第四章药物含量测定方法验证2

1、 第四章第四章 药物含量测定方法验证药物含量测定方法验证 基本要求基本要求 一、掌握一、掌握 测定药物含量的容量、光谱和色谱测定药物含量的容量、光谱和色谱分析法，滴定度与含量计算，色谱分析法，滴定度与含量计算，色谱系统适用性试验的内容、要求及相系统适用性试验的内容、要求及相关计算。药物分析方法验证与内容。关计算。药物分析方法验证与内容。 二、熟悉二、熟悉 定量分析样品的前处理方法。定量分析样品的前处理方法。 第二节第二节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法 一、概述一、概述 1.1.为什么要对定量分析的样品进行前处理？为什么要对定量分析的样品进行前处理？ 含卤素、氮、硫、磷等有机

2、药物含卤素、氮、硫、磷等有机药物 R-X （F，Cl, Br, I，N ） 金属有机药物金属有机药物 R-O-Me（有机酸或酚的有机酸或酚的 含金属有机药物含金属有机药物 金属盐；结合不牢固）金属盐；结合不牢固） 有机金属药物有机金属药物 R-Me （结合牢固）结合牢固） 2. 常用的处理方法常用的处理方法 不经有机破坏的分析方法不经有机破坏的分析方法 药物分析中常用的分析方法药物分析中常用的分析方法 经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法（一）直接测定法（一）直接测定法 例如：富马酸亚铁例如：富马酸亚铁 溶于热稀矿酸，采用铈量法溶于热稀矿酸，采用铈量法 ，邻二氮菲作指示剂，邻二氮菲作指示剂

3、 CHCHCCOO0Fe二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法（二）经水解后测定法（二）经水解后测定法 1. 直接回流后测定法直接回流后测定法 例如：三氯叔丁醇的含量测定例如：三氯叔丁醇的含量测定 CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH (CH3)2CO +3NaCl + HCOONa +2H2O NaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCN AgSCN + NH4NO3 2. 用硫酸水解后测定法用硫酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定例如：硬脂酸镁的含量测定 Mg(C17H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2C17H

4、35COOH H2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2H2O 二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法（三（三）经氧化还原后测定法经氧化还原后测定法1、碘他拉酸的含量测定、碘他拉酸的含量测定 2. 碘番酸、胆影酸、胆影葡胺注射液、泛影酸、泛影碘番酸、胆影酸、胆影葡胺注射液、泛影酸、泛影酸酸 纳及泛影葡胺注射液的含量测定纳及泛影葡胺注射液的含量测定 Zn还原，后银量还原，后银量法法 COOHIIINHCOCH3CH3CONHCOOHH2NNH2+ 11NaOH + 3Zn+ 3NaI + 2CH3COONa + 3NaZnO2 + 3H2O NaI + AgNO3 AgI +

5、 NaNO3 二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法 3. 利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量 （1）含锑药物）含锑药物 例如：葡萄糖酸锑的含量测定例如：葡萄糖酸锑的含量测定 Sb5+ + 2KI Sb3+ + 2K+ + I2 I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6 （2）含铁药物含铁药物 2Fe3+ + 2KI 2Fe2+ + 2K+ + I2 I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6H+二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法 湿法破坏湿法破坏 药物分析中常用的有机破坏的方法有药

6、物分析中常用的有机破坏的方法有 HNOHNO3 3-HClO-HClO4 4法法 干法破坏干法破坏( (一一) )湿法破坏湿法破坏 HNOHNO3 3-H-H2 2SOSO4 4法法 H H2 2SOSO4 4- -硫酸盐法（凯氏定氮法）硫酸盐法（凯氏定氮法） HNOHNO3 3- H- H2 2SOSO4 4-HClO-HClO4 4法；法； H H2 2SOSO4 4-H-H2 2O O2 2； H H2 2SOSO4 4-KMnO-KMnO4 4( (二二) )干法破坏干法破坏 加加NaNa2 2COCO3 3或或MgOMgO以助灰化；温度控制在以助灰化；温度控制在420420分为：高温

