第6章药物的含量测定.

1、第第6 6章章 药物含量测定方法药物含量测定方法 化学分析法化学分析法 仪器分析法仪器分析法药物含量测定方法药物含量测定方法 1 容量分析法容量分析法 优点：精密度好、操作简优点：精密度好、操作简便快速、结果准确便快速、结果准确 缺点：专属性差缺点：专属性差 原料药含量测定首选方法原料药含量测定首选方法化学分析法化学分析法药物含量测定方法药物含量测定方法2 重量分析法重量分析法 优点：精密度好、快速、结果优点：精密度好、快速、结果准确准确 缺点：专属性差、样品量大、缺点：专属性差、样品量大、操作较繁、需时较长操作较繁、需时较长 仅在不能应用容量分析法进行仅在不能应用容量分析法进行原料药含量测定

2、时再考虑。原料药含量测定时再考虑。化学分析法化学分析法 重量分析法：以质量为测量值的分析方法。将被测组重量分析法：以质量为测量值的分析方法。将被测组分与其他分离，称重计算含量。精确到分与其他分离，称重计算含量。精确到0.1-0.2 %。对低含量组分测定误差较大，尽量避免用。水分测定，对低含量组分测定误差较大，尽量避免用。水分测定，药品中水中不溶物、炽灼残渣、灰分仍用。药品中水中不溶物、炽灼残渣、灰分仍用。 1、挥发法：利用被测组分具有挥发性或将其转化为、挥发法：利用被测组分具有挥发性或将其转化为挥发性物质，称取挥发前后挥发性物质算含量。挥发性物质，称取挥发前后挥发性物质算含量。 a、 直接挥发

3、法：测吸收剂增加的量直接挥发法：测吸收剂增加的量 b、 间接挥发法：测样品所减少的量间接挥发法：测样品所减少的量 2、萃取法：、萃取法：(提取重量法提取重量法)用互不相容的溶剂萃取后称用互不相容的溶剂萃取后称重，适用于有机药物的测定。重，适用于有机药物的测定。 3、沉淀法：将被测组分以沉淀形式分离出来，转化、沉淀法：将被测组分以沉淀形式分离出来，转化为称量形式，计算被测组分的含量的方法。为称量形式，计算被测组分的含量的方法。 换算因素换算因素F 换算因素是指被测组分的摩尔质量与称量换算因素是指被测组分的摩尔质量与称量形式的摩尔质量之比形式的摩尔质量之比a、 b 使待测组分与称量形式中含有的待使

4、待测组分与称量形式中含有的待测元素原子数或分子数相当的最小公倍数；测元素原子数或分子数相当的最小公倍数； Ma供测品中带测组分的摩尔质量，供测品中带测组分的摩尔质量， g/mol;Mb待测组分称量形式的摩尔质量，待测组分称量形式的摩尔质量， g/mol。baMbMaF注射用苯妥英的含量测定 方法原理：方法原理： 供试品加水溶解后，加稀盐酸，供试品加水溶解后，加稀盐酸，用乙醚振摇提取，置用乙醚振摇提取，置105恒重的蒸发皿中，恒重的蒸发皿中，低温蒸去乙醚，并在低温蒸去乙醚，并在105干燥至恒重，精干燥至恒重，精密称定，所得残渣重量与密称定，所得残渣重量与1.087相乘，即苯相乘，即苯妥英钠（妥英

5、钠（C15H11N2NaO2）的重量。）的重量。 注射用苯妥英的含量测定注射用苯妥英的含量测定 取供试品装量差异项下的内容物，混合均匀，精取供试品装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于苯妥英钠密称取适量（约相当于苯妥英钠0.3 g），加水），加水50 mL溶解后，加稀盐酸溶解后，加稀盐酸10 mL，摇匀，用乙醚振摇，摇匀，用乙醚振摇提取提取5次，第一次次，第一次100 mL，以后每次各，以后每次各25 mL，合，合并乙醚液，用水洗涤并乙醚液，用水洗涤2次，每次次，每次5 mL，合并洗液，合并洗液，用乙醚用乙醚10 mL振摇提取，合并前后两次得到的乙醚振摇提取，合并前后两次得到的

