CombiFlashTM Sg100c快速制备色谱分离仪的图文操作手册

1、CombiFlashTM Sg100c快速制备色谱分离仪的图文操作手册一、 CombiFlashTM Sg100c快速制备色谱分离仪：检测器的光学部分馏分收集器UA-6型紫外可见检测器洗脱剂贮液罐色谱柱废液罐计量泵色谱柱架Foxy Jr. 控制器 CombiFlashTM Sg100c快速制备分离色谱仪二、 功能和用途：1、 功能：本仪器配制了AC电机自动控制的无阀计量泵、液体样品上样的手动阀、固体样品上样柱接头、144支试管的馏分收集器和高负载在线紫外UA-6检测器和记录仪，具有双元线性或阶梯式梯度洗脱模式、适用于正相4/12/40/120g 或130g色谱柱，可以处理4mg-13g的样品；

2、2、 用途：分离制药、生物和化学等行业性能相近的化合物。三、 操作步骤：（一） 系统启动：（如需要更多的信息，请参考专用的操作手册）1、 UA-6检测器的设置：（1）、关上仪器前面右下角的峰分离器（PEAK SEPARATOR）开关。（2）、检测器的红色按钮开关由“STANDBY”切换至“OPERATE”后，红色按钮右边的指示灯亮呈红色。（3）、把仪器上面光学部分右前方的基线调整（BASELINE ADJUST）旋钮旋至MAX.OPERN。（4）、等15min左右，前面板UA-6型紫外指示灯变为绿色后设置灵敏度（SENSITIVITY）。对于本仪器而言，一般选择灵敏度为AUFS（absorba

3、nce units full scale）。（5）、调整记录仪补偿（RECORDER OFFSET）旋钮的白色标志与顶端中心标志在一条直线上。（6）、按自动基线（AUTO BASELINE）按钮后调整记录仪补偿旋钮至10%（或所需的基线位置）。2、 泵的设置：梯度泵右侧的流量（FLOW RATE）旋钮用来调节洗脱剂的流量大小，泵前面流量指示器指示流量的近似值。当泵正在运行或已经关闭的时候，流量是可以调整的。注：从到的软键执行每个键上面显示行的功能。3、 泵的冲洗/清洁：（1）、将进样阀下端管道从色谱柱上取下后放到废液罐中；（2）、按“STANDBY/OPERATE”软键以打开，此时显示上次运行

4、的程序；（3）、按ADVANCE软键显示出主要的手动控制屏，操作并运行泵。如果在4s中内没有进一步的操作，液晶屏将再退回到前一显示屏幕。（4）、按Pump下面的软键“C”后，Pump将以反色文本显示；此时泵软键“C”可以切换泵的开关，当“Pump”以反色文本显示时表明泵正在运行。（5）、按“Acc”下面的“A”软键可以显示附属控制屏，在此屏上可以改变仪器的附属功能，。（6）、按“Grad”下面的“D”软键可以手动更改洗脱剂B的百分比，。（7）、使用数字键或“-1”和“+1”软键设置洗脱剂B的百分比为100%以清洗组分B的管道。持续按“-1”和“+1”软键将循环显示可设值的范围，例98，99，1

5、00，0，1，（8）、按“Enter”下面的“E”键后，将用洗脱剂B冲洗/清洁梯度泵和输出管道。当管件中开始出现洗脱剂时，可以执行下一步。（9）、设置洗脱剂B的百分比为0%，将使用洗脱剂A清洗A的管道。（10）、按Enter软键后将用洗脱剂A冲洗/清洁梯度泵和输出管道。当管件中开始出现洗脱剂时，可以进行下一步操作。（11）、按“End”下面的“A”软键后再按“Pump”下面的软键“C” 就把泵关闭了，将显示相同的正色文本，如下图。（12）、再把管件连接到进样阀的底部端口。洗脱剂的流动途径和液体上样图4、 基线平衡和液体样品法上样：梯度泵经过冲洗和清洁后，就可以进行脱气、平衡色谱柱和进样操作。按