7、炽浊法分为：高温炽浊法和和氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法 三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法含氮有机药物含氮有机药物凯氏定氮法n在在催化剂催化剂作用下，用作用下，用硫酸硫酸破坏有机物，使破坏有机物，使含氮物转化成含氮物转化成硫酸铵硫酸铵。加入。加入强碱强碱进行蒸馏进行蒸馏使使氨氨逸出，用逸出，用硼酸硼酸吸收后，再用吸收后，再用酸酸滴定，滴定，测出氮含量。测出氮含量。 n消化、蒸馏、吸收、滴定消化、蒸馏、吸收、滴定 2.2.反应过程反应过程1. 1. 有机物中的氮在强热和有机物中的氮在强热和 浓浓H2SO4 作用下，消化生成无机氮作用下，消化生成无机氮 NH2 CHCOOH+2 H2SO4=

8、 SO2 + H2O + 2CO2 + NH3 2NH3+H2SO4= (NH4)2SO42.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3(NH4)2SO4 + 2NaOH = Na2SO4 + 2NH4OH 4.4.用已知浓度的用已知浓度的HCIHCI标准溶液滴定，根据标准溶液滴定，根据HCIHCI消耗的量计算出氮的消耗的量计算出氮的 含量。含量。NH4H2BO3 + HCl =H3BO3 + NH4Cl3. NH3收集于收集于 H H3 3BOBO3 3 溶液中。溶液中。NH3+H3BO3=NH4H2BO33.3.反应装置反应装置4.反应试剂反应试剂1

9、、消化液：硫酸、消化液：硫酸2、催化剂：硫酸铜、硫酸钾、催化剂：硫酸铜、硫酸钾3、碱溶液：、碱溶液：40%氢氧化钠氢氧化钠4、吸收液：、吸收液：2%硼酸硼酸5、混合指示剂：（、混合指示剂：（1：1）乙醇溶液）乙醇溶液 0.1%甲基红：甲基红：0.1%溴甲酚绿溴甲酚绿6、标准滴定液：、标准滴定液：0.2M HCL 5.各种试剂的作用各种试剂的作用n硫酸：硫酸： 1. 脱水。使有机物炭化，生成脱水。使有机物炭化，生成C 2. 氧化。氧化。 H2SO4将将C、 H氧化为氧化为CO2和和H2O蒸汽逸出蒸汽逸出，本身还原为，本身还原为SO2，而药物则分解成无机氮，并与硫，而药物则分解成无机氮，并与硫酸结

10、合成硫酸铵，留在酸性溶液中酸结合成硫酸铵，留在酸性溶液中 n硫酸铜：硫酸铜：n1.催化剂催化剂 加速反应加速反应 硫酸铜，硫酸铜，氧化汞氧化汞或或硒硒粉作为催化剂以及加入少粉作为催化剂以及加入少 量量过氧化氢过氧化氢作为氧化剂，作为氧化剂，次氯酸钾次氯酸钾防止污染。通防止污染。通常使用常使用硫酸铜硫酸铜。n2.碱性反应指示剂碱性反应指示剂 有机物全部消化后，出现硫酸铜的兰绿色，可以有机物全部消化后，出现硫酸铜的兰绿色，可以作为指示剂。作为指示剂。 40%氢氧化钠氢氧化钠 碱性条件下，使硫酸铵释放出氨气。碱性条件下，使硫酸铵释放出氨气。n加入氢氧化钠溶液要过量；加入氢氧化钠溶液要过量；1.要防止

11、样液中氨气逸出。要防止样液中氨气逸出。 硼酸硼酸H3BO3：n半微量或微量定氮通常用半微量或微量定氮通常用硼酸硼酸溶液吸收氨的作用溶液吸收氨的作用。硼酸呈微弱酸性，用酸滴定不影响指示剂变色。硼酸呈微弱酸性，用酸滴定不影响指示剂变色反应。反应。 盐酸：盐酸： HCl 滴定液滴定液 6.注意事项注意事项n取样量：取样量： 常量法：相当于含氮量常量法：相当于含氮量25 30mg 半微量法：半微量法：相当于含氮量相当于含氮量1.0 2.0mg2. 蒸馏加浓碱NaOH，加的量为H2SO4量的4倍常量分析：80ml NaOH，25ml的2%硼酸，半微量分析：例如10ml样品，10ml NaOH， 10ml