6、乙醚液，置液，置105恒重的蒸发皿中，低温蒸去乙醚，并恒重的蒸发皿中，低温蒸去乙醚，并在在105干燥至恒重，精密称定，所得残渣重量与干燥至恒重，精密称定，所得残渣重量与1.087相乘，即得供试量中含苯妥英钠相乘，即得供试量中含苯妥英钠（C15H11N2NaO2）的重量。）的重量。 Wa: 试样的重量；试样的重量；Wb: 称量形式的重量。称量形式的重量。aWFbW)%(含量2.4 2.4 药物含量测定方法药物含量测定方法 3 滴定度的定义和计算：滴定度的定义和计算： 滴定度是指每毫升滴定液所相当的被测成滴定度是指每毫升滴定液所相当的被测成分的量（分的量（mg），以），以T表示，单位常用表示，单位

7、常用mg/mL。对于滴定反应：。对于滴定反应： aA + bB cC + dD 在滴定中，在滴定中，A与与B物质之间存在化学计量关物质之间存在化学计量关系（摩尔比）为系（摩尔比）为nA: nB= a: b，即，即 nB = b/anA， 化学分析法化学分析法3 滴定度的定义和计算：滴定度的定义和计算：若滴定液浓度为若滴定液浓度为CA (molL-1)，则，则 T = nbMB = b/aCAMB MB被测物质的摩尔质量。被测物质的摩尔质量。 T滴定度，单位常用滴定度，单位常用mg/mL。含量的计算含量的计算直接滴定法：直接滴定法：%100)%(WTV含量%100)%(WFTV含量规定摩尔浓度实

8、际摩尔浓度FF滴定液浓度校正因子滴定液浓度校正因子例：注射用异烟肼含量测定例：注射用异烟肼含量测定 取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取本品约称取本品约0.2 g，置，置100 mL量瓶中，加水使量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取25 mL，加水加水50 mL、盐酸、盐酸20 mL与甲基橙指示液与甲基橙指示液1滴，滴，用溴酸钾滴定液（用溴酸钾滴定液（0.01667 mol/L）缓缓滴定）缓缓滴定（温度保持在（温度保持在1825）至粉红色消失。）至粉红色消失。每每1 mL的溴酸钾滴定液（的溴酸钾滴定液（0.0

9、1667 mol/L）相）相当于当于3.429 mg的异烟肼（的异烟肼（C6H7N3O）。）。 HNNH2NCO异烟肼Isoniazid例：注射用异烟肼含量测定例：注射用异烟肼含量测定反应式：反应式：3C6H7N3O + 2KBrO3 3C6H5NO2 + 3N2 + 3H2OC6H7N3O323MCTKBrOHNNH2NCO异烟肼Isoniazid)L/(429. 314.1372301667. 0mmgT%10001667. 0429. 3)%(33WCVKBrOKBrO含量%100)%(WFTV含量含量的计算含量的计算返滴定法（剩余滴定法或回滴法）：返滴定法（剩余滴定法或回滴法）：%10

10、0)()%(0WTFVVABBs含量FB滴定液滴定液B浓度校正因子浓度校正因子TA滴定液滴定液A的滴定度的滴定度W 供试品的取样量供试品的取样量例：盐酸去氧肾上腺素含量测定例：盐酸去氧肾上腺素含量测定 取本品约取本品约0.1 g，精密称定，置碘瓶中，加水，精密称定，置碘瓶中，加水20 mL使溶解，精密加溴滴定液使溶解，精密加溴滴定液(0.05 mol/L) 50 mL，再加盐酸，再加盐酸5 mL,立即密塞，放置立即密塞，放置15分分钟并时时振摇，注意微开瓶塞，加碘化钾试液钟并时时振摇，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10 mL ，立即密塞，振摇后，用硫代硫酸钠滴，立即密塞，振摇后，用硫代硫酸钠滴定液

11、定液(0.1 mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每用空白试验校正。每1 mL溴滴定液溴滴定液(0.05 mol/L)相当于相当于3.395 mg 的的C9H13NO2.HCl。 例：盐酸去氧肾上腺素含量测定例：盐酸去氧肾上腺素含量测定HClNHOHHO%1001 . 0)()%(3223220WTCVVAOSNaOSNas含量)/(395. 367.2033105. 02mLmgTBr反应式：反应式： C9H13NO2 + 3Br2 C9H10Br3NO2 + 3HBr

