实验室安全基础知识

1、实验室生物安全基础知识实验室生物安全基础知识 实验室生物安全基本概念实验室安全危害来源生物实验室危害来源： 生物危害 其他危害 危险性化学品 火的危害 电的危害 噪声 电离辐射等一、生物安全基本知识 相关文件和标准 中华人民共和国国务院令第中华人民共和国国务院令第424424号号病原微生物实验室病原微生物实验室生物安全管理条例生物安全管理条例已经已经20042004年年1111月月5 5日国务院第日国务院第6969次次常务会议通过并施行。（共七章七十二条）。常务会议通过并施行。（共七章七十二条）。 国家环境保护总局令第国家环境保护总局令第3232号号病原微生物实验室生物病原微生物实验室生物安全

2、环境管理办法安全环境管理办法 （20062006年年5 5月月1 1日实施）日实施） 福建省实验动物许可证管理办法（共福建省实验动物许可证管理办法（共1515条，条，20032003年十年十月一日实施）月一日实施） CNASCNAS已于已于20092009年年0606月月3030日发布日发布实验室生物安全认可实验室生物安全认可准则准则（CNAS-CL05:2009CNAS-CL05:2009），），20092009年年0707月月0101日正式实日正式实施。施。 实验室生物安全认可规则实验室生物安全认可规则（CNAS-RL05CNAS-RL05：20082008） 世界卫生组织（世界卫生组织（

3、WHOWHO）实验室生物安全手册）实验室生物安全手册一、生物安全基本知识相关文件和标准GB 19489-2008 GB 19489-2008 实验室实验室 生物安全通用要求生物安全通用要求GB 50346-2004 GB 50346-2004 生物安全实验室建筑技术规范生物安全实验室建筑技术规范GB 15981-1995 GB 15981-1995 消毒与灭菌效果评价方法与标准消毒与灭菌效果评价方法与标准GB/T 19495.2-2004 GB/T 19495.2-2004 转基因产品检测转基因产品检测 实验室技术要求实验室技术要求GB/T 27403-2008 GB/T 27403-2008

4、 实验室质量控制规范实验室质量控制规范 食品分子生物学检测食品分子生物学检测GB/T 27405-2008 GB/T 27405-2008 实验室质量控制规范实验室质量控制规范 食品微生物检测食品微生物检测GB 50073-2001 GB 50073-2001 洁净厂房设计规范洁净厂房设计规范GBJ19-87 GBJ19-87 采暖通风和空气调节设计规范采暖通风和空气调节设计规范WS233-2002 WS233-2002 微生物和生物医学实验室安全通用准则微生物和生物医学实验室安全通用准则SN/T 1193-2003 SN/T 1193-2003 基因检验实验室技术要求基因检验实验室技术要求Y

5、Y0569-2005 YY0569-2005 生物安全柜生物安全柜ISO 14644.1ISO 14644.18 8 洁净室及相关受控环境国际标准洁净室及相关受控环境国际标准ISO/DIS 14698.1 ISO/DIS 14698.1 3 3：洁净室及相关受控环境：洁净室及相关受控环境 生物污染控制生物污染控制一、生物安全基本知识 什么叫实验室生物安全？Laboratory bilsafetyLaboratory bilsafety 实验室的生物安全条件和状态不低于容许水实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平，可避免实验室人员、来访人员、社区及环境平，可避免实验室人员、来访人员、社区及环境

6、受到不可接受的损害，符合相关法规、标准等对受到不可接受的损害，符合相关法规、标准等对实验室生物安全责任的要求。实验室生物安全责任的要求。“实验室生物安全”一词用来描述那些用以防止发生病原体或毒素无意中暴露及意外释放的防护原则、技术以及实践。 实验室生物安全防护（biosafety protection for laboratories) 是指当实验室工作人员所处理的实验对象含有致病性微生物及其毒素时，通过在实验室设计建造、使用个体防护设施、严格遵守标准化工作及操作程序等方面采取综合措施，以确保实验室工作人员不受实验室对象侵染，确保周围环境不受污染。一、生物安全基本知识 实验室生物安全保障（la

7、boratory biosecurity） “实验室生物安全保障”则是指单位和个人为防止病原体或毒素丢失、被窃、滥用、转移或有意释放而采取的安全措施。气气溶胶胶 aerosols 悬悬浮于气气体介质质中的粒径径一般为为0.001 100m 的固态态或液态态微小粒子形成的相对稳对稳定的分散 体系。一、生物安全基本知识感染性微生物的危险度等级分类感染性微生物的危险度等级分类危险度危险度 1 1 级（无或极低的个体和群体危险）级（无或极低的个体和群体危险） 不太可能引起人或动物致病的微生物。危险度危险度2 2 级（个体危险中等，群体危险低）级（个体危险中等，群体危险低） 病原体能够对人或动物致病，但

8、对实验室工作人员、社区、牲畜或环境不易导致严重危害。实验室暴露也许会引起严重感染，但对感染有有效的预防和治疗措施，并且疾病传播的危险有限。危险度危险度3 3 级（个体危险高，群体危险低）级（个体危险高，群体危险低） 病原体通常能引起人或动物的严重疾病，但一般不会发生感染个体向其他个体的传播，并且对感染有有效的预防和治疗措施。危险度危险度4 4 级（个体和群体的危险均高）级（个体和群体的危险均高） 病原体通常能引起人或动物的严重疾病，并且很容易发生个体之间的直接或间接传播，对感染一般没有有效的预防和治疗措施。一、生物安全基本知识 实验实验室分级级实验室可以分为：实验室可以分为： 基础实验室基础实