12、2%硼酸3. 硼酸保持过量。4.标准酸浓度：一般常量用0.1mol/L 半微量用0.05mol/L 微量用0.01mol/L氧燃瓶燃烧法氧燃瓶燃烧法(oxygen flask combustion method)1.原理原理将含有将含有待测元素待测元素的的有机药物有机药物放入充满放入充满氧气氧气的的密闭密闭燃燃烧瓶中进行燃烧，使有机结构部分彻底分解为二氧烧瓶中进行燃烧，使有机结构部分彻底分解为二氧化碳和水，而化碳和水，而待测元素待测元素根据电负性的不同根据电负性的不同转化为不转化为不同价态的氧化物（或无氧酸）同价态的氧化物（或无氧酸），被，被吸收吸收于适当的吸于适当的吸收液中，然后根据欲测物质

13、的性质，采用适宜的分收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行检查或定量测定。析方法进行检查或定量测定。NaClHClOClCNaOH2 溶液点燃适用范围适用范围：含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析。含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析。特点特点：简便、快速、破坏完全，尤其适用于：简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的分析。微量样品的分析。2.2.氧燃瓶燃烧法的适用范围及特点氧燃瓶燃烧法的适用范围及特点 3.仪器装置仪器装置 燃烧瓶为燃烧瓶为500、1000或或2000ml 无色、磨口、厚壁、硬质玻璃无色、磨口、厚壁、硬质玻璃 锥型瓶锥型瓶 瓶塞瓶塞空心空心 底部熔封铂丝一根，下

14、端呈螺底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状旋状或网状 4.称样用材料及称样称样用材料及称样 A. 固体样品固体样品 无灰滤纸无灰滤纸 B. 液体样品液体样品 纸袋纸袋 C. 软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡蜡油纸油纸中包裹严密，中包裹严密，外层外层再用再用无灰滤纸无灰滤纸包裹包裹5.吸收液吸收液 作用作用将样品经燃烧分解所将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为定量地吸收并转变为一定的一定的便于测定的价便于测定的价态态 吸收液的选择吸收液的选择氟氟 水水 （HF) 氯氯 NaOH溶

15、液（溶液（HCl溶解溶解 度低度低）溴溴 H2O2-NaOH（ NaOH-硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液碘碘 NaOH硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液硫硫 NaOH或或H2O2 硒硒 硝酸溶液硝酸溶液6.操作方法操作方法燃烧瓶燃烧前的准备：用洗液洗净后，按各药品项下的规定燃烧瓶燃烧前的准备：用洗液洗净后，按各药品项下的规定 加入吸收液，将瓶口用水湿润，加入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速小心急速地通入地通入氧气氧气1min，立，立即用表面皿覆盖瓶口。即用表面皿覆盖瓶口。样品的准备：取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固样品的准备：取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定于铂丝下端的定于铂丝下端的

16、网内网内或或螺旋处螺旋处。样品的燃烧：样品的燃烧：点燃点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速包有供试品的滤纸尾部，迅速放入放入燃烧瓶燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，俟中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，俟燃烧完毕燃烧完毕（应（应无无黑色碎黑色碎片），充分片），充分振摇振摇，使生成的烟雾，使生成的烟雾完全吸入完全吸入吸收液中，放置吸收液中，放置15min，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做用水少量冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白空白试验试验。然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量测。然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量测定。定。 待分解样品量待分解样品量

17、 燃烧瓶的体积燃烧瓶的体积 35mg（微量分析）（微量分析） 150250ml 2030mg（半微量分析）（半微量分析） 300500ml 5060mg 1000ml 0.60.7g或更多或更多 2000ml或特殊结或特殊结构的燃烧瓶构的燃烧瓶应用示例：碘苯酯的测定应用示例：碘苯酯的测定ICHCH3(CH2)8-COOC2H5I2O2(I )_I2 + 2NaOH NaIO + NaI + H2O 3NaIO NaIO3 + 2NaI 3Br2 + I +3H2O IO3 + 6HBrBr2(guo) + HCOOH HBr + CO2 IO3 + 5I + 6H 3I2 + 3H2OI2 +

18、 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6CH3COOH-+-（二）数据要求（二）数据要求 回收率回收率% = （测定平均值（测定平均值 空白值）空白值）/加入量加入量100% 要求制备要求制备高高、中中、低低三浓度的样品，各测定三浓度的样品，各测定3次次。应。应报告已知加入量的回收率，或测定结果平均值与真实值报告已知加入量的回收率，或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。之差及其可信限。 第三节第三节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证 一、准确度一、准确度 是指用该方法是指用该方法测定结果与真实值接近的程度测定结果与真实值接近的程度，用，用回收率回收率表示表示（一）含量

