荟生源两种组方对小鼠经口急性毒性实验

1、荟生源两种组方对小鼠经口急性毒性实验荟生源两种组方对小鼠经口急性毒性试验1959202111-0072-04Abstract：Objective To evaluate the safety of Huishengyuan and its clinical safety， so as to provide experimental basis for the development of functional food and the safe use of drugs in clinic.Methods 26 SPF Kunming mice were randomly divided in

2、to three groups： experimental group 1 n =10， experimental group n=10 and blank group n=6.Both male and female. In the experimental group 1， 0.96 g + normal saline 0.17 ml configured according to the maximum solubility of the formula 1 and the effective amount is close to 200 times the daily dosage o

3、f the adult was administered to the experimental group 1 and the experimental group 2 was 0.4 g+0.63 mlof physiological saline. The maximum solubility of Formulation 2 was configured，and the effective amount was close to 200 times of the daily standard dose of adults. The actual gastric perfusion vo

4、lume was 0.8 ml; the blank group was intragastrically administered with 0.8 ml of normal saline， and was continuously observed for 7 d after gavage.Compare the general conditions， death， gross anatomy and microscopic features of the 3 groups.Results The body weight， water consumption and activity of

5、 the three groups were normal， the difference was not statistically significant P0.05. There was no mouse death in each group during the experiment.Gross dissection observed the mice without degeneration and congestion. Abnormal phenomena such as edema and necrosis; the morphology， structure and siz

6、e of liver and kidney cells of the mice in the control group were normal， no necrosis and no pathological changes. The morphology， structure and size of hepatocytes in experimental group 1 were normal， and the structure of hepatic lobule was normal. In experimental group 2， 1 case of hepatocyte cyto

7、plasmic loosening occurred. The renal tubular structure of all animals in each group was normal， the boundary between cortex and medulla was clear， and there was no lymphocytic infiltration.Conclusion Huishengyuan two kinds of prescription have no acute toxicity to mice， and have good safety. Key wo

8、rds：Huishengyuan;Oral acute toxicity test;Mouse根據国家卫生计生委中国癌症防治三年行动打算20212021年统计显示，每年我国新发癌症病例约为310万。化疗是治疗肿瘤主要手段之一，对肿瘤患者的治疗有着明显效果，化疗所带来的不良反应常让患者的依从性降低，尽管患者的生存时间得到延长，但化疗相关不良反应却影响着患者的生活质量1，化疗所导致化疗相关性呕吐chemotherapy-induced nausea and vomiting，CINV是最常见的胃肠道反应。其发生率为65%85%，顺铂致吐率几乎达100%2，3。西南医科大学护理器械研发试验室自主研制

9、的“荟生源产品，是根据中医“药食同源特性，结合现代微生态讨论进展而研制的产品，其依据化疗患者体质的不同，有两种不同的组方供患者使用。本试验主要通过小鼠对荟生源两种组方耐受性来验证其毒性作用，以进一步了解其生物学活性，为更好的应用于制药业和临床治疗提供根据。1材料与方法1.1试验动物及分组 SPF级昆明种小白鼠Kunming mice，KM小鼠38只预试验12只，正式急性毒性试验26只，周龄为68周，体重1822 g，由西南医大学试验动物中心提供答应证号：SCXK川2021-17。动物分组：将26只小鼠，随机数字表法分为3组，其中试验组1和试验组2，各10只，空白组6只，均雌雄各半，编号分笼饲养

10、。本讨论通过西南医科大学动物试验伦理审查，遵照动物福利进行试验，饲养温度2025，湿度40%70%。试验中动物均单笼饲养，正常饮水进食。1.2试验用药 荟生源配方1生姜、D参、藿香等，褐色水煎剂提取液，由西南医科大学护理器械研发试验室提供;荟生源配方2生姜、低聚甘露糖、竹茹等，白色粉末，由西南医科大学护理器械研发试验室提供。依据荟生源的两种组方，配制两种药剂，供试验组1和试验组2使用。生理盐水，四川美大康佳乐药业有限公司生产。1.3试验仪器 电子秤、1 ml注射器、灌胃针、手术器械、眼科镊、刀片、乳胶手套、薄膜手套、棉签、口罩、滤纸、酒精、安尔碘、甲醛溶液、无毒小鼠笼。1.4试验方法1.4.1

11、预试验 参照化学药物急性毒性试验技术指导原则4进行，取体重1822 g的小鼠12只，随机分为试验组和空白组，每组6只，雌雄各半。第1次灌胃前禁食不禁水12 h，试验组1灌胃给药浓度为1.2 g/ml，试验组2灌胃给药浓度为1 g/ml，给药容积均为40 ml/kg，空白组灌入等量的生理盐水，给药后观看小鼠7 d内毒性反应和死亡状况。依据动物急性毒性试验观看项目表1记录各组动物的一般生理状况、行为活动、进食、有无中毒状和有无动物死亡，试验结束后将小鼠用颈椎脱臼致死法处死进行解剖学检查。结果未见中毒表现，亦无小鼠死亡。因1.2 g/ml浓度和1 g/ml浓度已经分别到达两种组方化学药物最大给药浓度