9、验室生物安全防护水平一级（生物安全防护水平一级（BSL-1BSL-1） 基础实验室基础实验室生物安全防护水平二级（生物安全防护水平二级（BSL-2BSL-2） 防护实验室防护实验室生物安全防护水平三级生物安全防护水平三级 （BSL-3BSL-3） 最高防护实验室最高防护实验室生物安全防护水平四级（生物安全防护水平四级（BSL-4BSL-4） 根据操作不同危险度等级微生物所需的实验室设计特根据操作不同危险度等级微生物所需的实验室设计特点、建筑构造、防护设施、仪器、操作以及操作程序来决点、建筑构造、防护设施、仪器、操作以及操作程序来决定实验室的生物安全水平。表定实验室的生物安全水平。表1 1 叙述

10、了与不同危险度等级叙述了与不同危险度等级相对应的（而非相对应的（而非“等同的等同的”）各危险度等级微生物所要求）各危险度等级微生物所要求的实验室生物安全水平。的实验室生物安全水平。危险度危险度等等 级级生物安全水平生物安全水平实验室类型实验室类型实验室操作实验室操作安全设施安全设施1 级级 基础实验室基础实验室生物安全水平生物安全水平一一级级基础的教学、基础的教学、研究研究GMT不需要；开放实验不需要；开放实验台台2 级级基础实验室基础实验室生物安全水平生物安全水平二二级级初级卫生服初级卫生服务；诊断、务；诊断、研究研究加防护服、生物危加防护服、生物危害标志害标志开放实验台，此外开放实验台，此

11、外需需BSC 用于防护可用于防护可能生成的气溶胶能生成的气溶胶3 级级防护实验室防护实验室生物安全水平生物安全水平三三级级特殊的诊断、特殊的诊断、研究研究在二级生物安全防在二级生物安全防护水平上增加特殊护水平上增加特殊防护服、进入制度、防护服、进入制度、定向气流定向气流BSC 和或其他所和或其他所有实验室工作所需有实验室工作所需要的基本设备要的基本设备4 级级最高防护实验最高防护实验室室生物安全生物安全水平水平四级四级危险病原体危险病原体研究研究在三级生物安全防在三级生物安全防护水平上增加气锁护水平上增加气锁入口、出口淋浴、入口、出口淋浴、污染物品的特殊处污染物品的特殊处理理级级BSC 或或级

12、级BSC并穿着正压服、并穿着正压服、双开门高压灭菌器双开门高压灭菌器（穿过墙体）、经（穿过墙体）、经过滤的空气过滤的空气 生物安全水平、操作和设备生物安全水平、操作和设备 BSC:生物安全柜；GMT:微生物操作技术规范生物安全水平生物安全水平1级级2级级3级级4级级实验室隔离实验室隔离a不需要不需要不需要不需要需要需要需要需要房间能够密闭消毒房间能够密闭消毒不需要不需要不需要不需要需要需要需要需要通风通风向内的气流向内的气流通过建筑系统的通风设备通过建筑系统的通风设备HEPA HEPA 过滤排风过滤排风不需要不需要不需要不需要不需要不需要最好有最好有最好有最好有不需要不需要需要需要需要需要需要

13、需要/不需要不需要b需要需要需要需要需要需要双门入口双门入口不需要不需要不需要不需要需要需要需要需要气锁气锁不需要不需要不需要不需要不需要不需要需要需要带淋浴设施的气锁带淋浴设施的气锁不需要不需要不需要不需要不需要不需要需要需要通过间通过间不需要不需要不需要不需要需要需要/ 不同生物安全水平对设施的要求不同生物安全水平对设施的要求 a a 在环境与功能上与普通流动环境隔离在环境与功能上与普通流动环境隔离 b b 取决于排风位置取决于排风位置生物安全水平生物安全水平1级级2级级3级级4级级带淋浴设施的通过间带淋浴设施的通过间不需要不需要不需要不需要需要需要/不需要不需要c不需要不需要污水处理污水

14、处理不需要不需要不需要不需要需要需要需要需要高压灭菌器高压灭菌器现场现场实验室内实验室内双门双门不需要不需要不需要不需要不需要不需要最好有最好有不需要不需要不需要不需要需要需要最好有最好有最好有最好有需要需要需要需要需要需要生物安全柜生物安全柜不需要不需要最好有最好有需要需要需要需要人员安全监控条件人员安全监控条件d d不需要不需要不需要不需要最好有最好有需要需要 不同生物安全水平对设施的要求不同生物安全水平对设施的要求c c 取决于实验室中所使用的微生物因子取决于实验室中所使用的微生物因子 d d 例如：观察窗、闭路电视、双向通讯设备例如：观察窗、闭路电视、双向通讯设备个体防护装备装备装备避

