皂角刺皂苷对大鼠前列腺增生模型影响的实验研究

1、皂角刺皂苷对大鼠前列腺增生模型影响的实验研究 09-09-06 16:58:00 作者：张长城，袁丁编辑：studa20【摘要】 目的探讨中药皂角刺提取物皂角刺皂苷对前列腺增生(BPH)的影响及作用机制。方法将40只SD大鼠去势7d后皮下注射丙酸睾酮5 mg/kg，同时实验组灌胃给予皂角刺皂苷溶液4，2 mg/kg，癃闭舒组灌胃给予癃闭舒胶囊100 mg/kg。于给药30 d后处死，观察前列腺重量和组织结构改变，并通过免疫组化法检测PCNA和bFGF表达的变化。结果实验组大鼠前列腺重量、PCNA指数及bFGF表达水平均低于模型对照组，其中尤以皂角刺皂苷大剂量组最显著(P0.01)。皂角刺皂苷大

2、剂量组与癃闭舒组比较差异亦有显著性，而皂角刺皂苷小剂量组与癃闭舒组比较无显著差异。结论皂角刺能明显抑制模型大鼠的BPH，其机制可能是通过抑制前列腺细胞的增殖及减少前列腺组织中bFGF的表达而实现的。 【关键词】 皂角刺 皂角刺皂苷 前列腺增生Abstract：ObjectiveTo study the effect of Chinese Honeylocust Spine on benign prostatic hyperplasia(BPH) and its mechanism.Methods Forty ovariectomized SD rats were administered te

3、stosterone propionate 5mg/kg subcutaneously. At the same time, saponin high and low dose groups were treated respectively with saponin fluid 4mg/kg and 2mg/kg by oral administration and Longbishu Capsule(LBS) group with LBS 100mg/kg. The rats were decapitated after 30 days, the weight of prostate an

4、d lightmicroscopic examination were undertaken, PCNA index and expression of bFGF were analyzed by means of immunochemical technology. ResultsThe weight of prostate, PCNA index and the content of bFGF in three medicated groups were significantly less than those of the model group, especially in sapo

5、nin high dose group. The difference between saponin high dose group and LBS group was also remarkable. But it was not between saponin low dose and LBS group. ConclusionSaponin could suppress the benign prostatic hyperplasia. The mechanism might be the inhibition of cell hyperplasia of prostate and t

6、he expression of bFGF.Key words：Chinese Honeylocust Spine; Benign prostatic hyperplasia; Experimental study 中药皂角刺为植物皂角树的棘，是一味传统的中药材，具有穿透肿毒、破坚消积、消肿排脓等功效。现代研究表明皂角刺含有皂苷、黄酮、酚类、氨基酸等多种生物活性成分，具有抗凝、免疫调节、抗肝纤维化等作用。祖国医学史上很早就有用皂角刺治疗癃闭的记载，现代中医运用皂角刺治疗前列腺增生亦取得了较好的疗效。但对皂角刺治疗前列腺增生的主要活性成分及可能作用机制还未见研究，我们拟通过研究皂角刺皂苷对前列腺

7、增生模型的作用，探讨皂角刺治疗前列腺增生的主要活性成分及可能机制。1 材料与方法1.1 材料丙酸睾酮注射液，2 ml/支，含丙酸睾酮25 mg/ml，由天津氨基酸公司生产(批号050419)；皂角刺皂苷由本实验室提取。癃闭舒胶囊，0.3 g/粒，石家庄科迪药业有限公司生产(批号050401); PCNA单克隆抗体及LSAB试剂盒由Dako公司提供；bFGF抗体由美国Sigma公司生产；分析天平；双目光学显微镜；德国Leica多媒体彩色病理图文分析系统。1.2 分组及处理40只健康雄性SD大鼠，预养3 d，编号称重，均腹腔注射0.2%的戊巴比妥钠(1 ml/kg)麻醉，无菌经腹腔摘除双侧睾丸，恢

8、复7d后再随机分为睾酮模型组，皂角刺皂苷小剂量组、皂角刺皂苷大剂量组、癃闭舒组，每只大鼠每天均皮下注射丙酸睾酮5 mg/kg，同时，皂角刺皂苷大剂量组和皂角刺皂苷小剂量组分别每天给予皂角刺皂苷溶液40，20 mg/kg灌胃，癃闭舒组给予癃闭舒胶囊100 mg/kg灌胃，睾酮组给予等体积的生理盐水灌胃，30 d后称重处死，摘取大鼠前列腺并用分析天平称重，同时制作光镜及免疫组化标本。1.3 检测指标及方法1.3.1 前列腺指数(PI)的计算 PI前列腺重量(mg)/大鼠体重(g)1.3.2 PCNA测定采用LSAB法，将前列腺组织常规石蜡包埋，切片，脱蜡后放入柠檬酸(pH6.0)缓冲液中，置微波炉

