临床检验仪器PCR核酸扩增仪习题

1、第十三章PC*酸扩增仪一、名词解释1 .PC叱术：聚合酶链反应（PCR是一种体外核酸扩增技术。2 .TaqDNA聚合酶：存在于水生嗜热菌的嗜热DNA聚合酶，可在74c复制DNA,在95c仍具有酶活力。3 .水浴锅PC电酸扩增仪：属于第一代PCR6因扩增仪，以不同温度的水浴锅串联成一个控温体系。4 .压缩机PC电酸扩增仪：于第二代PCR8因扩增仪，由压缩机自动控温，金属导热。5.Overshooting升温过程中，由于一些加热元件，比如半导体、金属块上积蓄的能量仍然会传给PCF#系，造成实际的温度高于设定的温度，即overshooting现象。6.Undershooting：在降温过程中也会出现

2、惯性，造成实际的温度短时间内会低于设定温度。7.半导体PC戒酸扩增仪：属于第三代PCR8因扩增仪，由半导体自动控温，金属导热。8 .离心式空气加热PCFT增仪：属于第三代PCR8因扩增仪，由金属线圈加热，采用空气作为导热媒介。9 .梯度PC取：带梯度PC劭能的基因扩增仪，在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在指定范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸索出最适合的反应条件。io原位pcfa：带原位扩增功能的基因扩增仪。11 .原位PC叱术：即在细胞内进行PCFT增，组织细胞的形态不被破坏，是原位杂交与PC敬术结合而形成的新技术。12 .荧光实时定量PCFRfc术：在PC©应体系中加

3、入特异性的荧光染料或探针，通过检测荧光信号，实时监测整个PC©应过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。13 .位置的边缘效应：指PCW因扩增仪最外周的样品孔温度与中间的样品孔差异，不均一，从而导致外周样品孔的PCFT增效率不佳。14 .模块温控模式：仪器根据探测器直接探测的承载样品金属基座温度进行控制，该模式适用于长时间的静态孵育。15 .反应管温控模式：仪器根据探测器所探到的温控模块的温度由计算机计算出样品管内或PCR板孔内样品液的温度来进行控制。16 .Ct化C代表cycle,t代表threshold。值的含义是，每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数，每个

4、模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。二、选择题【A型题】在五个选项中选出一个最佳答案。1 .以下哪种物质在PCR5应中不需要（D）A.TaqDNA合酶B.dNTPsC.Mg2+D.RNA酶E合适PH缓冲液2 .以下哪种酶可耐高温（A）A.TaqDNA5合酶B.HindiiiC.T4连接酶D.RNA酶E.Klenow片段3 .PCRS应的正确过程应为（B）A.退火一变性一延伸B.变性一退火一延伸C退火一延伸一变性D.变性一延伸一退火E延伸一变性一退火4.PC叱术的本质是（C）A.核酸杂交技术B.核酸重组技术C核酸扩增技术D核酸变性技术E核酸连接技术1.

5、TaqDNA聚合酶促反应最适温度（C）A.37B.5055cC.7075cD.8085cE.9495c2 .温度均一性较好的PCR仪为（E）A.水浴锅PCR核酸扩增仪和压缩机PC*酸扩增仪B.半导体PCR核酸扩增仪和离心式空气加热PCRK酸扩增仪C.压缩机PCR核酸扩增仪和半导体PC*酸扩增仪D.压缩机PCR核酸扩增仪和离心式空气加热PCRK酸扩增仪E.水浴锅PCR核酸扩增仪和离心式空气加热PCRK酸扩增仪3 .一步就可以摸索出最适合反应条件的PCR仪为（B）A.普通PCR仪B.梯度PCR仪C.原位PCR仪D.荧光PCR仪E.实时PCR仪4.能在细胞内进行PCR仪扩增的PCR仪为（C）A.普通

6、PCR仪B.梯度PCR仪C.原位PCR仪D.荧光PCR仪E.实时PCR仪5.PC叱术扩增DNA,需要的条件是（A）目的基因；引物；四种脱氧核甘酸；DNA聚合酶等；mRNA核糖体A.B.C.D.E.1.PCRg在引物、模板和4种脱氧核糖核甘酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应，其特异性决定因素为（B）A.模板B.引物C.dNTPD.镁离子E.PH缓冲液2 .下述哪种PCR仪扩增样品可以了解样品中DNA原始拷贝数（D）A.普通PCR仪B.梯度PCR仪C.原位PCR仪D.荧光实时PCR仪E.定性PCR仪3 .以下是经过PCR扩增后彳#到的Ct值，哪个样品的DNA原始拷贝数最多（A）A.样品