19、测定方法的准确度（一）含量测定方法的准确度 1. 原料药原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确 度的另一方法测定的结果进行比较。度的另一方法测定的结果进行比较。 2. 制剂制剂 要考察要考察辅料对回收率的影响辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原。采用在空白辅料中加入原 料对照品的方法作回收率试验，然后计算料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。 具体做法：测定高、中、低三个浓度，具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3, 共共9个数据来评价个数据来评价 回收率的回收率的RSD2%；用用UV和和HPLC发时，一般回发时，一般

20、回 收率可达收率可达98%102%；容量法可达；容量法可达99.7%100.3% 二、精密度二、精密度 是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果 之间的之间的接近程度接近程度。 （一）精密度表示方法（一）精密度表示方法 1. 偏差偏差(deviation , d) d = 测得值测得值-平均值平均值=Xi-X 2. 标准偏差标准偏差（standard deviation, SD或或S） S =(Xi X)2/(n-1)1/2 3. 相对标准差相对标准差(relative standard deviation, RSD)也称变异

21、系数也称变异系数 (coefficient of variation, CV) RSD=标准偏差标准偏差/平均值平均值100%=S/X 100%（二）重复性、中间精密度及重现性（二）重复性、中间精密度及重现性 1. 重复性重复性 在相同条件下在相同条件下,由一个分析人员测定所得结果的精密度由一个分析人员测定所得结果的精密度. 2. 中间精密度中间精密度 在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不 同设备测定结果的精密度。同设备测定结果的精密度。 3. 重现性重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。

22、（三）数据要求（三）数据要求 应报告应报告S或或SD、RSD和可信限。用统计学的可和可信限。用统计学的可信性分析信性分析(t或或f）。）。 三、专属性三、专属性 是指在其他成分是指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下，可能存在下， 采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检 查、含量测定方法，均应考察其专属性。查、含量测定方法，均应考察其专属性。 （一）鉴别反应（一）鉴别反应 应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分 的样品均应呈现负反应

23、。的样品均应呈现负反应。 （二）含量测定和杂质测定（二）含量测定和杂质测定 色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，以说明专属性。色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，以说明专属性。 图中应注明各组分的位置，色谱法中分离度应符合要求。在能图中应注明各组分的位置，色谱法中分离度应符合要求。在能 获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对结果的干扰。在杂获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对结果的干扰。在杂 质和降解物不能获得的情况下，可用以验证方法和药典方法进质和降解物不能获得的情况下，可用以验证方法和药典方法进 行对照；也可用对试样加速破坏的方法，比较两种方法。行对照；也可用对试样加速破坏的方法，比

24、较两种方法。 四、检测限（四、检测限（limit of detection, LOD) 是指试样中被测物能被检测出的是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量最低浓度或量，是限度检验，是限度检验 指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。 （一）（一）常用的方法常用的方法 1.1.非仪器分析目视法非仪器分析目视法 用已知浓度被测物，试验出能被可靠地用已知浓度被测物，试验出能被可靠地 检测出的最低浓度或量。检测出的最低浓度或量。 2. 2.仪器分析方法仪器分析方法 UVUV法：法：LODLOD = = f f.3.3S S空

25、空 = = C C样样/ /A A样样 3 3S S空空 FluFlu法：法：LODLOD = = f f.3.3S S空空 = = C C样样/(/(F F样样- -F F空空) ) 3 3S S空空 GCGC和和HPLCHPLC法：法： LODLOD = = S S/ /N N = 2 = 2或或3 3 （二）数据要求（二）数据要求 应附测试图，说明测试过程和检测限结果。应附测试图，说明测试过程和检测限结果。 五、定量限（五、定量限（limit of quantitation, LOQ) 是指样品中是指样品中被测物能被被测物能被定量测定定量测定的最低量的最低量，其测定结果应，其测定结果应

26、具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求 LOQLOQ. .常用信噪比法确定定量限，一般以常用信噪比法确定定量限，一般以S/N=10S/N=10时相应的浓度进行时相应的浓度进行 测定。测定。 六、线性六、线性 是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接 呈呈正比正比关系的关系的程度程度。 UVUV法：首先制备一个标准系列，浓度点法：首先制备一个标准系列，浓度点n =5; A = 0.3n =5; A = 0.3.0.7.0.7 建立回归方程建立回归方程C = aA