12、 Br2 + 2KI 2KBr + I2 I2 + 2Na2S2O3 2NaI +Na2S4O6%100)()%(0WTFVVABBs含量2.4 2.4 药物含量测定方法药物含量测定方法1 光谱分析法光谱分析法2 色谱分析法色谱分析法3 电化学分析法电化学分析法4 热分析法热分析法仪器分析法仪器分析法2.4 2.4 药物含量测定方法药物含量测定方法1 紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法2 原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法3 荧光光谱法荧光光谱法光谱分析法光谱分析法2.4 2.4 药物含量测定方法药物含量测定方法 紫外紫外-可见分光光度法是各国药典常用的定可见分光光度法是各国药典常用的定

13、量分析方法。量分析方法。 中国药典对其所收载的药物采用吸收系数中国药典对其所收载的药物采用吸收系数法、对照品法以及计算分光光度法求算含法、对照品法以及计算分光光度法求算含量。量。 优点：灵敏度高、操作简便、样品用量少优点：灵敏度高、操作简便、样品用量少 缺点：准确度不如重量法、容量法、专属缺点：准确度不如重量法、容量法、专属性差性差 主要用于含量低制剂的含量测定主要用于含量低制剂的含量测定光谱分析法光谱分析法1直接分光光度法：直接分光光度法： 对照品法对照品法例：呋喃唑酮（痢特灵）含量测定例：呋喃唑酮（痢特灵）含量测定 供试品溶液与对照品溶液同时测定供试品溶液与对照品溶液同时测定 %100)%

14、(WDCx含量RRxxCAACAx、AR 供试品、对照品溶液的吸光度供试品、对照品溶液的吸光度Cx 、CR供试品、对照品溶液的浓度供试品、对照品溶液的浓度D 供试品溶液的体积供试品溶液的体积W 供试品的取样量供试品的取样量呋喃唑酮含量测定呋喃唑酮含量测定 避光操作。取本品约避光操作。取本品约20 mg，精密称定，精密称定，置置250 mL量瓶中，加二甲基甲酰胺量瓶中，加二甲基甲酰胺40 mL，振摇使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精振摇使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取密量取10 mL，置，置100 mL量瓶中，用水稀量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。照紫释至刻度，摇匀，作为供试品

15、溶液。照紫外外-可见分光光度法（附录可见分光光度法（附录 A），在），在367 nm的波长处测定吸光度；另取呋喃唑酮对的波长处测定吸光度；另取呋喃唑酮对照品适量，精密称定，同法测定，计算，照品适量，精密称定，同法测定，计算，即得。即得。 标示量百分数标示量百分数 药物制剂的含量通常以标示量百分数表示，记为药物制剂的含量通常以标示量百分数表示，记为“标示量（标示量（%）”，即单位制剂中药物的实际含，即单位制剂中药物的实际含量与生产时处方量的比值，计算公式：量与生产时处方量的比值，计算公式：%100c%_BWWDx）标示量（W、W和和B分别为样品重、单位制剂的平均重量分别为样品重、单位制剂的平均重

16、量和制剂的标示量。和制剂的标示量。例：呋喃唑酮片含量测定如下，计例：呋喃唑酮片含量测定如下，计算其算其 标示量（标示量（%） 取本品取本品10片，精密称定，研细，精密称出适量（约片，精密称定，研细，精密称出适量（约相当于呋喃唑酮相当于呋喃唑酮20 mg），置），置250 mL量瓶中，加二量瓶中，加二甲替甲酰胺甲替甲酰胺40 mL，溶解后，加水稀释至刻度，摇匀，溶解后，加水稀释至刻度，摇匀，滤过。弃去初滤液，精密量取续滤液滤过。弃去初滤液，精密量取续滤液10 mL，置，置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。照分光光度法，量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。照分光光度法，在在3671nm的波长处测

17、定吸收度。另取呋喃唑酮对的波长处测定吸收度。另取呋喃唑酮对照品约照品约20 mg，精密称定，置，精密称定，置250 mL量瓶中，加二量瓶中，加二甲替甲酰胺甲替甲酰胺40 mL，溶解后，加水稀释至刻度，摇匀，溶解后，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照液，同法测定，计算，即得。作为对照液，同法测定，计算，即得。%100A%_xBWWDCARR）标示量（例：盐酸氯丙嗪片的测定方法例：盐酸氯丙嗪片的测定方法 吸收系数法吸收系数法 优点：不需标准品；优点：不需标准品； 缺点：仪器精密度要求高缺点：仪器精密度要求高 盐酸异丙嗪比吸收系数为盐酸异丙嗪比吸收系数为915，测定，测定l l = 254 nm 操作：

