实验一引言和实验室基础技术—

1、现代植物学研究技术现代植物学研究技术 实验分组：周一至周五（五组）、人员固定、位置固定。 内容：共12个实验，内容涉及植物学（组织切片、组培）、植物生理学（光合、营养、激素、逆境等）、细胞生物学，由多名教师执教。 考核：平时表现（务必本人签名）+实验报告（务必写清组别、单独记分）。实验一实验一 实验室基础技术实验室基础技术 一、实验目的：一、实验目的： 以加强植物科学研究以加强植物科学研究基本功的训练基本功的训练 培养科学研究的良好培养科学研究的良好作风作风 二、实验内容：二、实验内容： 掌握植物科学常规精掌握植物科学常规精密仪器的操作方法密仪器的操作方法 一般的生物数据统计一般的生物数据统计

2、及图表制作技术及图表制作技术具体实验内容具体实验内容（一）电子显示天平的使用（一）电子显示天平的使用（二）可见分光光度计的使用（二）可见分光光度计的使用（三）加液的重现性（或精密度）和准确度（三）加液的重现性（或精密度）和准确度 检验检验（四）（四）pH计的使用计的使用（五）紫外分光光度计的使用（五）紫外分光光度计的使用（六）科研论文中规范图表制作的一般要求（六）科研论文中规范图表制作的一般要求（一）电子显示天平的使用（一）电子显示天平的使用 使用规则使用规则 ：（1）天平在使用前应调节底座螺丝使其保持水平，并不要随便移动天平。（2）看清天平的最大称量，对待称物品最好先粗称，使其重量不要超过最

3、大称量，以免损坏天平。（3）根据称量要求选择合适天平。如要称量植株幼苗的鲜重，选用感量为0.0001克的电子天平，因材料不断蒸发，很难称准，应选感量大的，如感量为 0.01克的电子天平；而制作标准曲线要称取标准药品时则应选取感量较小的，如感量为0.0001或感量为0.001克的电子天平。（4）药品不能直接与天平称盘接触，应选用专用称量纸或干净烧杯等。（5）称量后应及时把结果记录在科研专用本子上，并关闭电源，清扫天平内外，将所用药品放回原处。 至此，一次称量过程才算结束。实验规范训练量程的选择实验规范训练量程的选择天平天平烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶不同规格烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶不同规格具体内

4、容：（1）顶部装载式（Sartorius MP8型）感量0.01克，最大称量1600克。随机选取生长一致的小麦苗4(?)株，洗净，吸去附着水分，分别称重，计算单株平均重和标准差（XSD） （结论？）。（2） Sartorius-GMDH: 感量0.0001克，最大称量160克。准确称取一定量（0.6585g?）的铁氰化钾, 配制100ml 0.02mol/L 铁氰化钾溶液（铁氰化钾的Mw=329.25）。（二）可见分光光度计的使用（二）可见分光光度计的使用使用方法：使用方法：（1）使用本仪器前，使用者应首先了解本仪器的基本结构和工作原理以及各操作旋钮的功能，在未接通电源之前，应检查电源线接线是

5、否牢固，通地是否良好，各旋钮的位置是否正确，同时检查仪器底部的放大器和单色器的二个矽胶干燥筒，如受潮变色，应更换干燥的蓝色矽胶或倒出原矽胶，烘干后再用。（2）在仪器尚未接通电源前，电表的指针必须位于“0”刻线上。（3）将仪器的电源开关接通，打开比色皿暗厢盖。选择需用的单色光波长，调节“0”电位器使电表指“0”，然后将比色皿暗厢盖合上，比色皿处于蒸馏水校正位置，使光电管受光，调节“100%”电位器使电表指针到满刻度附近，仪器预热20分钟左右。（4）放大器灵敏度有5档，是逐步增加的，“1”最低，其选择原则是保证能使空白档良好调到“100%”的情况下尽可能采用灵敏度较低档，这样仪器有更高的稳定性。所

6、以，使用时一般置“1”档。灵敏度不够时再逐级升高，但改灵敏度后须按（3）重新调“0”和“100%”。（5）预热后，按（3）连续几次调整“0”和“100%”，仪器即可进行测定工作。（6）测定时，应先检查比色皿是否配套和洁净，杯间误差应尽量小，比色杯装液一般为杯体积的3/4-4/5，过多会溅出来，污染仪器，过少会影响测定数值。（7）如果大幅度改变测试波长时，在调整“0”和“100%”后稍等片刻（因钨灯在急剧改变亮度后需要一段热平衡时间），当指针稳定后重新调整“0”和“100%”后即可工作。 实验内容实验内容（1）以水为对照，取1ml 0.02 mol/L铁氰化钾溶液于100ml容量瓶中，定容至10