7、A,Ct=20B.样品A,Ct=22C.样品A,Ct=24D.样品A,Ct=26E样品A,Ct=2813.以空气为加热介质的PCR仪是（C）A.金属板实时定量PCR仪B.96孔板式实时定量PCR仪C离心式实时定量PCRtZD.各孔独立控温的定量PCR仪E.荧光实时定量PCR仪14 .下述哪个PCRT增仪可能具有多色多通道检测系统（D）A.普通PCR仪B.梯度PCR仪C原位PCR仪D.荧光定量PCRZE定性PCR仪15 .下述哪个PCRT增仪对温度控制要求最高（B）A.普通PCR仪B.梯度PCR仪C原位PCR仪D.荧光定量PCRZE定性PCR仪16 .控温精度最高的控温方式是（D）A.水浴锅控温

8、B.压缩机控温C半导体控温D.离心式空气加热控温E都一样17 .在PCRT增过程中，下列哪个步骤对温度精度要求最高（B）A.变性B退火C延伸D退火和变性E都一样18 .在PCRT增过程中，用同样的样品，同样的PCR反应程序，同一个PCR仪,最后的结果差异非常明显，其可能的原因是下列哪个（B）A.温度的准确性差B.温度的均一性差C升降温的速度低D.不同模式下的相同温度特性差E热盖温度不准19 .PCR®酸扩增仪最关键的部分是（A）A.温度控制系统B.荧光检测系统C软件系统D热盖E才羊品基座20 .“位置的边缘效应”是指（D）A.温度的准确性欠佳B.温度的均一性欠佳C边缘升降温速度快D.

9、边缘升降温速度慢E.梯度模式和标准模式温度不一致21 .PCRT增仪升降温速度快有很多优点，下述哪一项应除外（C）A.缩短反应时间B.提高工作效率C消除位置的边缘效应D缩短非特异性反应时间E提高反应特异性22 .在梯度模式下得出最佳反应条件，并以此条件在标准模式下单独做，但结果却不如人意，最有可能的原因是（E）A.样品孔温度与设定温度不一致B样品孔之间的温度有差异C样品孔位置的边缘效应较高D.升降温速度不够快E不同模式温度特性有差异23 .定量PCRT增仪的关机次序一般为（A）A.关软件一关PCR仪一关电脑B.关软件一关电脑一关PCR仪C.关PCR关软件一关电脑D.关PCR关电脑一关软件E.关

10、电脑一关PCR仪一关软件【X型题】每题的备选答案中有两个或两个以上正确答案。1. PC叱术每一个循环均包含以下哪些环节（BCD）A.酶切B.变性C.退火D.延伸E.连接2 .以下哪些酶可用于PCR反应（AC）A. KlenowB. HindiiiC. TaqDN咪合酶D. RNaseE. DNase3 .目前常用的PCR核酸扩增仪控温方式有（CD）A.水浴锅控温B.压缩机控温C.半导体控温D.离心式空气控温E.金属控温4 .普通PCR核酸扩增仪除通常的定性PCRtZ外，还包括（ABCDEA.水浴式PCR仪B.梯度PCR仪C.原位PCR仪D.变温金属块式PCR仪E.变温气流式PCR仪5.按变温方

11、式不同，PCR核酸扩增仪可分为（ADE）A.水浴式PCR仪B.梯度PCR仪C.原位PCR仪D.变温金属块式PCR仪E.变温气流式PCR仪6.目前市场上实时荧光定量PCR仪一般有哪些类别（ADE）A.金属板实时定量PCR仪B.梯度定量PCR仪C.原位定量PCR仪D.离心式实时定量PCR仪E.各孔独立控温的定量PCR仪7 .下述产品哪些属于金属板实时定量PCR仪（BCDA. LightCyc1dM荧光定量PCR仪B. ABI7500荧光定量PCRCZC. MJ公司Chromo4荧光定量PC敬D. Bio-rad公司iCycler荧光定量PCR仪E. Rotor-Gene3000荧光定量PCRtZ8

12、 .下述产品哪些属于离心式实时定量PCR仪（AE）A.LightCycldM荧光定量PCRtZB.ABI7500荧光定量PC敬C.MJ公司Chromo4荧光定量PCR仪D.Biorad公司iCycler荧光定量PCR仪E.Rotor-Gene3000荧光定量PCR仪9 .PC*酸扩增仪的温度控制主要是指（ABD）A.温度的准确性控制B.温度的均一性控制C退火温度控制D.升降温速度控制E延伸温度控制10 .荧光定量PCR仪的荧光检测系统主要包括（B。A.发光二极管B.激发光源C.检测器D.光度计E.光电倍增管11 .荧光定量PCR仪的荧光强度减弱或不稳定，可能的原因有（ABE）A.滤光片发霉B.