15、免的危害避免的危害安全性特征安全性特征实验服、隔离衣、实验服、隔离衣、连体衣连体衣污染衣服污染衣服背面开口背面开口罩在日常服装外罩在日常服装外塑料围裙塑料围裙污染衣服污染衣服防水防水鞋袜鞋袜碰撞和喷溅碰撞和喷溅不露脚趾不露脚趾护目镜护目镜碰撞和喷溅碰撞和喷溅防碰撞镜片（必须有视力校正或外戴视力校正眼镜）防碰撞镜片（必须有视力校正或外戴视力校正眼镜）侧面有护罩侧面有护罩安全眼镜安全眼镜碰撞碰撞防碰撞镜片（必须有视力校正）防碰撞镜片（必须有视力校正）侧面有护罩侧面有护罩面罩面罩碰撞和喷溅碰撞和喷溅罩住整个面部罩住整个面部发生意外时易于取下发生意外时易于取下防毒面具防毒面具吸入气溶胶吸入气溶胶在设计

16、上包括一次性使用的、整在设计上包括一次性使用的、整个面部或一半面部空气净化的、个面部或一半面部空气净化的、整个面部或加罩的动力空气净化整个面部或加罩的动力空气净化（powered air purifyingpowered air purifying，PAPRPAPR）的以及供气的防毒面具的以及供气的防毒面具手套手套直接接触微生物直接接触微生物划破划破得到微生物学认可的一次性乳胶、乙烯树脂或聚腈类材得到微生物学认可的一次性乳胶、乙烯树脂或聚腈类材料料 保护手保护手 网孔结构网孔结构一级和二级生物安全水平一级和二级生物安全水平安全指南安全指南主要内容 实验室的设计和设施 实验室的基本规范 健康和医

17、学监测 培训 实验室设备 检测过程安全防护 废弃物处理一、实验室的设计和设施在设计实验室和安排某些类型的实验工作时，对于那些可能造成安全问题的情况在设计实验室和安排某些类型的实验工作时，对于那些可能造成安全问题的情况要加以特别关注，这些情况包括：要加以特别关注，这些情况包括：1 1、气溶胶的形成、气溶胶的形成2 2、处理大容量和、处理大容量和或高浓度微生物或高浓度微生物3 3、仪器设备过度拥挤和过多、仪器设备过度拥挤和过多4 4、啮齿动物和节肢动物的侵扰、啮齿动物和节肢动物的侵扰5 5、未经允许人员进入实验室、未经允许人员进入实验室6 6、工作流程：一些特殊标本和试剂的使用。、工作流程：一些特

18、殊标本和试剂的使用。 设施和设备要求详见设施和设备要求详见 GB/T 19489-2008GB/T 19489-2008中的要求中的要求典型的一级生物安全水平实验室典型的二级生物安全水平实验室在生物安全柜中进行可能发生气溶胶的操作程序。在生物安全柜中进行可能发生气溶胶的操作程序。门保持关闭并贴上适当的危险标志。潜在被污染的废弃物同普通废门保持关闭并贴上适当的危险标志。潜在被污染的废弃物同普通废弃物隔开。弃物隔开。二、实验室的基本规范 BSL-和BSL-实验室： 1 1进入规定进入规定 2 2工作人员的防护要求工作人员的防护要求 3. 3. 有关安全操作有关安全操作 4. 4. 实验室工作区实验

19、室工作区 5. 5. 生物安全管理生物安全管理 1. 进入规定 1、在处理危险度2 级或更高危险度级别的微生物时，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志（图1）。 2、只有经批准的人员方可进入实验室工作区域。 3、实验室的门应保持关闭。 4、儿童不应被批准或允许进入实验室工作区域。 5、进入动物房应当经过特别批准。 6、与实验室工作无关的动物不得带入实验室。2.人员防护1 1、在实验室工作时，任何时候都必须穿着连体衣、隔离服或工作服。、在实验室工作时，任何时候都必须穿着连体衣、隔离服或工作服。2 2、在进行可能直接或意外接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的、在进行可能直接或意外接触到

20、血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先消材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。毒再摘除，随后必须洗手。3 3、在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，、在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。都必须洗手。4 4、为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或人工紫外线辐射的伤害，、为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或人工紫外线辐射的伤害，必须戴安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。必须戴安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。5 5、严禁穿着实验室

21、防护服离开实验室，（如去餐厅、咖啡厅、办公室、严禁穿着实验室防护服离开实验室，（如去餐厅、咖啡厅、办公室、图书馆、员工休息室和卫生间）。图书馆、员工休息室和卫生间）。6 6、不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。、不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。7 7、禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。、禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。8 8、禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。、禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。9 9、在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。、在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。3.有关安全操作有关安全操作1 1、严禁用

22、口吸移液管。、严禁用口吸移液管。2 2、严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。、严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。3 3、所有的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。、所有的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。4 4、应限制使用皮下注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取实验、应限制使用皮下注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取实验动物体液，皮下注射针头和注射器不能用于替代移液管或用作其他用途。动物体液，皮下注射针头和注射器不能用于替代移液管或用作其他用途。5 5、出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室、出现溢出、事故以及明显或可能

23、暴露于感染性物质时，必须向实验室主管报告。实验室应保存这些事件或事故的书面报告。主管报告。实验室应保存这些事件或事故的书面报告。6 6、必须制订关于如何处理溢出物的书面操作程序，并予以遵守执行。、必须制订关于如何处理溢出物的书面操作程序，并予以遵守执行。7 7、污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物、污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物理学方法）。根据所处理的微生物因子的危险度评估结果，可能需要准备理学方法）。根据所处理的微生物因子的危险度评估结果，可能需要准备污水处理系统。污水处理系统。8 8、需要带出实验室的手写文件必须保证在实验室内没有受到污

