第18章体液免疫球蛋白测定

1、第十八章第十八章 体液免疫球蛋白测体液免疫球蛋白测定定免疫球蛋白（免疫球蛋白（immunoglobulin, Ig）：是由浆细胞合成）：是由浆细胞合成和分泌的一组具有抗体活性的蛋白质。和分泌的一组具有抗体活性的蛋白质。重链性质，重链性质，IgIg分分5 5类：类：IgG(IgG() )、IgA(IgA() )、IgM(IgM() )、IgD(IgD() )、IgE(IgE() )轻链性质，轻链性质，IgIg分分2 2型：型：、IgIg占血浆蛋白总量：占血浆蛋白总量：20%20%检测意义：反应机体的免疫功能、诊断疾病检测意义：反应机体的免疫功能、诊断疾病IgIg含量：血清含量：血清 IgGIgG

2、、IgAIgA、IgMIgM：g/Lg/L、 IgDIgD、IgEIgE：mg/L mg/L 体液体液 IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM：mg/Lmg/L 第一节第一节 血清血清IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM 测定测定IgG的特性和功能 IgG于出生后3个月开始合成，是血清中含量最高的免疫球蛋白 IgG多为单体，半衰期约为23天，占血清免疫球蛋白总量的75%80% 大多数抗感染抗体与自身抗体均为IgG类 IgG是唯一能通过胎盘的抗体 有四个亚型（IgG1、IgG2、IgG3、IgG4）IgM的特性和功能 为五聚体，是分子量最大的Ig，称巨球蛋白。 IgM激活补体能力比IgG强

3、 天然血型抗体是IgM IgM是个体发育过程最早能产生的抗体，胚胎晚期已能合成，新生儿脐带血中若IgM水平升高，表示该儿曾有宫内感染 IgM是抗原刺激后出现最早的抗体，故检测IgM水平可用于传染病的早期诊断 有2个亚型（IgM1、IgM2）IgA的特性和功能 分为血清型和分泌型两种，血清型IgA主要由肠系膜淋巴组织中的浆细胞产生。而分泌型IgA（SIgA）是由呼吸道、消化道、泌尿生殖道等处的固有层中浆细胞产生。 主要存在于初乳、唾液、泪液，以及呼吸道消化道和泌尿生殖道黏膜表面的分泌液中。 分泌型IgA的合成和主要作用部位在黏膜 分2个亚型：（IgA1、IgA2）一、血清一、血清IgGIgG、I

4、gAIgA、IgMIgM测定测定测定方法测定方法 单向环状免疫扩散法单向环状免疫扩散法 免疫浊度法免疫浊度法 原理原理 误差主要原因误差主要原因 评价评价 单向环状免疫扩散法单向环状免疫扩散法免疫浊度法免疫浊度法 直接透射比浊法直接透射比浊法 速率散射比浊法速率散射比浊法 注意点注意点 评价评价二、血清二、血清IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM测定的临床意义测定的临床意义 年龄年龄 年龄与血中年龄与血中Ig含量有一定关系含量有一定关系 高高Ig血症血症: 多克隆多克隆Ig增高（感染）；增高（感染）； 单克隆单克隆Ig增高（免疫增殖病）增高（免疫增殖病） 低低Ig血症血症: 先天性低先天性

5、低Ig血症（免疫缺陷病）；血症（免疫缺陷病）； 获得性低获得性低Ig血症血症(蛋白丢失蛋白丢失).第二节第二节 血清血清IgDIgD、IgEIgE测定测定 正常人血清中正常人血清中IgD含量很低，半衰期含量很低，半衰期2.8天。天。膜结合型膜结合型IgD(mIgD)构成构成BCR，是，是B细胞分细胞分化发育成熟的标志。化发育成熟的标志。 未成熟未成熟B细胞仅表达细胞仅表达mIgM 成熟成熟B细胞表达细胞表达mIgM和和mIgD 活化的活化的B细胞或记忆细胞或记忆B细胞细胞mIgD逐渐消失逐渐消失 IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴

6、组织中的浆细胞分泌，为亲细胞抗体，由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌，为亲细胞抗体，引起引起I型超敏反应；与机体抗寄生虫免疫也可能有关。型超敏反应；与机体抗寄生虫免疫也可能有关。一、一、 血清血清IgDIgD测定及临床意义测定及临床意义 测定方法：测定方法： 放射免疫分析法放射免疫分析法 化学发光免疫分析法化学发光免疫分析法 免疫比浊法免疫比浊法 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法 IgD IgD：生物功能不详：生物功能不详 增高：增高：类风湿性关节炎、变态反应性疾病、类风湿性关节炎、变态反应性疾病、 败血症、新生儿溶血病败血症、新生儿溶血病 降低：降低：意义不大意义不大二、二、 血清血清IgEIgE测