9、处理(170 W加热5 min)，加一抗(稀释度为180)4过夜，二抗和三抗在湿盒孵育1 h，各步间均用PBS洗片，细胞核染成棕黄色为PCNA阳性细胞，每标本上数100个细胞，计算阳性细胞数，算出PCNA指数。1.3.3 bFGF测定切片常规脱蜡，ABC法染色，滴加bFGF抗体，一抗滴度为1100；PBS洗后滴加二抗，滴度为1200；三抗滴度1200；DAB显色，以二甲苯透明，最后以光学树脂胶封固，备检测用。采用多媒体彩色病理图文分析系统，对每张免疫组化切片进行bFGF显微图像定量分析。1.3.4 病理切片每例标本均进行常规H.E染色，光镜下观察组织病理学变化。1.4 统计学处理运用SPSS1

10、0.0统计软件，采用最小显著差法(LSD)进行数据统计。 09-09-06 16:58:00 作者：张长城，袁丁编辑：studa202 结果2.1 各实验组大鼠PI及PCNA指数的影响 各治疗组均能减小前列腺重量，降低PI及PCNA指数，与睾酮模型组比较，差异均有显著意义，其中尤以皂角刺皂苷大剂量组最明显(P0.01) 。见表1。表1 各组对实验大鼠PI和PCNA的影响(略)2.2 各实验组前列腺组织中bFGF表达水平变化 从表2可以看出，平均等效直径及平均阳性单位各组无显著差异，提示阳性颗粒总数的比较有可比性。各治疗组均能降低增生的前列腺组织中bFGF阳性颗粒总数，与模型组比较差异均有显著意

11、义(P0.01或P0.05)。皂角刺皂苷大剂量组与癃闭舒组比较差异也有显著性，但皂角刺小剂量组与癃闭舒组比较差异无显著意义。表2 各组对实验大鼠前列腺组织中bFGF表达的影响(略)2.3 组织学变化睾酮模型组镜下可见腺体密集，腺上皮呈复层或假复层，部分呈乳头状突入腔内，腺腔变窄，间质血管增多，充血水肿、有钙化点，结缔组织增生；皂角刺皂苷大剂量组镜下见腺上皮呈单层柱状，腔内分泌物明显减少，间质仅有少许结缔组织增生，小剂量组和癃闭舒组镜下所见基本相似,腺上皮呈单层柱状或高层柱状并存，少数层次增加，呈乳头状向腔内突出。3 讨 论有关BPH的发病机制，目前尚不完全明了。其相关学说包括雄激素学说、胚胎重

12、唤醒学说、干细胞学说等1，然而，任何一种学说，其细胞增殖的机制都离不开细胞生长因子的参与。近几年研究表明，碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）是前列腺组织中发现的主要生长因子，在前列腺增生中起着重要作用，并能促进人类前列腺组织中几乎所有细胞的有丝分裂2。研究发现，在增生的前列腺组织内，bFGF主要分布在尿道周围的前列腺组织内，这是因为排尿、射精或感染导致尿道周围组织损伤，导管上皮细胞、基底细胞基底膜释放bFGF增多，其通过自分泌作用使间质中的成纤维细胞增殖，或通过旁分泌作用使腺上皮细胞增生3。 本实验研究表明，皂角刺提取物皂角刺皂苷具有明显抑制BPH的作用。实验结果显示，睾酮组大鼠前列腺组织中b

13、FGF水平明显高于其他组，而皂角刺皂苷组bFGF水平明显下降，说明皂角刺皂苷能抑制前列腺组织中bFGF的释放。由于bFGF能刺激上皮或间质细胞增殖，故睾酮组镜下可见腺体出现复层上皮，腺乳头增多，腺腔变窄，间质充血、水肿、结缔组织增生，而皂角刺大、小剂量组及癃闭舒组则见腺上皮呈单层或少许呈复层，腺乳头及间质结缔组织增生明显减少。近几年来，细胞凋亡在BPH发病中的作用机制逐渐受到人们的重视,认为BPH是由于细胞凋亡减少，增殖增加，凋亡与增殖失衡所导致。PCNA为一种36kD的酸性核蛋白，其作为DNA聚合酶的辅酶参与细胞增殖过程中DNA的合成，在细胞周期的G1期开始增加，S期含量最高，G2期开始下降

14、，M期含量最低4。由此可见，PCNA在细胞增殖中发挥了重要作用，现已公认为细胞增殖的标记物5。本实验研究表明，睾酮组大鼠前列腺组织PCNA表达明显增高，而皂角刺大、小剂量组、癃闭舒组中PCNA的表达则降低，其中尤以皂角刺皂苷大剂量组作用最为明显。综上所述，皂角刺皂苷不仅能抑制肿瘤细胞的生长，而且能明显降低模型大鼠前列腺指数，降低前列腺组织中的PCNA和bFGF的表达,从而对前列腺增生过程中细胞增殖起抑制作用，因此皂角刺皂苷可能是皂角刺抗前列腺增生的主要活性成分。【参考文献】 1祖会之前列腺增生病因极为复杂J.首都医药，2006，17:50.2Sherwood E R, Fong C, Lee

15、C, et al. Basic fibroblast growth factor: apotential mediator of stromal growth in the human prostateJ. Endorcrinology，1992，130: 2955.3Sinowatz F, Schams D, Einspanier R, et a1. Cellulor localization of fibroblast growth factor2 in benign prostatic hyperplasiaJ. Histol Histopathol， 2000；15 (2) : 4754Yibwn Ye Y, Kimura H, Fushida S, et al. Analysis of