27、+ b ;C = aA + b ;r r 0.9999 0.9999。 HPLC HPLC法：制备一个标准系列，浓度点法：制备一个标准系列，浓度点n =5 n =5 7; 7; 以以C C对对h h或或A A或与或与 内标物的峰面积之比，建立回归方程内标物的峰面积之比，建立回归方程r r 0.9999 0.9999。七、范围七、范围 是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限度或量的区间适用的高低限度或量的区间。 原料药和制剂含量测定原料药和制剂含量测定：范围应为测试浓度的：范围应为测试浓度的80%- 120%。 制剂含量均匀度检查制剂含量

28、均匀度检查：范围应为测试浓度的：范围应为测试浓度的70%- 130%。 溶出度或释放度中的溶出量测定溶出度或释放度中的溶出量测定：范围应为限度的：范围应为限度的20%20%。 八、耐用性八、耐用性 是指在测定条件下有效的变动时，测定结果不受影响的是指在测定条件下有效的变动时，测定结果不受影响的承受承受 程度程度。典型的变动因素有：被溶液的稳定性、样品提取次数、时。典型的变动因素有：被溶液的稳定性、样品提取次数、时 间等。间等。 HPLC法变动因素有：流动相组成与法变动因素有：流动相组成与pH，色谱柱，柱温，流速等。色谱柱，柱温，流速等。 GC法变动因素有：色谱柱，固定相，担体、柱温、进样口和检

29、法变动因素有：色谱柱，固定相，担体、柱温、进样口和检 测器温度等。测器温度等。 分析方法效能指标的具体应用分析方法效能指标的具体应用： 1. 用于鉴别试验的方法：只要求专属性、耐用性，其余不要求。用于鉴别试验的方法：只要求专属性、耐用性，其余不要求。 2. 用于原料药中杂质测定和制剂中降解产物测定的方法：用于原料药中杂质测定和制剂中降解产物测定的方法： 用于定量：除了检测限不要求外，其余七项指标均要求。用于定量：除了检测限不要求外，其余七项指标均要求。 限度检查：除检测限、专属性、耐用性要求外，其余不要求。限度检查：除检测限、专属性、耐用性要求外，其余不要求。 3. 原料、制剂及溶出度测定：不

30、要求检测和定量限，其余均要求。原料、制剂及溶出度测定：不要求检测和定量限，其余均要求。练习与思考练习与思考 A A型题型题 1 1 药品的鉴别是证明药品的鉴别是证明 A A未知药物的真伪未知药物的真伪 B B已知药物的真伪已知药物的真伪 C C已知药物的疗效已知药物的疗效 D D药物的纯度药物的纯度 E E药物的稳定性药物的稳定性2 2相对标准差表示的应是相对标准差表示的应是A A准确度准确度 B B回收率回收率 C C精密度精密度 D D纯净度纯净度 E E限度限度3 3用移液管量取的用移液管量取的2525mlml溶液，应记成溶液，应记成A A25ml B25ml B25.0ml C25.0

31、ml C25.00ml 25.00ml D D25.000ml E25.000ml E25251ml1ml4 4以下三个数字以下三个数字0.53620.5362、0.00140.0014、0.250.25之和之和应为应为A A0.79 B0.79 B0.788 C0.788 C0.787 0.787 D D0.7876 E0.7876 E0.80.85 5表示两变量指标表示两变量指标A A与与C C之间线性相关程度常用之间线性相关程度常用A A相关规律相关规律 B B比例常数比例常数 C C相关常数相关常数 D D相关系数相关系数 E E精密度精密度6 6减小偶然误差的方法是减小偶然误差的方法

32、是A A做空白试验做空白试验 B B做对照实验做对照实验 C C做回收试验做回收试验 D D增加平行测定次数增加平行测定次数 E E选用多种测定方法选用多种测定方法 B B型题型题 1 14 4A A1.23 B1.23 B1.22 C1.22 C2.54 2.54 D D2.53 E2.53 E2.512.511 11.22521.22522 22.53512.53513 32.53482.53484 42.50682.5068ACDE 5 58 8A A空白试验空白试验 B B对照试验对照试验 C C回收试验回收试验 D D鉴别试验鉴别试验 E E检测试验检测试验5 5以同量的溶剂替代供试品同法进行测定试验以同量的溶剂替代供试品同法进行测定试验6 6在供试液中加入已知量的标准物或已知量的被测在供试