24、染。、需要带出实验室的手写文件必须保证在实验室内没有受到污染。4. 实验室工作区1 1、实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。、实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。2 2、发生具有潜在危害性的材料溢出以及在每天工作结束之后，都必、发生具有潜在危害性的材料溢出以及在每天工作结束之后，都必须清除工作台面的污染。须清除工作台面的污染。3 3、所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，、所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须清除污染。必须清除污染。4 4、在进行包装和运输时必须遵循国家和、在进行包装和运输时必须遵循国家和或国际的相关规定。或国际

25、的相关规定。5 5、如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。、如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。5. 生物安全管理1 1、实验室主任（对实验室直接负责的人员）负责制订和采用生物安全、实验室主任（对实验室直接负责的人员）负责制订和采用生物安全管理计划以及安全或操作手册。管理计划以及安全或操作手册。2 2、实验室主管（向实验室主任汇报）应当保证提供常规的实验室安全、实验室主管（向实验室主任汇报）应当保证提供常规的实验室安全培训。培训。3 3、要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅、要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全或操

26、作手册，并遵循标准的操作和规程。实验室主管应当确读生物安全或操作手册，并遵循标准的操作和规程。实验室主管应当确保所有实验室人员都了解这些要求。实验室内应备有可供取阅的安全或保所有实验室人员都了解这些要求。实验室内应备有可供取阅的安全或操作手册。操作手册。4 4、应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。、应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。5 5、如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、监测和治疗，、如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、监测和治疗，并应妥善保存相应的医学记录。并应妥善保存相应的医学记录。三、健康和医学监测主管机构有责任通过实验室主任来确保实验室全体工作人员接受

27、适当主管机构有责任通过实验室主任来确保实验室全体工作人员接受适当的健康监测。监测的目的是监控职业获得性疾病。为达到这些目的，的健康监测。监测的目的是监控职业获得性疾病。为达到这些目的，应进行如下工作：应进行如下工作：1 1、根据需要提供主动或被动免疫（工作人员的免疫接种）、根据需要提供主动或被动免疫（工作人员的免疫接种）2 2、促进实验室感染的早期检测、促进实验室感染的早期检测3 3、应禁止高度易感人群（如孕妇或免疫损伤人员）在高危险实验室中、应禁止高度易感人群（如孕妇或免疫损伤人员）在高危险实验室中工作工作4 4、提供有效的个体防护装备和方法。、提供有效的个体防护装备和方法。在一级生物安全水

28、平操作微生物的实验室工作人员的监测指南： 历史证据表明，在一级生物安全水平操作的微生历史证据表明，在一级生物安全水平操作的微生物不太可能引起人类疾病或兽医学意义的动物疾病。物不太可能引起人类疾病或兽医学意义的动物疾病。但理想的做法是，所有实验室工作人员应进行上岗前但理想的做法是，所有实验室工作人员应进行上岗前的体检，并记录其病史。疾病和实验室意外事故应迅的体检，并记录其病史。疾病和实验室意外事故应迅速报告，所有工作人员都应意识到应用规范的实验室速报告，所有工作人员都应意识到应用规范的实验室操作技术的重要性。操作技术的重要性。 在二级生物安全水平操作微生物的实验室工作人员的监测在二级生物安全水平

29、操作微生物的实验室工作人员的监测指南：指南： 1、必须有录用前或上岗前的体检。记录个人病史，并进、必须有录用前或上岗前的体检。记录个人病史，并进行一次有目的的职业健康评估。行一次有目的的职业健康评估。 2、实验室管理人员要保存工作人员的疾病和缺勤记录。、实验室管理人员要保存工作人员的疾病和缺勤记录。 3、育龄期妇女应知道某些微生物（如风疹病毒）的职业、育龄期妇女应知道某些微生物（如风疹病毒）的职业暴露对未出生孩子的危害。保护胎儿的正确措施因妇女可暴露对未出生孩子的危害。保护胎儿的正确措施因妇女可能接触的微生物而异。能接触的微生物而异。四、培训 进入实验室工作人员必须经过培训进入实验室工作人员必

30、须经过培训 , , 方能取得进入实验室控制区域工作的方能取得进入实验室控制区域工作的资格。培训由实验室负责人组织资格。培训由实验室负责人组织, ,熟悉实验室工作和操作规范的人员担任熟悉实验室工作和操作规范的人员担任辅导。培训内容包括辅导。培训内容包括 : :1. 1. 实验室生物安全管理规定、自身防护的规定及相关的其它规定实验室生物安全管理规定、自身防护的规定及相关的其它规定 ；2. 2. 实验室各项仪器装备的使用方法；实验室各项仪器装备的使用方法；3. 3. 正确的着装方法；正确的着装方法；4. 4. 微生物学操作基本技术及无菌操作方法；微生物学操作基本技术及无菌操作方法；5. 5. 实验室

31、清洁及消毒方法；实验室清洁及消毒方法；6. 6. 意外事故处理方法；意外事故处理方法；7. 7. 国内外新技术、新方法等的不定期培训。国内外新技术、新方法等的不定期培训。培训的实施细则培训的实施细则 1. 1. 理论培训理论培训: :(l) (l) 培训目标培训目标 : : 熟悉本实验室的各项规章制度和操作规范熟悉本实验室的各项规章制度和操作规范 , ,形成初步的实验室工作概念。了解本实验室从事工作的特点以形成初步的实验室工作概念。了解本实验室从事工作的特点以及各种微生物的危害评估文件。及各种微生物的危害评估文件。(2) (2) 培训方式培训方式 : : 讲解。讲解。(3) (3) 培训内容培