18、取操作：取10片，除去糖衣后，精称，研细片，除去糖衣后，精称，研细称取粉末称取粉末适量适量加水、盐酸溶解加水、盐酸溶解过滤，取滤液于过滤，取滤液于254 nm处测处测定。即可计算。定。即可计算。 100%11cmxxEAcx例：盐酸普纳洛尔注射液的含量例：盐酸普纳洛尔注射液的含量 精密量取本品（规格：精密量取本品（规格：5 mL:5 mg）2 mL，用，用甲醇稀释至每甲醇稀释至每1 mL 中约含盐酸普纳洛尔中约含盐酸普纳洛尔20 m mg，摇匀，照分光光度法，在摇匀，照分光光度法，在290 nm 的波长处测的波长处测定吸收度，按定吸收度，按C16H21NO2.HCl 的吸收系数的吸收系数 （1

19、cm 1%）为）为207 计算，即得。计算，即得。 %10010100207%3_BVVDAxx）标示量（V-注射液的标示体积：注射液的标示体积：5 mLD-稀释液的体积稀释液的体积V-供试液的取样量体积：供试液的取样量体积：2 mLB-注射液的标示量：注射液的标示量：5 mg例：盐酸氯丙嗪注射液的测定法例：盐酸氯丙嗪注射液的测定法 注射液处方中有维生素注射液处方中有维生素C作抗氧剂作抗氧剂, 在在l l = 254 nm处有干扰处有干扰, 所以测定所以测定 l l 在在306 nm (次最大吸收波长次最大吸收波长)，该波长，该波长VC无干扰。无干扰。2萃取后分光光度法萃取后分光光度法 碱化，

20、有机溶剂萃取游离型碱，使其与制剂辅碱化，有机溶剂萃取游离型碱，使其与制剂辅料分离，再用分光光度法测定料分离，再用分光光度法测定 可避免注射剂中抗氧剂等附加剂的干扰可避免注射剂中抗氧剂等附加剂的干扰 例例:盐酸异丙嗪注射剂的盐酸异丙嗪注射剂的USP含量测定法含量测定法: 碱化碱化 有机溶剂有机溶剂(乙醚乙醚)提取提取 除水溶性杂除水溶性杂质和酸性有机杂质质和酸性有机杂质 酸化酸化 盐酸液反提取盐酸液反提取 除中性有机杂质除中性有机杂质3萃取双波长分光光度法萃取双波长分光光度法 碱化，有机溶剂萃取，在碱化，有机溶剂萃取，在254 nm、277 nm波波长处测定吸收，用吸收度之差计算含量，以消除长处

21、测定吸收，用吸收度之差计算含量，以消除抗氧剂干扰。氯丙嗪的最大吸收波长为抗氧剂干扰。氯丙嗪的最大吸收波长为254 nm，其氧化产物在此波长也有吸收，同时在其氧化产物在此波长也有吸收，同时在277 nm处氧化产物也有吸收，且其吸收度与在处氧化产物也有吸收，且其吸收度与在254 nm处吸收度相等，而氯丙嗪在处吸收度相等，而氯丙嗪在277 nm处无吸收。处无吸收。 A = A254-A2774钯离子比色法钯离子比色法 原理：吩噻嗪类药物的二价硫在原理：吩噻嗪类药物的二价硫在pH = 20.1 缓冲液中可与钯离子缓冲液中可与钯离子(Pd2+)形成红色络合物，形成红色络合物，借以进行比色测定。借以进行比

22、色测定。10 min呈色完全，可稳呈色完全，可稳定定2 h，l lmax = 500 nm，最适宜范围，最适宜范围50g 250g。 USP对奋乃静糖浆、注射液及片剂含量测定。对奋乃静糖浆、注射液及片剂含量测定。2 荧光光谱法荧光光谱法 荧光强度线性范围较窄，在荧光强度线性范围较窄，在0.52之间，若超过，应调之间，若超过，应调节试液浓度再测，当浓度与荧光强度明显偏离线性时，节试液浓度再测，当浓度与荧光强度明显偏离线性时，应改用标准曲线法。应改用标准曲线法。RrbrxbxxCRRRRc选定被测物质的激发光波长和发射光波长，并选定被测物质的激发光波长和发射光波长，并制备对照品和供试液，在线性范围