7、0ml。（2）用9100型分光光度计测定该铁氰化钾溶液的吸收光谱，波长在420nm，记录结果。（三）加液的精密度（或重现性）和准确度检验（三）加液的精密度（或重现性）和准确度检验实验原理：实验原理：在定量测定试验中，误差是绝对存在的。它包括系统误差和偶然误差，前者是由于取材误差、仪器误差、试剂误差、操作误差等一些经常性的原因所引起，它直接影响实验结果的准确度；后者则是由于一些偶然的外因所造成，它影响实验结果的精密度（或重现性）。准确度是指测量值与真实值符合的程度，它一般用误差来表示；精密度是指几次重复测定结果之间符合的程度，显示其重现性程度，它用偏差来表示。因此必须善于利用生物统计学的有关原理

8、和方法进行统计分析，以分析和判断实验结果的可靠性和正确性。实验中，每种处理至少要设三次重复，定量测定数据也要有三次重复，否则无法进行统计分析。补充资料 精密度（precision）和准确度准确度（accuracy）不一样，回收回收率率（recovery）与准确度准确度也不一样。 以前曾经有把准确度准确度叫做相对回收率回收率的这种提法，但是现在准确度准确度和回收率回收率是分开算的。 精密度通常包括批（batch）内和批间，主要是指重复处理样品测定的重现性重现性，以RSD考察。 （若确要区分二者：精密度通常指批（batch）内，重现性通常指批间的，都要求5次以上的重复，以RSD考察） 准确度准确度

9、是加标样品通过标准曲线回算的浓度与实际加标量的偏差来考察。 回收率回收率是以加标样品与同浓度的标准品的响应信号（response，即峰面积）的比值来考察。简单的统计学计算公式如下：其中（4）、（5）较常用。(6) 标准误 RSD即Relative Standard Deviation.叫相对标准偏差,也称变异系数(CV). RSD=标准差/平均值*100% 常用它表示精密度. . . . 标准偏差（SD）和标准误(SE)的区别联系 两者都是变异指标，但两者反映的总体不同。 标准偏差反映的是个体观察值间的变异， 标准误反映的是样本均数之间的变异（即样本均数的标准差，是描述均数抽样分布的离散程度及

10、衡量均数抽样误差大小的尺度。差异显著性分析： 在科学研究中，常常还需要检测不同样品或同一样品的不同处理之间是否具有显著性差异及其差异水平。 一般可用t检验（两者间比较）或多重比较（如最小显著差数法，即LSD法或最小显著极差法，即LSR法，等等）。各平均数经多重比较后，常采用标记字母法表示。在平均数之间，凡有一个相同标记字母的即为差异不显著，凡有不同标记字母的即为差异显著，其中小写字母a、b、c等表示=0.05显著水平，大写字母A、B、C等表示=0.01极显著水平。差异显著性也可用标“”号的方法表示，凡达到0.05水平（差异显著）的数据，在其右上角标一个“”号，凡达到0.01水平（差异极显著）的

11、数据，在其右上角标两个“”号，凡未达到0.05水平的数据，则不予标记。 现已有相应专业软件（如SAS、SPSS软件）可完成上述过程。 实验内容实验内容（1）用下列不同类型的移液器，取1ml 0.02mol/L的铁氰化钾溶液至100ml容量瓶 中，混匀后定容。（2）选择（二）2中铁氰化钾溶液的最大吸收波长(420 nm)，用721型分光光度计测量其光密度，至少重复3次。（3）根据测定结果分别计算其标准差和标准误，制成三线表，并比较不同类型移液器加液的重现性和准确度（结论？）。移液器类型：移液器类型：1、普通吸管； 2、胖肚吸管； 3、加样器(俗称“枪”)； 4、加液器。 （四）（四）pHpH计的

12、使用计的使用 适用于测定溶液pH的仪器类型较多，这里仅介绍雷磁25型酸度计和雷磁PHSJ-4型pH计。pHpH计使用三步骤：计使用三步骤： 安装电极安装电极校正校正测量测量（4）注意事项注意事项 清洗电极后,不要用滤纸擦拭玻璃膜,而应用滤纸吸干,避免损坏玻璃薄膜、防止交叉污染,影响测量精度。 电极不能用于强酸、强碱或其他腐蚀性溶液,严禁在纯水或脱水性介质如无水乙醇、重铬酸钾等中使用。供试型号：供试型号：雷磁PHS-3C型酸度计（左）雷磁PHSJ-4型pH计（右） 实验内容：实验内容： 用上述两种仪器测定两种未知溶液的pH值，作记录，将结果列于表中，并加以比较。（五）紫外（五）紫外/ /可见分可