7、定及临床意义测定及临床意义测定方法测定方法总总IgEIgE测定：放射免疫分析法测定：放射免疫分析法 化学发光免疫分析法化学发光免疫分析法 免疫比浊法免疫比浊法 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法特异性特异性IgEIgE测定：免疫斑点法测定：免疫斑点法 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法IgEIgE临床意义：临床意义： 增高：增高：变态反应性疾病、寄生虫变态反应性疾病、寄生虫感染、病毒感染、自身免疫性疾病。感染、病毒感染、自身免疫性疾病。 降低：降低：意义不大意义不大第三节第三节 尿液及脑脊液尿液及脑脊液IgIg测定测定 正常人尿液中的正常人尿液中的IgIg含量甚微，当机体的免疫含量甚微，当机体的免疫功能异

8、常或炎症反应引起肾脏疾病时，可导致功能异常或炎症反应引起肾脏疾病时，可导致肾小球滤过膜分子屏障破坏或电荷屏障受损，肾小球滤过膜分子屏障破坏或电荷屏障受损，从而引起球蛋白及其他大分子蛋白质漏出增多。从而引起球蛋白及其他大分子蛋白质漏出增多。 生理情况下，生理情况下，IgIg根据其分子量大小，通过血根据其分子量大小，通过血脑屏障的难易度不同，脑屏障的难易度不同，IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM在脑脊液在脑脊液中的浓度递减。病理状态时，脑脊液组分发生中的浓度递减。病理状态时，脑脊液组分发生改变。改变。分子屏障：肾小球滤过屏障电荷屏障：1上皮细胞 2基底膜 3内皮细胞 4被滤过物质一、尿液一、

9、尿液IgIg测定及临床意义测定及临床意义尿液：尿液： 肾小球滤膜受损程度：肾小球滤膜受损程度：选择性蛋白尿指数选择性蛋白尿指数（selective proteinuria index,SPIselective proteinuria index,SPI）标本：晨尿或随机尿标本：晨尿或随机尿SPISPI（尿（尿IgGIgG血清血清IgGIgG）（尿）（尿TRFTRF血清血清TRFTRF）SPISPI0.1 0.1 选择性选择性 微小病变型肾病微小病变型肾病SPISPI0.2 0.2 非选择性非选择性 膜性肾病、膜增殖性肾炎、膜性肾病、膜增殖性肾炎、肾病综合症肾病综合症 增高有临床意义：增高有临床

10、意义：肾病、免疫增殖病肾病、免疫增殖病 可根据尿内可根据尿内Ig增高的类型帮助鉴别诊断肾增高的类型帮助鉴别诊断肾小球疾病的种类小球疾病的种类二、脑脊液二、脑脊液IgIg测定及临床意义测定及临床意义脑脊液：脑脊液： 血脑屏障受损程度：血脑屏障受损程度：白蛋白商值白蛋白商值白蛋白商值（白蛋白商值（ALB quotientALB quotient，Q QALBALB）：）：Q QALBALB（AlbAlbCSFCSFAlbAlbS S）10001000Q QALBALB9 9时，提示血脑屏障无明显受损时，提示血脑屏障无明显受损 9 915 15 轻度受损轻度受损 急慢性病毒感染、急慢性病毒感染、多发

11、性硬化、神经梅毒、带状疱疹神经节炎、脑萎缩多发性硬化、神经梅毒、带状疱疹神经节炎、脑萎缩 151533 33 中度受损中度受损 急性神经疏螺旋急性神经疏螺旋体病、条件致病性脑膜炎、吉兰巴雷综合征体病、条件致病性脑膜炎、吉兰巴雷综合征 3333100 100 重度受损重度受损 化脓性脑膜炎、化脓性脑膜炎、单纯疱疹性脑炎、结核性脑膜炎等细菌感染性疾病单纯疱疹性脑炎、结核性脑膜炎等细菌感染性疾病 100 100 完全破裂完全破裂 区分鞘内免疫球蛋白来源：IgG生成指数和24hIgG合成率IgG生成指数QIgGQalb(QIgG=IgGCSF/IgGS,Qalb=AlbCSF/Albs)IgG合成率/

12、24h=(IgGCSF-IgGS/541)-(AlbCSF-AlbS/243) (IgGS/AlbS) 0.43500IgG生成指数和24hIgG合成升高时，表明CSF中的IgG主要有中枢神经系统鞘内合成，多见于多发性硬化症第四节第四节 血清血清IgGIgG亚类测定及临床意亚类测定及临床意义义IgIg亚类：亚类：IgG1IgG1、IgG2IgG2、IgG3IgG3、IgG4IgG4，其含量依次下降其含量依次下降测定方法：测定方法： 单向免疫扩散法单向免疫扩散法 免疫比浊法（常用）免疫比浊法（常用） 放射免疫分析法放射免疫分析法 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法临床意义：临床意义：IgG亚类的含量随