23、内测定：制备对照品和供试液，在线性范围内测定：Cx、CR- 供试品、对照品溶液的浓度供试品、对照品溶液的浓度Rx、Rr-供试品、对照品溶液的荧光强度供试品、对照品溶液的荧光强度Rxb、Rrb-供试品、对照品空白溶液的荧光强度供试品、对照品空白溶液的荧光强度例：利血平片含量例：利血平片含量 对照品溶液的制备：精密称取利血平对照品对照品溶液的制备：精密称取利血平对照品10 mg，置置100 mL 棕色量瓶中，加氯仿棕色量瓶中，加氯仿10 mL溶解后，再用溶解后，再用乙醇稀释至刻度，摇匀；精密量取乙醇稀释至刻度，摇匀；精密量取2 mL ，置，置100 mL 棕色量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

24、棕色量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备：取本品（规格：供试品溶液的制备：取本品（规格：0.25 mg）20片，片，如为糖衣片应除去糖衣，精密称定，研细，精密称如为糖衣片应除去糖衣，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于利血平取适量（约相当于利血平 0.5 mg），置），置100 mL 棕棕色量瓶中，加热水色量瓶中，加热水10 mL，摇匀后，加氯仿，摇匀后，加氯仿10 mL，振摇，用乙醇定量稀释至刻度，摇匀，滤过，精密振摇，用乙醇定量稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液，用乙醇定量稀释成每量取续滤液，用乙醇定量稀释成每1 mL 约含利血平约含利血平2g的溶液，即得。的溶液，

25、即得。例：利血平片含量例：利血平片含量 测定法：精密量取供试品溶液与对照品溶液各测定法：精密量取供试品溶液与对照品溶液各5 mL，分别置具塞试管中，加五氧化二钒试液分别置具塞试管中，加五氧化二钒试液2.0 mL，激烈，激烈振摇后，在振摇后，在30放置放置1 小时后，取出，于室温时，照小时后，取出，于室温时，照荧光分析法（附录荧光分析法（附录 E），在激发光波长），在激发光波长400 nm ，发射光波长发射光波长500 nm 处测定荧光读数，计算，即得。处测定荧光读数，计算，即得。%100%_BWWDcRRRRRrbrxbx）标示量（W-供试品片粉的取样量供试品片粉的取样量W-平均片重平均片重B

26、-片剂的标示量片剂的标示量D-供试品的稀释体积，按稀释过程计算：供试品的稀释体积，按稀释过程计算：250 mL3 原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法标准曲线法标准曲线法标准加入法标准加入法 对照品溶液的制备对照品溶液的制备 精密称取经精密称取经110干燥至恒重的分析纯干燥至恒重的分析纯氯化钠约氯化钠约1.0 g，置，置200 mL 量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取摇匀；精密量取5 mL ，置，置100 mL 量瓶中，用水稀释至刻度，量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。精密量取摇匀。精密量取1 mL、2 mL和和3 mL ，分别置，分别置3 个个100 mL

27、 量瓶中，再分别各加量瓶中，再分别各加10氯化锶溶液氯化锶溶液2 mL、4 mL和和6 mL ，用水稀释至刻度，摇匀，即得。用水稀释至刻度，摇匀，即得。 供试品溶液的制备供试品溶液的制备 精密量取本品约精密量取本品约13 g ，置，置250 mL 量瓶中，用水溶解并稀释量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得溶液（至刻度，摇匀，即得溶液（1）；精密量取）；精密量取5 mL 置置100 mL 量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀;再精密量取再精密量取1 mL,置置100 mL 量瓶中，加量瓶中，加10氯化锶溶液氯化锶溶液4 mL ，加水稀释至刻度，摇匀，即得。，加水稀释至刻度