6、照紫色文本标记调整进样阀至正确的位置。（1）、参照下列步骤安装色谱柱，通过上下接头将色谱柱安装到柱架上。根据柱子的长度可以调整下端的色谱底座，共有四个调整位置。拔出色谱柱底座并上下滑动至合适的位置。抬高上面弹簧式色谱柱底座，把上面的旋扣接头塞到色谱柱的上端，轻轻地拧动柱子，当调整下端旋扣接头与色谱柱匹配后缓慢地松开上端柱子底座，色谱柱架应当贴紧色谱柱。（2）、旋转进样阀至平衡/分离（EQUILIBRATE/SEPARATE）位置，如果还没有打开就按“STANDBY/OPERATE”软键以打开Foxy Jr.控制器。（3）、按ADVANCE软键后进入含有Pump软键的显示屏幕，按Pump软键后“

7、Pump”将以反色文本显示，此时就启动了泵，将用洗脱剂A冲洗色谱柱。（4）、当平衡色谱柱后，按ADVANCE软键后再按Pump软键“Pump”将和其他文本一样以正色文本显示，此时就把泵关闭了。（5）、旋转进样阀至进样（INJECT）位置，用注射器通过进样阀把液体样品轻轻注在色谱柱的上面。旋转进样阀至平衡/分离（EQUILIBRATE/SEPARATE）位置。（6）、下一步开始编辑色谱分离程序。如果已经建立程序，按Run下面的“A”软键后就可以开始分离收集样品。当运行完毕参照以下各步卸下色谱柱和样品注入柱：随仪器提供的RediSepTM 色谱柱只能使用一次，在处理用过的色谱柱之前应当将柱中的洗脱

8、剂排出；为了排出色谱柱和/或样品注入柱中大部分洗脱剂可以先从洗脱剂贮液罐中拔出溶剂的进口管道，然后按STANDBY/OPERATE软键打开Foxy Jr控制器，按“Pump”下面的软件“C”来启动泵，看到色谱柱变干和仅有少量液体流出废液管时依次按ACVANCE、C软键关闭泵，下次分离样品前务必清洗泵的所有管道。洗脱剂的流动途径和固体上样图5、 色谱柱的基线平衡和固体样品法上样：梯度泵经疏通和清洗后，可用下面的操作步骤清洁泵及管路、平衡色谱柱和注入样品，参照绿色文本标识调整进样阀至正确的位置。（1）、参照4、（1）安装色谱柱，（2）、样品注入柱的安装，将样品注入柱推进进样阀中，顺时针旋转样品注入

9、柱90以使二者紧密结合。把色谱柱盖帽扣在固体样品进样柱的柱头上直到扣紧为止，然后旋转盖帽90以使二者结合紧密。（3）、转动进样阀至平衡基线（EQUILIBRATE）位置。如果没有打开Foxy Jr.控制器，就按STANDBY/OPERATE软键打开手动控制器。（4）、按ADVANCE软键显示带有Pump软键的屏幕，按Pump软键使之以反色文本显示。此时洗脱剂A将充满色谱柱。（5）、当平衡好色谱柱后，依次按ADVANCE软键、Pump软键使之和其他文本一样以正色文本显示后就把泵关闭。（6）、旋转进样阀至上样和分离（LOAD AND SEPARATE）位置。（7）、进行下一步操作，编辑Foxy J

10、r.的控制程序或选择已经存在的合适程序按Run软键后开始运行分离样品。（8）、当运行完毕参照以下各步卸下色谱柱和样品注入柱：随仪器提供的RediSepTM 色谱柱只能使用一次，在处理用过的色谱柱之前应当将柱中的洗脱剂排出；为了排出色谱柱和/或样品注入柱中大部分洗脱剂可以先从洗脱剂贮液罐中拔出溶剂的进口管道，然后按STANDBY/OPERATE软键打开Foxy Jr控制器，按“Pump”下面的软件“C”来启动泵，看到色谱柱变干和仅有少量液体流出废液管时依次按ACVANCE、C软键关闭泵，下次分离样品前务必清洗泵的所有管道。（二） 操作程序的设置：1、简介：本节是Foxy Jr.程序设置的基本指南

