平深，加盖平衡衡3030分钟，将点样端浸入，密闭展层分钟，将点样端浸入，密闭展层10-30min10-30min。后。后取出薄层板，标出展层剂前沿位置，用电吹风热风取出薄层板，标出展层剂前沿位置，用电吹风热风将薄层板吹干。将薄层板吹干。7 7、显色：用喷雾器向薄层板上均匀喷洒、显色：用喷雾器向薄层板上均匀喷洒1%1%碘液溶碘液溶液，热风吹干至色斑显现。液，热风吹干至色斑显现。1、卵磷脂收率、卵磷脂收率 卵磷脂收率卵磷脂收率 = 卵磷脂粗品重量卵磷脂粗品重量 / 蛋黄重量蛋黄重量100%2、计算各组分的、计算各组分的Rf 值值3、判断卵磷脂粗提物的组分、判断卵磷脂粗提物的组分 四种磷脂标准品的f值分别为:溶血卵磷脂0.18；神经鞘磷脂0.33；卵磷脂0.65；磷脂酰乙醇胺0.96 OABCDO1O2E六、思考题：六、思考题： 1 1、简述卵磷脂的生物学功能。、简述卵磷脂的生物学功能。2 2、磷脂酰胆碱卵磷脂），磷脂酰乙醇、磷脂酰胆碱卵磷脂），