28、，摇匀，即得。 测定法测定法 取对照品与供试品溶液，照原子吸收分光光度法（附录取对照品与供试品溶液，照原子吸收分光光度法（附录 D含量测定法第一法），在含量测定法第一法），在589.0 nm 的波长处测定，计算，即的波长处测定，计算，即得。得。例：口服补液盐散中总钠含量的测定例：口服补液盐散中总钠含量的测定药物含量测定方法药物含量测定方法1 HPLC2 GC 特点：分离分析功能特点：分离分析功能 对复杂供试品分析有利对复杂供试品分析有利色谱分析法色谱分析法药物含量测定方法药物含量测定方法 HPLC法法优点：分离度高、灵敏度好、优点：分离度高、灵敏度好、 样品用量少、重复性好样品用量少、重复性好

29、 定量、鉴别同时进行定量、鉴别同时进行缺点：准确度不如重量法、容量法缺点：准确度不如重量法、容量法适用范围：适用范围： 1用于制剂、复方制剂含量测定用于制剂、复方制剂含量测定 2用于原料药多组分或杂质干扰含量测用于原料药多组分或杂质干扰含量测定定 3抗生素、激素类药物抗生素、激素类药物色谱分析法色谱分析法高效液相色谱仪器高效液相色谱仪器贮液器高压泵压力表进样器梯度洗脱装置色谱柱记录仪检测器 馏分收集器高效液相色谱仪的结构示意图高效液相色谱仪的结构示意图nmsMX直线型直线型凸线型凸线型凹线型凹线型三种吸附等温线和对应的色谱峰形状三种吸附等温线和对应的色谱峰形状正常峰正常峰拖尾峰拖尾峰前伸峰前伸

30、峰对仪器的一般要求对仪器的一般要求12121212221RRRRRRRRWWttWWttR222/11654. 5WtWtnRR2/, 12/, 212(70. 1)(2hRhRRRWWttRtR - 保留时间保留时间n-理论塔板数理论塔板数或或理论塔板数：理论塔板数：分离度：分离度：拖尾因子：拖尾因子：105. 02dWThW0.05h - 5%峰高处的峰宽峰高处的峰宽d1-峰顶点至峰前沿间的距离峰顶点至峰前沿间的距离分离度：分离度：12121212221RRRRRRRRWWttWWttR2/, 12/, 212(70. 1)(2hRhRRRWWttR或或除另有规定外，待测组分除另有规定外，

31、待测组分与相邻共存物之间的分离与相邻共存物之间的分离度应大于度应大于1.5。拖尾因子拖尾因子105. 02dWTh峰高法峰高法 定量时拖尾因子定量时拖尾因子在在0.95-1.05之间之间W0.05h - 5%峰高处的峰宽峰高处的峰宽d1-峰顶点至峰前沿间的距离峰顶点至峰前沿间的距离峰高法峰高法例：醋酸氟轻松乳膏的含量测定例：醋酸氟轻松乳膏的含量测定-内标法内标法1. 对照品溶液的制备对照品溶液的制备 取醋酸氟轻松对照品约适量，精密称定，加甲醇溶取醋酸氟轻松对照品约适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释至每解并定量稀释至每1 mL中约含中约含0.125 mg的溶液，精的溶液，精密量取该溶液密量取该

32、溶液10 mL与内标溶液与内标溶液5 mL，置，置50 mL量瓶量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。 2. 供试品溶液的制备供试品溶液的制备 取本品（规格：取本品（规格：10 g:2.5 mg）适量（约相当于醋）适量（约相当于醋酸氟轻松酸氟轻松1.25 mg），精密称定，置），精密称定，置50 mL量瓶中，量瓶中，加甲醇约加甲醇约30 mL,置置80oC水浴中加热水浴中加热2分钟，振摇使醋分钟，振摇使醋酸氟轻松溶解，放冷至室温，精密加内标溶液酸氟轻松溶解，放冷至室温，精密加内标溶液5 mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却用甲醇稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却2小时以

33、上，小时以上，取出后迅速滤过，放至室温，取续滤液。取出后迅速滤过，放至室温，取续滤液。 3. 内标溶液的配制内标溶液的配制 取炔诺酮适量，加甲醇制成每取炔诺酮适量，加甲醇制成每1 mL中约含中约含0.15 mg的的溶液，即得。溶液，即得。例：醋酸氟轻松乳膏的含量测定例：醋酸氟轻松乳膏的含量测定 操作步骤：操作步骤： 分别精密吸取上述对照品溶液与供试分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各品溶液各20L 注入高效液相色谱仪，用紫外吸收注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长检测器，于波长240 nm处测定，记录色谱图，按处测定，记录色谱图，按内标法以峰面积计算其含量。内标法以峰面积计算其含量