11、，能满足大部分设置的需要。但是在程序实例中可能仍有很多额外选项和参数的设置不能介绍到。如需更多的信息请参考的本书目录或Foxy Jr.操作手册中第3节。注：除了采用本节所述控制Sg 100c系统外，还可以使用安装在计算机上的PeakTrak 软件控制，此时可以忽略本节参考PeakTrak的安装指南和帮助文件设置分离程序和使用Sg 100c系统。2、分离程序实例：为了能快速掌握怎样使用Foxy Jr.控制器编辑分离程序，可以按照下面的分步指南来完成。分离程序实例是建立在以下收集参数之上的：使用16mm试管；废液或不需要的洗脱液通过进样阀的控制直接流入废液罐；当有吸收峰时每个试管的收集洗脱液时间为

12、9s，这是基于当泵流速为100ml/min时注满15ml 16mm×100mm的试管所用时间的长短来计算的；当有吸收峰时采用峰检测器来确定；运行时间的最大值为31min；峰宽值为持续约1min；梯度程序为0% B时持续5min，30% B持续25min，此后为0%（见下图）。注：当设置程序时，软键到执行每个键上面所显示行的功能，某些键的功能如选择（Select）软键是上下滚动于各选择项的列表，+1和-1键是以1为单位递增或递减（+1和-1键在可选择值间循环，如：98，99，100，0，1，），确认（Enter）软键是用来存储设置和进入下一画面的。（1）、在主显示屏上，按选择程序2，按

13、清除软键（Clear softkey），再按确认（Enter）键使程序回到默认状态。（2）、按编辑（Edit）键后，按或选择（Select）键设置类型（Type）为峰检测（Peak detection），然后按确认（Enter）键。（3）、参数试管架类型（Rack Type）和最后一支试管（Last Tube）的数目根据试管架上试管的类型和数目设置。根据试管架上试管的大小和型号这些参数是需要改变的。按或选择键设置架型号（Rack type）为16mm试管（Tubes），然后按确认；按、和软键设置最后一支试管为第100支。（4）、按或选择设置好每支试管的滴液时间长短（Fraction by Ti

14、me），然后按确认。注：每支试管的滴液时间（Fraction by Time）主要根据试管的大小和所用的流速来设置，此参数依照系统设置的需要而改变。（5）、按和设置每支试管的滴液时间（Fraction by Time）为9sec，按键默认流动延时为0sec，按键默认阀值为0=None。（6）、参数峰宽是吸收峰持续时间长短的估计值，为了达到最佳效果，峰宽值设置应为0.22min之间。按或选择键设置峰宽（Peak Width）为1min，然后按确认，按软键默认重启动（Restart）为None。（7）、当运行开始时，所用的程序事件按照时间排列。只有多个事件被设置成同一时间发生时，依据次序运行。本软

15、件允许在已经存在的程序事件中添加事件，此事件被放在已有事件列的最后。设置某一事件Even为None后使用Clear键就可以删除此事件。（8）、按或选择键设置事件1（Event：1）为梯度变化（Grandient Change），然后按确认；按、和设置事件1梯度%B（Event：1 Grad. %B）为0, 运行时间为5:00min。（9）、按或选择键设置事件2（Event：2）为梯度变化（Grandient Change），然后按确认；按、和设置事件2梯度%B（Event：2 Grad. %B）为30, 运行时间为5:00min。（10）、按或选择键设置事件3（Event：3）为梯度变化（Gr

16、andient Change），然后按确认；按、和设置事件3梯度%B（Event：3 Grad. %B）为30, 运行时间为30:00min。（11）、按或选择键设置事件4（Event：4）为梯度变化（Grandient Change），然后按确认；按、和设置事件4梯度%B（Event：4 Grad. %B）为0, 运行时间为30:01min。（12）、按或选择键设置事件5（Event：5）为泵速设置（Pump speed chng），然后按确认；按默认5：Speed%为0=Run End，按、设置5：Speed%为0，31:00；按或结束（End）软键后表明程序2就设置完成了3、运行：（1）

