酶型- 法医学ppt课件

1、LOGO 酶型酶型 Isoenzyme) 李建金李建金中山大学中山医学院法医人证中山大学中山医学院法医人证教研室教研室第一节第一节 概述概述 v酶型的定义酶型的定义v 又称同工酶：又称同工酶：分子构造不同，但催分子构造不同，但催化同终身化反响的一化同终身化反响的一组酶。组酶。v 或酶的多态性定义：或酶的多态性定义： v 同同DNADNA。第一节第一节 概述概述 酶型的分类酶型的分类多位点基因控制的同工酶：如多位点基因控制的同工酶：如 LDH,PGMLDH,PGM。单位点复等位基因控制的同工酶：如单位点复等位基因控制的同工酶：如 EAPEAP，EsDEsD。遗传变异体同工酶：点突变所致。如遗传变

2、异体同工酶：点突变所致。如G6PDG6PD。次级同工酶修饰同工酶：脱氨、乙酰化次级同工酶修饰同工酶：脱氨、乙酰化等所致。等所致。第一节第一节 概述概述 酶的一些特点酶的一些特点 酶的本质是蛋白质酶的本质是蛋白质 酶促反响的高度专注性：催化特定的底酶促反响的高度专注性：催化特定的底物。物。 酶反响的最适酶反响的最适PHPH 酶反响的最适温度酶反响的最适温度 酶多为水溶性酶多为水溶性 酶多不耐热酶多不耐热第一节第一节 概述概述 电泳检测酶型的根本原理电泳检测酶型的根本原理传统电泳：等电点、分子大小。传统电泳：等电点、分子大小。等电聚焦电泳：等电点。等电聚焦电泳：等电点。影响电泳的要素：电场强度、缓

3、冲液影响电泳的要素：电场强度、缓冲液PH值、值、离子强度、胶浓度、电泳时间、产热等。离子强度、胶浓度、电泳时间、产热等。红细胞酸性磷酸酶红细胞酸性磷酸酶Erythrocyte Acid Erythrocyte Acid Phosphatase.EAP)Phosphatase.EAP) 概略 EAPACP1、PAP、ACP2 EAP是第一个被报道具有多态的酶。 单亚基构造，基因定位于2P25， 等电点为5-7，酶反响的最适PH为5.5。 分型 1963年Hopkinson), Nature杂志上报导EAP可分为A、BA、B、CA、CB五种型。进展了家系调查，有三个共显性等位基因：P(A、PB、P

4、C。 在东方人群中，常见的基由于：PA、PB；常见的表型为：A、BA、B。 另有多个稀有基因的报导。 EAP表型的检测 1、1%琼脂糖凝胶电泳 2、聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳 显色： 4-甲基伞形酮磷酸盐EAP4-甲基伞形酮兰色荧光磷酸葡萄糖变位酶磷酸葡萄糖变位酶Phosphoglucomutase,PGM)Phosphoglucomutase,PGM) PGM1 PGM1其基因在其基因在1 1号染色体：等电点为号染色体：等电点为 5-75-7，最适，最适pH8pH8 PGM2 PGM2其基因在其基因在4 4号染色体号染色体 PGM3PGM3其基因在其基因在6 6号染色体：胎盘号染色体：胎盘

5、PGM4PGM4其基因未详：乳汁中其基因未详：乳汁中 红细胞中只需红细胞中只需PGM1PGM1与与PGM2PGM2，活性各半，活性各半分型分型淀粉凝胶电泳，淀粉凝胶电泳，PGMPGM可分出可分出a,b,c,d,e,f,ga,b,c,d,e,f,g七条带。七条带。 e,f,ge,f,g几乎几乎每人都一样。分为三型：每人都一样。分为三型：PGM1PGM1a,c)a,c)、PGM2PGM2b,d)b,d)，PGM2-PGM2-1(a,b,c,d)1(a,b,c,d)。 19651965年年Hopkinson),Hopkinson),发现发现e,f,ge,f,g带亦存在变异。前者称为带亦存在变异。前者

6、称为 PGM1PGM1，由由PGM1PGM11 1、PGM2PGM22 2二个共显性等位基因控制，三种常二个共显性等位基因控制，三种常见表型。后者称为见表型。后者称为PGM2PGM2。$ 1976 1976年年Bark)Bark)，用等电聚焦电泳，用等电聚焦电泳，将将PGM1PGM1分出十种常见的表型。分出十种常见的表型。 分别由分别由PGM1PGM11+1+、PGM1PGM11-1-、PGM1PGM12+2+、PGM1PGM12-2-四个共显性等位基因控制。四个共显性等位基因控制。PGM1PGM1表型的检测表型的检测1、淀粉凝胶电泳2、聚丙稀酰胺凝胶 等电聚焦电泳 G1PPGM、G16PNA

7、DP2+MTTPMS6PG+NADP2G6PG6PD、NADP脂酶脂酶DEsteraseD,EsD脂酶共有二十余种，可分为特异性脂酶和非特异性脂酶。红细胞中的脂酶有A、B、C、D四种，只需EsD具有多态性。等电点为4-6，酶反响的最适PH5.5。分型： 1973年Hopkinson，分为三种常见表型， 由ESD1、ESD2二个共显性等位基因控制。ESD表型的检测表型的检测 1、1%琼脂糖凝胶电泳 2、等电聚焦电泳4-4-甲基伞形酮醋酸盐甲基伞形酮醋酸盐兰色荧光兰色荧光4-4-甲基伞形酮甲基伞形酮乙二醛酶IGlyoxalaseI,GLOI)双亚基构造，分布广泛，红细胞中活性最高。等电点为4.3左

8、右；反响 最适PH为6.5。基因位点与HLA基因毗邻6P213， 1975年Kompf报导，三种常见表型。由GLOI1、GLOI2二个共显性等位基因控制。分型GLOI表型的检测l琼脂糖/可溶性淀粉混和凝胶电泳l显色：l 甲基乙二醛GLOI、复原型GSH-氧化型GHS。l 淀粉+碘-兰色复原型GSH可使兰色褪掉。谷丙转氨酶Glutamic Pyruvic Transaminase GPTl催化谷氨酸与丙氨酸互换。l酶反响的最适PH约为8l双亚基构造。三种常见表型，由GPT1、GPT2二个共显性等位基因控制。l混合淀粉凝胶电泳显色：l 1、丙氨酸GPT-谷氨酸GLD、NADP-NADPH2MTT、PMS-兰色。l 2、丙氨酸GPT-谷氨酸+丙酮酸LDH、NADH-乳酸+NAD无荧光。1、酶活性丧失不可逆。2、潮湿环境下