34、。 %1005 . 21050/%WcAAfSSx）标示量（BBSScAcAf/f - 校正因子校正因子AR、AS -对照溶液色谱图中对照品和内标物的峰面积对照溶液色谱图中对照品和内标物的峰面积cR、cS -对照溶液色谱图中对照品和内标物的浓度对照溶液色谱图中对照品和内标物的浓度,mg/mLAS - 供试品溶液中内标物的峰面积供试品溶液中内标物的峰面积Ax - 供试品溶液中待测物的峰面积供试品溶液中待测物的峰面积cS - 供试品溶液中内标物的浓度，供试品溶液中内标物的浓度，mg/mLW -供试品的取样量供试品的取样量; 50-供试品的稀释体积（供试品的稀释体积（D），），mL；2.5-标示量（

35、标示量（B），），mg; 10-平均装量（平均装量（W），），g； 例：替硝唑栓的含量测定例：替硝唑栓的含量测定-外标法外标法 测定法测定法 取本品取本品10粒（规格：粒（规格：0.2 g），精密称定，切），精密称定，切成碎末，精密称取适量（约相当于替硝唑成碎末，精密称取适量（约相当于替硝唑120 mg），），置置100 mL量瓶中，加流动相适量，水浴中加热并时时量瓶中，加流动相适量，水浴中加热并时时振摇使替硝唑溶解，放冷，加流动相稀释至刻度，摇振摇使替硝唑溶解，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀。置冰浴中冷却匀。置冰浴中冷却1小时，取出后迅速滤过，放至室温，小时，取出后迅速滤过，放至室温，精密量

36、取续滤液精密量取续滤液5 mL，置，置50 mL量瓶中，加流动相稀量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取释至刻度，摇匀，精密量取20L注入液相色谱仪，记注入液相色谱仪，记录色谱图，另取替硝唑对照品适量，精密称定，加流录色谱图，另取替硝唑对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每动相溶解并定量稀释制成每1 mL中约含中约含120g的溶液，的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。 例：替硝唑栓的含量测定例：替硝唑栓的含量测定-外标法外标法%1001000%_BWWDAAcRxR）标示量（AR、Ax -对照溶液和对照品溶液的峰面积对照溶液和对照

37、品溶液的峰面积cR-对照溶液色谱图中的浓度对照溶液色谱图中的浓度, m mg/mLAx - 供试品溶液中待测物的峰面积供试品溶液中待测物的峰面积W -供试品的取样量供试品的取样量; D-供试品的稀释体积（供试品的稀释体积（D），），mL，1000；B -标示量，标示量，mg; 1000-换算因素；换算因素； W - 栓剂的平均粒重栓剂的平均粒重药物含量测定方法药物含量测定方法 2 GC压力表色谱柱记录仪检测器高压气瓶减压阀转子流量计气化室色谱恒温室皂膜流速计气流调解阀净化干燥管检测器桥路气相色谱仪单气路流程示意图气相色谱仪单气路流程示意图 气相色谱仪的结构气相色谱仪的结构 气相色谱仪由五大系统

38、组成：气相色谱仪由五大系统组成： 气路系统气路系统 进样系统进样系统 分离系统分离系统 控温系统控温系统 检测和记录系统检测和记录系统常用检测器的性能常用检测器的性能 a 火焰离子化检测器（火焰离子化检测器（FID） b 热导检测器（热导检测器（TCD） c 电子俘获检测器（电子俘获检测器（ECD） d 微型微型ECD e 氮磷检测器（氮磷检测器（NPD） f 火焰光度检测器（火焰光度检测器（FPD） g 脉冲脉冲FPD（PFPD）灵敏度灵敏度 当一定浓度或一定质量的组分进入检测器，产当一定浓度或一定质量的组分进入检测器，产生一定的相应信号生一定的相应信号R，一进样量，一进样量c（mg/cm3

39、或或g/s）对响应信号（）对响应信号（R）作图得到一条通过原点）作图得到一条通过原点的直线，的直线，直线的斜率就是检测器的灵敏度直线的斜率就是检测器的灵敏度（S）。 因此，灵敏度定义为信号因此，灵敏度定义为信号（R）对进入检测器的组分）对进入检测器的组分 量（量（c）的变化率：）的变化率：CRS0RN2RNRcRc检测器检测器R-c关系图关系图灵敏度灵敏度 对于浓度型：对于浓度型：SC：灵敏度：灵敏度(mVcm3mg-1) ；Ai：色谱峰面积：色谱峰面积, cm2，现在微处理出来为，现在微处理出来为Vs；C2：记录仪：记录仪灵敏度，灵敏度，mV/cm ；C1：走纸速度，：走纸速度，cm/min