17、、通过数字键（1-9）选择相对应的程序运行该程序，在显示画面中最上面一行的左侧，“Pgm=*”表示所选用的程序号。（2）、按或运行（Run）软键启动程序。（3）、运行完成后，参照上述操作步骤卸下色谱柱和样品注入柱。4、附加/额外功能：在运行过程中可以查看或改变以下参数：当仪器运行时软键允许滴液部件的手动控制，按此软键后在B、C、D和E软键上面显示屏上出现四个不同指向的按钮，按其中之一键后，滴液部件将按所示方向移动。按或停止（Stop）软键可以暂停当前操作，同时停止运行时间和泵，但是不影响阀的操作。按或继续（Cont.）软键可以恢复到先前操作，按或结束（End）软键将停止当前的收集循环、滴液组件

18、将退回到右后角。洗脱剂将通过阀的改变而改流入废液罐。按或排放（Drain）软键将通过换向阀改变洗脱剂的流向至废液罐。当洗脱剂处于被该向状态时Drain以反色文本显示。再次按Drain软键后程序将返回到正常状态。注：当排放时运行时间计入所设置的程序中。按或窗口（Wdw.）软键将会显示运行时间和当前的梯度百分比，见下图。再次按此软件或退回（Back）软键后将回到正常的运行屏幕显示。时间/窗口状态（Time/Window Status）按或峰（Peak）软键将显示峰检测器信息，如果程序未使用峰检测，则Peak将不显示。按Peak后可以看到目前水平和斜坡值。当检测到峰时，Peak以反色文本显示，如下图

19、。再次按此软键或退回（Back）软键将回到正常的运行显示屏。峰信息（Peak Information）按或查看（View）显示正在运行程序的所有程序设置。在运行的任何时刻按View键后按Next软键将依次查看下一个程序设置。当达到最后一个程序设置时，再按Next软键返回到Foxy Jr.控制器的正常显示屏幕。按RT/Wdw软键两次将略过所有的设置进入正常显示屏幕。查看程序（Program Viewing）不能改变正在运行程序的任何参数。5、程序的复制：谨慎使用此功能。在选择的程序号下，该程序内的所有事件设置将被完全清除。设置Pgm=目的程序号，按或清除（Clear）软键，按或直到被复制的程序出

20、现在目的程序下，按或确认（Enter）软键确认。6、样品梯度设置的实例：下面的实例有助于不同梯度程序的创建，利用事件号（event #）、运行时间（elapsed time）和%B作图标有助于程序设置，谨记段结束时间已经过去或是从运行开始的总时间。（1）、倾斜式梯度程序（Ramp Gradient Program）：程序描述-在头5min内洗脱剂为0%B，然后在25min内洗脱剂递增到100%B 并保持到运行结束；程序事件：1：Grad. %B= 0, 5:00 2：Grad. %B=100, 25:00（2）、步长式梯度程序（Step Gradient Program）：程序描述：洗脱剂为3

21、0%B时洗脱5min，60%B时洗脱5min，然后在3min内递增到90%B并洗脱5min，然后递减到0%B并保持至洗脱运行结束。程序事件：1：Grad. %B= 30, 0:01；2：Grad. %B= 30, 5:00；3：Grad. %B= 60, 5:00；4：Grad. %B= 60, 11:00；5：Grad. %B= 90, 14:00；6：Grad. %B= 90, 19:00；7：Grad. %B= 00, 28:00。（3）、梯度程序的附加实例：a、等度洗脱：洗脱剂为30% B程序事件：1：Grad. %B= 30, 0:01；2：Grad. %B= 30,10:00；3：