32、训内容 : : 本实验室各项成文的规章制度本实验室各项成文的规章制度: :生物安全防护、生物安全防护、废弃物处理、安全制度、卫生制度、责任制度、试剂定购制度、废弃物处理、安全制度、卫生制度、责任制度、试剂定购制度、仪器使用制度等。实验室的各项规章制度和生物安全管理手册。仪器使用制度等。实验室的各项规章制度和生物安全管理手册。(4) (4) 考核考核 : : 由本实验室三位工作人员组织对理论学习的书面考由本实验室三位工作人员组织对理论学习的书面考试和面试工作。书面考试注重其掌握的准确程度试和面试工作。书面考试注重其掌握的准确程度, ,面试主要测试面试主要测试其熟练程度和灵活应变能力。考核本合格者

33、须重新学习其熟练程度和灵活应变能力。考核本合格者须重新学习, ,不能进不能进入下一步的培训。入下一步的培训。培训的实施细则培训的实施细则 2. 2. 常规技能培训常规技能培训: : (l) (l) 培训目标培训目标 : : 熟练基本实验操作和仪器的使用；初步培养实验的基本观熟练基本实验操作和仪器的使用；初步培养实验的基本观念和良好的实验习惯。念和良好的实验习惯。 (2) (2) 培训方式培训方式 : : 现场实验。现场实验。 (3) (3) 培训内容培训内容 : :卫生打扫卫生打扫: : 实验室地面、实验台面、超净台面、垃圾处理以及打扫得先后顺序；实验室地面、实验台面、超净台面、垃圾处理以及打

34、扫得先后顺序；工作休息区的卫生打扫。工作休息区的卫生打扫。 实验室常规操作技术实验室常规操作技术 : :包括无菌观念、平板的制备、划线分离、显微镜观察、包括无菌观念、平板的制备、划线分离、显微镜观察、菌落接种、活化、菌体收集、菌（毒）种保存等。菌落接种、活化、菌体收集、菌（毒）种保存等。 小型仪器的使用：微量移液器和移液管的使用、小型仪器的使用：微量移液器和移液管的使用、pHpH计和试纸、天平、混匀计和试纸、天平、混匀器、微波炉、电磁炉、水浴锅等。器、微波炉、电磁炉、水浴锅等。 玻璃仪器的清洗玻璃仪器的清洗 : : 量筒、烧杯、三角瓶等。量筒、烧杯、三角瓶等。 大型仪器的使用大型仪器的使用 :

35、 : 普通冰箱和低温冰箱普通冰箱和低温冰箱( (存放和处理样品存放和处理样品) )、 高压锅、离心高压锅、离心机、液氮罐、生物安全柜、生化培养箱、电泳设备、超净台、机、液氮罐、生物安全柜、生化培养箱、电泳设备、超净台、 PCR PCR 仪、摇床、仪、摇床、超声破碎仪、显微镜等。超声破碎仪、显微镜等。 消毒和灭菌方法消毒和灭菌方法 : : 物理灭菌（紫外、过滤、灼烧、高压物理灭菌（紫外、过滤、灼烧、高压) )法、化学灭菌法、化学灭菌( (熏蒸、熏蒸、酒精、消毒液酒精、消毒液) ) 法等。法等。 办公用品使用的培训办公用品使用的培训 : : 电话、传真机、电脑、打印机等。电话、传真机、电脑、打印机

36、等。 五、实验室设备 选择设备时应符合一些基本原则，即：选择设备时应符合一些基本原则，即： 1 1、在设计上应能阻止或限制操作人员与感染性物质间的接、在设计上应能阻止或限制操作人员与感染性物质间的接触触 2 2、建筑材料应防水、耐腐蚀并符合结构要求、建筑材料应防水、耐腐蚀并符合结构要求 3 3、设备装配后应无毛刺、锐角以及易松动的部件、设备装配后应无毛刺、锐角以及易松动的部件 4 4、设备的设计、建造与安装应便于操作、易于维护、清洁、设备的设计、建造与安装应便于操作、易于维护、清洁、清除污染和进行质量检验。应尽量避免使用玻璃及其他易碎清除污染和进行质量检验。应尽量避免使用玻璃及其他易碎的物品。

37、的物品。 需要详细咨询设备的性能和结构规格，以确保设施具备必要需要详细咨询设备的性能和结构规格，以确保设施具备必要的安全特性。的安全特性。基本生物安全设备1 1、移液辅助器、移液辅助器避免用口吸的方式移液。有不同设计的多种产品可供避免用口吸的方式移液。有不同设计的多种产品可供使用。使用。2 2、生物安全柜，在以下情况使用：、生物安全柜，在以下情况使用： 处理感染性物质；如果使用密封的安全离心杯，并在生物安全柜内处理感染性物质；如果使用密封的安全离心杯，并在生物安全柜内装样、取样，则这类材料可在开放实验室离心装样、取样，则这类材料可在开放实验室离心 空气传播感染的危险增大时空气传播感染的危险增大