12、20 g/kg和48 g/kg，受小鼠胃容量限制，未测定出半数致死量LD50，因此需做最大给药量测定。1.4.2急性毒性试验最大给药量测定 依据预试验测不到LD50，另取剩余KM小鼠26只，其中试验组1、试验组2各10只，空白组6只，雌雄各半。与预试验试验步骤一致，试验前禁食不禁水 12 h，试验组1以荟生源0.96 g+生理盐水0.17 ml按配方1最大溶解度进行配置，给药浓度为1.2 g/ml，有效量接近于成人每日服用量200倍灌胃、试验组2以荟生源0.4 g+生理盐水0.63 ml按配方2最大溶解度进行配置，给药浓度为1 g/ml，有效量接近成人每日标准服用量200倍，两组实际灌胃量均为

13、0.8 ml;空白组以生理盐水0.8 ml灌胃，三组给药容积均为40 ml/kg。灌胃次日后每日上、下午各观看1次，试验条件同前，连续观看7 d。第8天将小鼠用颈椎脱臼致死法处死，取出各组小鼠肝、肾脏，随后在生理盐水中轻轻震荡除去内容物，用10%甲醛固定液固定24 h以上，将组织包埋、切片、HE染色。1.5观看指标1.5.1一般状况 依据动物急性毒性试验观看项目记录动物的外观、饮食、行为、活动度5、体重、有否死亡等状况。1.5.2肝、肾脏 肉眼观看有无肿胀、囊肿、萎缩、出血、水肿、颜色异样、粘连、硬化等异样转变;镜下观看各组小鼠体重以及肝脏、肾脏病理学改变。1.6统计学处理 接受SPSS 20

14、.0，对3组小鼠体重、饮水量、进食量进行单因素方差分析，计量资料以xs表示，P0.05，试验操作对小鼠体重无影响，见表2。2.2小鼠肝、肾脏功能观看2.2.1肉眼观看 未发觉器官有肿胀、囊肿、萎缩、出血、水肿、颜色异样、粘连、硬化等异样转变，与空白对比组比较，差异无统计学意义P0.05，见表3。2.2.2 镜下观看 病理切片结果图1除试验组2中有1例肝脏有轻微转变外主要表现为肝细胞胞浆疏松化较为明显，但未见肝细胞坏死及肝小叶结构的转变图2，其余全部小鼠肝脏组织结构、细胞形态正常，肝细胞未见明确变性、坏死转变，间质无明显充血，也未见炎性细胞浸润;全部小鼠双侧肾脏肾小球、肾小管均未见明确形态、结构

15、的转变，未见细胞变性、坏死和脱落，肾小管内无管壁，间质无炎性细胞浸润。 2.3最大给药量 因受小鼠胃容量限制，此次小鼠灌胃给药最大容量为0.8 ml。配方1溶解于水内最大浓度1.2 g/ml，实际灌胃0.8 ml内含药物0.96 g，以每只小鼠标准体重20 g为准，人体标准体重60 kg为准，对人体的给药量为2.88 kg;同配方一计算方法，配方2溶解于水内最大浓度1 g/ml，实际灌胃0.8 ml内含药物0.8 g，对人体的给药量为2.4 kg。3商量化疗性恶心呕吐对患者生活质量影响大，并会影响患者治疗依从性6，目前针对化疗性恶心呕吐在西医上多接受药物治疗，如昂丹司琼、托烷司琼、阿扎司琼、帕

16、洛诺司琼等7-10，其治疗效果好，对急性呕吐具有强有效的止吐作用，但有毒副作用，易导致患者产生头晕、头痛等不良反应，对预期性恶心呕吐操纵不佳，对延迟性呕吐操纵不佳，单独使用有效率不高，需联合其他止吐药物11。中医治疗方法多样，如：中药汤剂，如旋覆代赭汤、六君子汤、加味小半夏汤等，效果好，可增添患者免疫力，但熬制携带不便，味苦难喝，患者不易接受12-14;穴位治疗，可针刺获敷贴足三里穴位、大椎、中脘、曲池、内关，具有健脾和胃、降逆止吐之效，但治疗不便，会增加病人苦痛15，16;放松训练，有讨论接受放松训练及肌肉渐进放松训练可缓解化疗患者呕吐发生率及降低其频次，在肯定程度上降低其焦虑17，18，但

17、此方法主观性强，效果差异大。荟生源是一种安全性高、价格低廉的治疗预期性CINV的功能性食品，现阶段在进行临床有效性验证。目前传统中药制剂治疗CINV，存在剂型多样、应用时间长期、药物成分不明确等特点使用不当或者滥用，经常引起过敏反应、心脏损害等严峻的不良反应。中药起效较慢，煎药时间长、量较多、味道苦，不被现代人们所接受，且很多临床医师对中药有效辩证施制把握不好，其针对性差。荟生源功能性食品根据“药食同源的基础理论，结合现代生物萃取技术，将组方提取制成代用茶，能有效弥补中药汤剂的不便于服用，对胃无刺激，幸免了传统汤剂味道苦;又可削减因肌肉注射和静脉输液反复穿刺带来的苦痛。本试验分别对两个试验组一次经口灌胃灌入荟生源配方1和荟生源配方2最大灌入量，经过7 d观看，急性毒性试验无小鼠死亡，给药各组小鼠均未出现急性中毒症状和表现，并且毛皮光滑、进食、活动度、体重增长及大小便正常;实行颈椎脱臼法处死动物解剖肉眼观查肝、肾、脾、胃、肠等主要脏器未发觉形态转变;病理学检中，仅有1只动物出现干细胞轻微胞浆疏松化，引起胞浆疏松化的缘由尚不明确，其缘由可能为试验药物处于肝脏代谢活跃期，导致基因扩增;也可能是炎症、缺氧和毒素等，针对本试验的实际状况，仅有此1只动物异样出如今