13、光源损耗C半导体模块故障D.荧光染料污染E.光电倍增管灵敏度下降三、简答题1 .什么是聚合酶反应（PCR技术？PC岐术的本质是核酸扩增技术，通过加热使双链DNA单开螺旋，在退火温度条件下引物同模板DN煤交,在TaqDNAK合酶，dNTPsMg2利合适pHg冲液存在条件下延伸引物，重复上述“变性一退火一引物延伸”过程至25-40个循环，呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数，可以在体外对目的核酸进行大量复制。2 .PCRK酸扩增仪的工作关键是什么？经历了怎样一个发展过程？PCR8因扩增仪工作关键是温度控制。其发展过程为：水浴锅PC取属于第一代PCR基因扩增仪，以不同温度的水浴锅串联成一个控温体系；压

14、缩机PC敢属于第二代PCR6因扩增仪，由压缩机自动控温，金属导热，控温较第一代PCRS因扩增仪方便；半导体PCRUS于第三代PCR6因扩增仪，由半导体自动控温，金属导热，控温方便，体积小，相对稳定性好；离心式空气加热PC敢属于第三代PCR8因扩增仪，由金属线圈加热，采用空气作为导热媒介，温度均一性好，各孔扩增效率高度一致。3 .PCRK酸扩增仪按照变温方式的不同可分为哪几类？分别有什么特点。PC国因扩增仪按照变温方式通常有以下三类：(1)水浴式PC敢：变温快、时间准、温度均一，但体积大，自动化程度不高。(2)变温金属块式PCFT通过半导体加热和冷却，并由微机控制恒温和冷热处理过程。装置比较牢固

15、耐用，温度变换平稳，有利于保持TaqDNAK合酶的活性。(3)变温气流式PC敢：以空气作为热传播媒介，由大功率风扇及制冷设备提供外部冷空气而制冷。成本较低；安全程度高。微机配上软件，可灵活编程。4 .什么是梯度PCR仪？它有什么优点？梯度PC限是由普通PCRZ衍生出的带梯度PC电能的基因扩增仪。在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在指定范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸索出最适合的反应条件。使用梯度PC戏，多次实验可在一台仪器上完成，既节省实验时间，提高实验效率，又节约实验成本。5 .何谓荧光实时定量PCR(RQ-PCFR技术？荧光实时定量PCR(real-timequantitati

16、vePCR,RQ-PCR)技术即在PC网应体系中加入特异性的荧光染料或探针，荧光信号的变化真实的反映了体系中模板的增加，通过检测荧光信号，从而实时监测整个PC取应过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。6 .荧光实时定量PCR仪有哪些种类，各有什么特点？目前市场上实时荧光定量PC以一般可分三类。(1)金属板式实时定量PC取：可容纳的样本量大，无需特殊耗材，但温度均一性欠佳，有边缘效应，标准曲线的反应条件难以做到与样品完全一致。(2)离心式实时定量PC敢：能保障标准曲线和样品之间反应条件的一致性。但可容纳样品量少，有的需用特殊毛细管作样品管，增加了使用成本。(3)各孔独立控温的定量PC敢：

17、各孔独立控温，适合多指标快速检测。但是上样不如传统方法方便，而且需要独特的扁平反应管，使用成本较高。7 .PC*酸扩增仪的温度控制包括哪些方面？PCRS因扩增仪的温度控制是决定PC网应能否成功的关键，主要包括温度的准确性、均一性以及升降温速度等方面。(1)温度的准确性是指样品孔温度与设定温度的一致性；(2)温度的均一性是指样品孔间的温度差异，关系到不同样品孔之间反应结果的一致性；(3)升降温的速度：升降温速度快，可以缩短反应进行的时间，提高工作效率，并提高PC取应特异性。对梯度PCF来说，除此以外，还必须考虑仪器在梯度模式和标准模式下是否具有同样的温度特性。8 .为什么反应管温控比模块温控更准

18、确？反应管温控模式下，仪器根据探测器所探测到的温控模块的温度由计算机计算出样品管内或PC版孔内样品液的温度来进行控制。由于精确的算法能自动补偿时间，确保反应混合物按照程序设定的时间维持预设温度，所以准确度更高。9 .实时荧光定量PCR扩增仪的荧光检测系统主要由哪两部分组成？激发光源和检测器10 .PCR扩增仪的热盖有什么作用、使用时应注意什么？目前PCRR通常都配备热盖，可使样品管顶部温度达到150c左右，避免蒸发的反应液凝集于管盖而改变PC网应体积。无需加石蜡油，减少了后续实验的麻烦。旋转加压的热盖需注意旋转压力的控制，过松则使热盖没有充分接触反应管而影响结果；过紧则会导致反应管变形，甚至可

19、能造成热盖的机械故障。11 .简述PCRT增仪的操作规程。普通PCFT增仪的操作通常为打开电源，仪器自检，设置温度程序或调出储存的程序，运行即可。定量PCFT增仪的操作一般都是先打开PCFa电源，再打开相连电脑中的相应软件，分别设置温度程序、采集通道，并可根据不同仪器的要求进行一些特殊设置，在仪器中放好PCR1,盖好仪器，运行设置好的反应程序。关机时通常先关软件，再关PCF<,最后关电脑。12 .定量PCRT增仪常见故障有哪些，如何解决？定量PCFT增仪常见故障及解决方法为：（1）荧光染料污染样品孔，解决方法是请工程师清洁样品孔；（2）PCFFT融化，原因可能是温度传感器出问题或是热盖出问题，需工程师检修；（3）个别孔扩增效率差异很大