38、时 进行极有可能产生气溶胶的操作时（包括离心、研磨、混匀、剧烈进行极有可能产生气溶胶的操作时（包括离心、研磨、混匀、剧烈摇动、超声破碎、打开内部压力和周围环境压力不同的盛放有感染性物摇动、超声破碎、打开内部压力和周围环境压力不同的盛放有感染性物质的容器、动物鼻腔接种以及从动物或卵胚采集感染性组织）。质的容器、动物鼻腔接种以及从动物或卵胚采集感染性组织）。3 3、一次性塑料接种环，也可在生物安全柜内使用电加热接种环，以减少、一次性塑料接种环，也可在生物安全柜内使用电加热接种环，以减少生成气溶胶。生成气溶胶。4 4、螺口盖试管及瓶子。、螺口盖试管及瓶子。5 5、用于清除感染性材料污染的高压灭菌器或

39、其他适当工具。、用于清除感染性材料污染的高压灭菌器或其他适当工具。6 6、一次性巴斯德塑料移液管，尽量避免使用玻璃制品。、一次性巴斯德塑料移液管，尽量避免使用玻璃制品。7 7、在投入使用前，像高压灭菌器和生物安全柜等设备必须用正确方法进、在投入使用前，像高压灭菌器和生物安全柜等设备必须用正确方法进行验收。应参照生产商的说明书定期检测。行验收。应参照生产商的说明书定期检测。常用设备的常用设备的安全操作注意事项（安全操作注意事项（1 1） 生物安全柜分为生物安全柜分为I I、IIII、IIIIII个不同等级。个不同等级。 I I级能够保护工作人员和周围环境，但不能切实保护操级能够保护工作人员和周围

40、环境，但不能切实保护操作样本，因此生物安全柜作样本，因此生物安全柜I I级不能用于食品微生物检验级不能用于食品微生物检验的无菌操作。的无菌操作。 IIII级生物安全柜在设计上不但能提供个体防护，而且级生物安全柜在设计上不但能提供个体防护，而且能保护工作台面的物品不受空气的污染，其有四种不能保护工作台面的物品不受空气的污染，其有四种不同的类型（同的类型（A1A1、A2A2、B1B1和和B2B2型），可用于操作危险度型），可用于操作危险度I II I级和级和IIIIII级的感染性物质。级的感染性物质。 IIIIII级生物安全柜则可提供更高级别的生物安全保护。级生物安全柜则可提供更高级别的生物安全保

41、护。常用设备的常用设备的安全操作注意事项（安全操作注意事项（2 2）生物安全柜使用要点：生物安全柜使用要点：（1 1）使用者应熟知生物安全柜的使用方法和局限性；）使用者应熟知生物安全柜的使用方法和局限性；（2 2）使用前后，工作台面和内壁要用消毒剂擦拭消毒，生物安全柜风机应至少运行）使用前后，工作台面和内壁要用消毒剂擦拭消毒，生物安全柜风机应至少运行5min5min完完成净化后使用；成净化后使用；（3 3）使用中不能打开玻璃观察档板，应穿个体防护服；）使用中不能打开玻璃观察档板，应穿个体防护服；（4 4）生物安全柜内尽量少放置器材或标本、不能影响后部压力排风系统的气流循环；）生物安全柜内尽量少

42、放置器材或标本、不能影响后部压力排风系统的气流循环；（5 5）放入生物安全柜的物品应采用）放入生物安全柜的物品应采用7070酒精来清除表面污染。可以在消毒剂浸湿的毛巾上酒精来清除表面污染。可以在消毒剂浸湿的毛巾上进行实验，以吸收可能溅出的液滴；进行实验，以吸收可能溅出的液滴；（6 6）耐高压灭菌的生物危害性废弃物袋以及移液适宜于盛放盘不应放在生物安全柜的外面；）耐高压灭菌的生物危害性废弃物袋以及移液适宜于盛放盘不应放在生物安全柜的外面；（7 7）在工作台面上的操作应按照从清洁区到污染区的方向进行；）在工作台面上的操作应按照从清洁区到污染区的方向进行；（8 8）在生物安全柜内所形成的几乎没有微生

43、物的环境中，应避免使用明火，可使用电热式）在生物安全柜内所形成的几乎没有微生物的环境中，应避免使用明火，可使用电热式接种环灭菌器，最好使用一次性无菌接种环；接种环灭菌器，最好使用一次性无菌接种环；（9 9）尽可能避免双臂频繁进出生物安全柜，否则会干扰空气屏障的完全性，影响防护；）尽可能避免双臂频繁进出生物安全柜，否则会干扰空气屏障的完全性，影响防护；（1010）一旦发生生物学危害物品溢出，应在生物安全柜运行状态下清理，使用有效的消毒剂，）一旦发生生物学危害物品溢出，应在生物安全柜运行状态下清理，使用有效的消毒剂，尽可能减少气溶胶，所有接触溢出的物品都要进行消毒或高压灭菌。尽可能减少气溶胶，所有

44、接触溢出的物品都要进行消毒或高压灭菌。（1111）每年应对生物安全防护效果进行测试，定期维护。）每年应对生物安全防护效果进行测试，定期维护。常用设备的常用设备的安全操作注意事项（安全操作注意事项（3 3）离心机离心机 离心机是最常用的实验室仪器，最易导致实验室污染。掌握正确的离心机使用技术十分重要。离心机是最常用的实验室仪器，最易导致实验室污染。掌握正确的离心机使用技术十分重要。 (1)(1)在使用实验室离心机时，仪器良好的机械性能是保障微生物安全的前提条件。在使用实验室离心机时，仪器良好的机械性能是保障微生物安全的前提条件。 (2)(2)应按照操作手册来操作离心机。应按照操作手册来操作离心机