13、见分光光度计的使光光度计的使用用上海仪器厂754型北京瑞利仪器厂UV-9100型（1 1）开机准备）开机准备(1)开启仪器右侧的电源开关开启仪器右侧的电源开关(右侧右侧),打开样打开样品室盖预热品室盖预热10分钟以上；若测紫外光分钟以上；若测紫外光,将将背面光源拉杆推至背面光源拉杆推至UV档档,并打开氘灯开关并打开氘灯开关(左侧左侧);(2)调节仪器上方转盘，选择所需波长调节仪器上方转盘，选择所需波长;(3)推开样品室盖，推开样品室盖， 将空白液及待测液依将空白液及待测液依次插入次插入1（由近及远由近及远）、）、2、3、4格中。格中。（2 2）调零）调零(1)将拉杆推入最底部将拉杆推入最底部,

14、关盖；关盖；(2)按橙色按橙色“MODE”键，使键，使“%T”处红灯处红灯亮；亮；(3)按蓝色按蓝色“%T”键，显示键，显示“0.0”。（3 3）调）调“100%”100%”： (1)拉出样品座一格（拉出样品座一格（适当回推，听咔哒适当回推，听咔哒声声），光路对准空白液；），光路对准空白液； (2)按按“MODE”键，键，“ABS”处红灯亮，按处红灯亮，按蓝色蓝色“100%T/ABS 0”键，显示键，显示0.000（仪（仪器已将空白液作为器已将空白液作为A=0，T=100%记忆）。记忆）。（4 4）测定：）测定： (1)再拉出样品座，使光路对准各个待测液；再拉出样品座，使光路对准各个待测液；

15、(2)仪器显示的数值即为待测液的仪器显示的数值即为待测液的A 值值,记录。记录。（5 5）结束：）结束：(1)比色皿取出清洗，倒置于桌面（比色皿取出清洗，倒置于桌面（垫吸水纸垫吸水纸） 凉凉 干后收于专用盒内。干后收于专用盒内。(2)推样品座至最底部推样品座至最底部,使光路对准挡光板。使光路对准挡光板。(3)关闭样品室盖，关掉电源关闭样品室盖，关掉电源(如使用氘灯如使用氘灯,先关氘灯先关氘灯后，再关电源后，再关电源)。(4)作好使用记录作好使用记录。实验内容：用紫外吸收法测定细胞内物质的外渗实验内容：用紫外吸收法测定细胞内物质的外渗（1）取生长一致的植物叶片约1克，剪成0.5cm见方的小块，在

16、蒸馏水中洗涤两次，用滤纸吸干后备用。（2）各取0.2克放入4支试管中，其中2支放入冰箱冷冻室内进行冰冻处理，另2支放在室温下作对照。（3）约0.5小时左右后各加8ml 蒸馏水，轻轻摇匀，再静置10分钟以上。（4）取上清液，在264nm 波长下，用紫外/可见分光光度计测定定外渗液的光密度值。（5）计算并比较二者膜伤害的程度（结论？）。 （六）规范图表制作的一般要求（六）规范图表制作的一般要求 在科研论文或报告中，不论使用图还是表，都应能简明、直观地反映作者想说明的问题。其中图的简明直观性甚于表，但表中可包括更多的数据内容。 现在的期刊、书籍中使用的图表都要求规范，否则可能会在很大程度上影响文章的

17、顺利接受和发表。（1 1）图的规范制作）图的规范制作使用Excel软件，根据不同目的可制作柱形图、折线图、条形图、饼形图等多种图形。其一般要求有：（1）规范完整的图一般应包括题目（现多数期刊、书籍要求中、英文对照）、正文、脚注等。（2）题目、脚注应置于正文的正下方，一篇文章中若有多个图时，应编号并按顺序放于文中相应位置。（3）图正文中横、纵坐标应标明坐标及其单位名称，横、纵坐标应尽量从“0”开始，单位长度应等长。横、纵坐标很长时可用截断方式表示。（4）图中数据应有统计分析（一般为标准差和差异显著性分析）并在图中显示。图例（图例（Luo QY et al.,JPP,2005）（2 2）表的制作）表的制作一般可使用Word软件进行。其总体要求为“三线式三