13、年龄的不同而变化亚类的含量随年龄的不同而变化IgG亚类缺陷可表现为：反复呼吸道感染、亚类缺陷可表现为：反复呼吸道感染、腹泻、中耳炎、鼻窦炎、支扩以及哮喘腹泻、中耳炎、鼻窦炎、支扩以及哮喘等等IgA缺乏症常伴有缺乏症常伴有IgG2缺陷，某些病毒感缺陷，某些病毒感染染IgG1、IgG2、IgG3下降显著下降显著IgG亚类异常增高主要见于亚类异常增高主要见于型变态反应型变态反应第五节第五节 M蛋白测定及临床意义蛋白测定及临床意义 M蛋白：蛋白： B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖产生的淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖产生的异常单克隆免疫球蛋白异常单克隆免疫球蛋白 临床上多见于多发性骨髓瘤、高丙种球蛋临床

14、上多见于多发性骨髓瘤、高丙种球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等 M M蛋白测定蛋白测定蛋白区带电泳：经典方法蛋白区带电泳：经典方法 计算蛋白含量和百分比计算蛋白含量和百分比免疫比浊法：免疫比浊法： 免疫球蛋白定量免疫球蛋白定量 准确性高、快速准确性高、快速免疫电泳：免疫电泳： M M蛋白分型蛋白分型免疫固定电泳：免疫固定电泳： M M蛋白分型及鉴定，分辨蛋白分型及鉴定，分辨 率高率高GAMIgG-型M蛋白Marker 免疫固定电泳模式图免疫固定电泳模式图第六节第六节 轻链测定及临床意轻链测定及临床意义义本周蛋白的检测本周蛋白的检测 样本：尿液 方法：免

15、疫电泳、加热沉淀（简便易行）IgIg和和-Ig-Ig定量检测定量检测 样本：尿液、血液 方法：单向免疫扩散法、免疫比浊法（常用，准确、快速）应用：应用：M M蛋白血症的分型及鉴定蛋白血症的分型及鉴定第七节第七节 冷球蛋白的检测冷球蛋白的检测冷球蛋白：冷球蛋白： 在低温下发生沉淀，加温后又复溶的免疫球蛋白在低温下发生沉淀，加温后又复溶的免疫球蛋白 在低温时产生冷沉淀的机制尚不十分明确在低温时产生冷沉淀的机制尚不十分明确 多数冷球蛋白为免疫复合物，其抗原可以是外源多数冷球蛋白为免疫复合物，其抗原可以是外源 性的，也可以是内源性的性的，也可以是内源性的冷球蛋白的类型及临床意义冷球蛋白的类型及临床意义

16、 I I型：为单克隆冷球蛋白型，占型：为单克隆冷球蛋白型，占25%25%40%;40%;最最常见为常见为IgGIgG或或IgMIgM。多见于免疫增生性疾病。多见于免疫增生性疾病 型：单克隆和多克隆混合型冷球蛋白，占型：单克隆和多克隆混合型冷球蛋白，占15%15%25%;25%;最常见的组合为最常见的组合为IgMIgMIgGIgG。多见于。多见于自身免疫性疾病自身免疫性疾病 型：多克隆混合型冷球蛋白，约占型：多克隆混合型冷球蛋白，约占50% ;50% ;最最常见的组合为常见的组合为IgMIgMIgGIgG。多见于自身免疫性疾病以多见于自身免疫性疾病以及感染性疾病及感染性疾病 标本：在体温条件下采

17、集和保存静脉血4ml，不加抗凝剂检测：静脉血 水浴 离心 冰箱373737370-40-41 12h2h沉淀沉淀24h24h内，单克隆冷球蛋白内，单克隆冷球蛋白数天后出现为混合型冷球蛋白数天后出现为混合型冷球蛋白验证：将冷沉淀物置于验证：将冷沉淀物置于pH4.0pH4.0的的0.1M0.1M乙酸钠缓冲液乙酸钠缓冲液 加热加热3 35d5d重点肾小球滤过膜破坏程度、血脑屏障受损程血脑屏障受损程度评价指标度评价指标冷球蛋白检测冷球蛋白检测1.1.免疫应答主要分为哪几个阶段？免疫应答主要分为哪几个阶段？2.2.什么是免疫球蛋白什么是免疫球蛋白? ?其分子基本结构其分子基本结构? ?3.3.免疫球蛋白分类及亚类免疫球蛋白分类及亚类? ?4.4.血清免疫球蛋白测定方法有哪些血清免疫球蛋白测定方法有哪些? ?5.5.比较单向免疫扩散法和速率散射比浊法优缺点。比较单向免疫扩散法和速率散射比浊法优缺点。6.6.免疫球蛋白免疫球蛋白IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM测定有何临床意义？测定有何临床意义？思考题思考题7.7.免疫球蛋白免疫球蛋白IgGIgG亚类测定有何临床意义？亚类测定有何临床意义？8.8.单向免疫扩散测定中有哪些主要影响因素？单向免疫扩散测定中有哪些主要影响因素？9.9.如何保证速率散射比浊法测定结果准确？如何保证速率散射比浊法测定结果准确？10.10.如何