40、；FC：检测器入口载气流速度，：检测器入口载气流速度，cm3/m；Wi：进样量：进样量：mg。对于质量型：对于质量型：12CwFCASicic1260CwACSiimSm：灵敏度（：灵敏度（mVsg-1）最小检测量最小检测量 指产生二倍噪声峰高时，色谱体系（即色指产生二倍噪声峰高时，色谱体系（即色谱仪）所需进样量。是被测物能被定量测谱仪）所需进样量。是被测物能被定量测定的最低限。（定的最低限。（LOQ） 检出限时用来衡量检测器的性能，最小检检出限时用来衡量检测器的性能，最小检测量不仅与检测器的性能有关，还与色谱测量不仅与检测器的性能有关，还与色谱柱的柱效及操作条件有关。柱的柱效及操作条件有关。

41、最小检测量最小检测量 对于浓度型：最小检测量（单位：对于浓度型：最小检测量（单位：mg）为：）为： 对于质量型：最小检测量（单位：对于质量型：最小检测量（单位：g）为：）为：cccDCFWW12/10065. 1mmDCWW12/1060065. 1线性范围线性范围 检测信号呈线性时最大和最小进样量之比，检测信号呈线性时最大和最小进样量之比，或叫最大允许进样量（浓度）与最小检测量或叫最大允许进样量（浓度）与最小检测量（浓度）之比，即（浓度）之比，即cA/cA。 氢焰检测器的线性范围氢焰检测器的线性范围 可达可达107；热导池检测器；热导池检测器 的线性范围在的线性范围在105左右。左右。0Rc

42、cAcA对仪器的一般要求对仪器的一般要求12121212221RRRRRRRRWWttWWttR222/11654. 5WtWtnRR2/, 12/, 212(70. 1)(2hRhRRRWWttRtR - 保留时间保留时间n-理论塔板数理论塔板数或或理论塔板数：理论塔板数：分离度：分离度：定量校正因子定量校正因子几种常用的定量计算方法几种常用的定量计算方法归一化法：组分量占全部的比例归一化法：组分量占全部的比例 面积归一化即不加入校正因子直接归一化面积归一化即不加入校正因子直接归一化 加校正因子的面积归一化法：加校正因子的面积归一化法：外标法外标法 操作要求高操作要求高内标法：内标法：标准溶

43、液加入法标准溶液加入法%1002211nniiifAfAfAfAx%100%siiiAAKxisiissiimmfmmffK标准溶液加入法标准溶液加入法 标准加入法，又名标准增量法，将一定量已知浓标准加入法，又名标准增量法，将一定量已知浓度的标准溶液加入待测样品中，测定加入前后样度的标准溶液加入待测样品中，测定加入前后样品的浓度，根据内标法或外标法测定含量，在扣品的浓度，根据内标法或外标法测定含量，在扣除加入的对照品溶液的含量，即得供试品待测成除加入的对照品溶液的含量，即得供试品待测成分的含量。分的含量。 由于加入对照品溶液的前后校正因子相同，即由于加入对照品溶液的前后校正因子相同，即1)/(

44、cxxiSxAAc）含量（xxxxiScccAA例：月桂氮卓酮的含量测定例：月桂氮卓酮的含量测定 供试品溶液的制备供试品溶液的制备 取本品取本品20 mg，精密称定，置，精密称定，置10 mL量瓶中，用内标量瓶中，用内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。操作步骤：操作步骤： 1. 校正因子测定校正因子测定 取月桂氮卓酮对照品约取月桂氮卓酮对照品约20 mg，精密称定，置，精密称定，置10 mL量瓶中，用内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，取量瓶中，用内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，取 1 m mL注入气相色谱仪，计算校正因子。注入气相色谱仪，计算校正因子。 2. 样品测定样品测定 精密量取上述对照品溶液，分别连续进样精密量取上述对照品溶液，分别连续进样35次，次，每次约每次约1 m mL，注入气相色