22、Grad. %B= 0, 10:01。b、曲线梯度：在16min内洗脱剂从0% B递增至100% B程序事件：1：Grad. %B= 5, 3:00；2：Grad. %B= 7, 4:00；2：Grad. %B= 12, 6:00；4：Grad. %B= 20, 8:00；5：Grad. %B= 32, 10:00；6：Grad. %B= 48, 12:00；7：Grad. %B= 70, 14:00；8：Grad. %B= 100, 16:00；9：Grad. %B= 0, 16:01。c、程序描述：在1h内100%洗脱剂1递变为100%洗脱剂2，然后将洗脱剂进液口1转移至洗脱剂3中，在1h

23、内100%洗脱剂2递变为100%洗脱剂3，然后将洗脱剂进液口2转移至洗脱剂4中，在1h内100%洗脱剂3递变为100%洗脱剂4。程序事件：1：Grad. %B= 100, 1:00:00；2：Output 1, On, 1:00:00；3：Grad. %B= 0, 2:00:00；4：Output 2, On, 2:00:00；5：Grad. %B= 100, 3:00:00；6：Grad. %B= 100, 3:00:01。d、程序描述：在5min内洗脱剂从5%递增至20%B，再在10min时递增至80%，最后在15min时递增至95% B。注：除了具有相同时间设置的事件外，事件的先后顺无关

24、紧要。程序事件：1：Grad. %B= 5, 0:01；2：Grad. %B= 80, 10:00；3：Grad. %B= 0, 15:01；4：Grad. %B= 95, 15:00；5：Grad. %B= 20, 5:00；（4）、梯度资料表:（三） 操作软件Peak Trak的使用：1、双击桌面上Peak Trak软件的快捷方式或从开始/所有程序/PeakTrak1/ PeakTrak2进入软件操作的主窗口，见下图。2、单击运行样品（Run Samples）弹出下面的设置运行（Set Up Runs）窗口，依次填写上操作者（Operator）、色谱柱的描述（Column Descript

25、ion）、色谱柱编号（Column Lot#）、记录参考（Notebook Reference）和注释（Notes）后就可以进行下一步（Next）。单击清除所有输入项（Clear All Entries）可以删除上面填写的所有内容。单击添加样品（Add Sample）后，样品号（Sample）后的数字由0变为1，依次输入样品标识（Sample ID）、描述（Description）、数量（Quantity）后可以进行下一步（Next）。再次单击添加样品后样品号后的数字变为2，表明现在有两个样品，依次类推。选中要删除的样品号，单击删除样品（Delete Sample）后可以删除。如样品1的样品标

26、识、描述和数量都已设好，样品2的和样品1的一样，只要单击和前面相同（Same as Previous）就可以使二者的设置相同。做完实验后，单击清除所有样品（Clear All Samples）即可清除所有样品，此时样品号后的数字为0。分别单击浏览（Browse）后设置好保存数据和方法文件路径。3、单击方法编辑（Method Editor）后弹出方法编辑窗口，默认进入梯度洗脱窗口，见下图。首先在溶剂A和B下面文本框中填写上溶剂A和B的名称，再按照已知洗脱程序设置各个事件，选择运行时间和洗脱剂B的百分比后单击添加（Add）后选定的时间和%B值就出现在Time %B下面的对话框中。选中要删除的项后单

27、击删除（Delete）就可以删除选定项。单击试管和试管架（Rack & Tube）后弹出窗口如下，选中或设置好相关系数后，单击运行参数（Run Parameters）后弹出窗口如下，设置完所有相关参数后单击保存（Save）后弹出另存为窗口，选择保存途径和输入文件名后单击保存即可。单击退出（Exit）后退回到下面窗口，单击完成（Finish）后进入PeakTrak控制器（Peak Trak Monitor）窗口，见下图。单击运行（Run）后，即开始按照已设定程序分离样品。此时运行（Run）键变为中止（Abort）键，单击中止键后弹出请确认（Please Confirm）窗口，询问是否想中止，单击是（Yes）后关闭PeakTrak控制器窗口退回到PeakTrak主窗口。4、单击查看试管盘/试管架（Vie