45、。 (3)(3)离心机放置的高度应当使小个子工作人员也能够看到离心机内部，以正确放置十字轴和离心桶。离心机放置的高度应当使小个子工作人员也能够看到离心机内部，以正确放置十字轴和离心桶。 (4)(4)离心管和盛放离心标本的容器应当由厚壁玻璃制成，或最好为塑料制品，并且在使用前应检查是否离心管和盛放离心标本的容器应当由厚壁玻璃制成，或最好为塑料制品，并且在使用前应检查是否破损。破损。 (5)(5)用于离心的试管和标本容器应当始终牢固盖紧用于离心的试管和标本容器应当始终牢固盖紧( (最好使用螺旋盖最好使用螺旋盖) )。 (6)(6)离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。离心桶的装载、

46、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。 (7)(7)离心桶和十字轴应按重量配对，并在装载离心管后正确平衡。离心桶和十字轴应按重量配对，并在装载离心管后正确平衡。 (8)(8)操作指南中应给出液面距离心管管口需要留出的空间大小。操作指南中应给出液面距离心管管口需要留出的空间大小。 (9)(9)空离心桶应当用蒸馏水或乙醇空离心桶应当用蒸馏水或乙醇( (异丙醇，异丙醇，7 O7 O) )来平衡。来平衡。 (1 O)(1 O)对于危险度对于危险度3 3级和级和4 4级的微生物，必须使用可封口的离心桶级的微生物，必须使用可封口的离心桶( (安全杯安全杯) )。 (11)(11)当使用固定角离心转子时，

47、必须小心不能将离心管装得过满，否则会导致漏液。当使用固定角离心转子时，必须小心不能将离心管装得过满，否则会导致漏液。 (1 2)(1 2)应当检查离心机内转子部位的腔壁是否被污染或弄脏。如污染明显，应重新评估离心操作规范。应当检查离心机内转子部位的腔壁是否被污染或弄脏。如污染明显，应重新评估离心操作规范。 (1 3)(1 3)应当检查离心转子和离心桶是否有腐蚀或细微裂痕。应当检查离心转子和离心桶是否有腐蚀或细微裂痕。 (1 4)(1 4)每次使用后，要清除离心桶、转子和离心机腔的污染。每次使用后，要清除离心桶、转子和离心机腔的污染。 (1 5)(1 5)使用后应当将离心桶倒置存放使平衡液流干。

48、使用后应当将离心桶倒置存放使平衡液流干。 (1 6)(1 6) 良好的离心操作技术和牢固加盖的离心管可以提供足够的保护，以防止感染性气溶胶和可扩散粒良好的离心操作技术和牢固加盖的离心管可以提供足够的保护，以防止感染性气溶胶和可扩散粒子的产生。子的产生。常用设备的常用设备的安全操作注意事项（安全操作注意事项（4 4） 移液管、移液器移液管、移液器 (1)(1)应使用移液设备，严禁用口吸取。应使用移液设备，严禁用口吸取。 (2) (2)所有移液管应带有棉塞以减少移液器具的污染。所有移液管应带有棉塞以减少移液器具的污染。 (3)(3)不能向含有感染性物质的溶液中吹入气体。不能向含有感染性物质的溶液中

49、吹入气体。 (4)(4)感染性物质不能使用移液管反复吹吸混合。感染性物质不能使用移液管反复吹吸混合。 (5)(5)不能将液体从移液管内用力吹出。不能将液体从移液管内用力吹出。 (6)(6)刻度对应刻度对应(marktomark)(marktomark)移液管不需要排出最后一滴液体，因此最好使移液管不需要排出最后一滴液体，因此最好使用这种移液管。用这种移液管。 (7)(7)污染的移液管应该完全浸泡在盛有适当消毒液的防碎容器中。移液管应当污染的移液管应该完全浸泡在盛有适当消毒液的防碎容器中。移液管应当在消毒剂中浸泡适当时间后再进行处理。在消毒剂中浸泡适当时间后再进行处理。 (8)(8)盛放废弃移液

50、管的容器不能放在外面，应当放在生物安全柜内。盛放废弃移液管的容器不能放在外面，应当放在生物安全柜内。 (9)(9)有固定皮下注射针头的注射器不能够用于移液。有固定皮下注射针头的注射器不能够用于移液。 (1O)(1O)在打开隔膜封口的瓶子时，应使用可以使用移液管的工具，而避免使用在打开隔膜封口的瓶子时，应使用可以使用移液管的工具，而避免使用皮下注射针头和注射器。皮下注射针头和注射器。 (11)(11)为了避免感染性物质从移液管中滴出而扩散，在工作台面应当放置一块为了避免感染性物质从移液管中滴出而扩散，在工作台面应当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，使用后将其按感染性废弃物处理。浸有消毒液的

51、布或吸有消毒液的纸，使用后将其按感染性废弃物处理。常用设备的常用设备的安全操作注意事项（安全操作注意事项（5 5） 接种环接种环 使用封闭式微型电加热器消毒接种环，能使用封闭式微型电加热器消毒接种环，能够避免在酒精灯的明火上加热所引起的感染性够避免在酒精灯的明火上加热所引起的感染性物质爆溅。最好使用不需要进行消毒的一次性物质爆溅。最好使用不需要进行消毒的一次性接种环。接种环。常用设备的常用设备的安全操作注意事项（安全操作注意事项（6 6） 冰箱与冰柜冰箱与冰柜(1)(1)冰箱、低温冰箱和干冰柜应当定期除霜和清洁，应清理出所有在冰箱、低温冰箱和干冰柜应当定期除霜和清洁，应清理出所有在储存过程中破

52、碎的安瓿和试管等物品。清理时应戴厚橡胶手套并储存过程中破碎的安瓿和试管等物品。清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护，清理后要对内表面进行消毒。冰箱内物品放置应进行面部防护，清理后要对内表面进行消毒。冰箱内物品放置应规范，。规范，。(2)(2)储存在冰箱内的所有容器应当清楚地标明内装物品的科学名称、储存在冰箱内的所有容器应当清楚地标明内装物品的科学名称、储存日期和储存者的姓名。未标明的或废旧物品应当高压灭菌并储存日期和储存者的姓名。未标明的或废旧物品应当高压灭菌并丢弃。丢弃。(3)(3)应当保存一份冻存物品的清单。应当保存一份冻存物品的清单。(4)(4)除非有防爆措施，否则冰箱内不能放置易燃溶液。

53、冰箱门上应注除非有防爆措施，否则冰箱内不能放置易燃溶液。冰箱门上应注明这一点。明这一点。 常用设备的常用设备的安全操作注意事项（安全操作注意事项（7 7）高压灭菌器和灭菌消毒设备高压灭菌器和灭菌消毒设备 (1)(1)应由受过良好培训的人员负责高压灭菌器的操作和日常维护。应由受过良好培训的人员负责高压灭菌器的操作和日常维护。 (2)(2)预防性的维护程序应包括：由有资格人员定期检查灭菌器柜腔、门的密封性预防性的维护程序应包括：由有资格人员定期检查灭菌器柜腔、门的密封性以及所有的仪表和控制器。以及所有的仪表和控制器。 (3)(3)应使用饱和蒸气，并且其中不含腐蚀性抑制剂或其他化学品，这些物质可能应

54、使用饱和蒸气，并且其中不含腐蚀性抑制剂或其他化学品，这些物质可能污染正在灭菌的物品。污染正在灭菌的物品。 (4)(4)所有要高压灭菌的物品都应放在空气能够排出并具有良好热渗透性的容器中；所有要高压灭菌的物品都应放在空气能够排出并具有良好热渗透性的容器中；灭菌器柜腔装载要松散，以便蒸汽可以均匀作用于装载物。灭菌器柜腔装载要松散，以便蒸汽可以均匀作用于装载物。 (5) (5)当灭菌器内部加压时，互锁安全装置可以防止门被打开，而没有互锁装置当灭菌器内部加压时，互锁安全装置可以防止门被打开，而没有互锁装置的高压灭菌器，应当关闭主蒸汽阀并待温度下降到的高压灭菌器，应当关闭主蒸汽阀并待温度下降到8080以

55、下时再打开门。以下时再打开门。 (6)(6)当高压灭菌液体时，由于取出时液体可能因过热而沸腾，故应采用慢排式设当高压灭菌液体时，由于取出时液体可能因过热而沸腾，故应采用慢排式设置。置。 (7)(7)即使温度下降到即使温度下降到8080以下，操作者打开门时也应当戴适当的手套和面罩来进以下，操作者打开门时也应当戴适当的手套和面罩来进行防护。行防护。 (8)(8)在进行高压灭菌效果的常规监测中，生物指示剂或热电偶计应置于每件高压在进行高压灭菌效果的常规监测中，生物指示剂或热电偶计应置于每件高压灭菌物品的中心。最好在灭菌物品的中心。最好在“最大最大”装载时用热偶计和记录仪进行定时监测，以确装载时用热偶

56、计和记录仪进行定时监测，以确定灭菌程序是否恰当。定灭菌程序是否恰当。 (9)(9)灭菌器的排水过滤器灭菌器的排水过滤器( (如果有如果有) )应当每天拆下清洗。应当每天拆下清洗。 (1O)(1O)应当注意保证高压灭菌器的安全阀没有被高压灭菌物品中的纸等堵塞。应当注意保证高压灭菌器的安全阀没有被高压灭菌物品中的纸等堵塞。 常用设备的常用设备的安全操作注意事项（安全操作注意事项（8 8） 均质器、研磨器、超声处理器均质器、研磨器、超声处理器 在使用均质器、研磨器、超声处理器时，在使用均质器、研磨器、超声处理器时，含有感染性物质的气溶胶可能溢出，应戴手套含有感染性物质的气溶胶可能溢出，应戴手套并于吸

57、收性材料罩住，在生物安全柜中操作。并于吸收性材料罩住，在生物安全柜中操作。 实验室菌种的安全要求： 菌株的生物危害程度应与保藏实验室生物防护水平相适应，实验室的装备和管理应符合病原微生物实验室生物安全管理条例和GB 19489实验室 生物安全通用要求 实验室应制定菌种使用、保藏管理制度和标准化操作规程，应涵盖菌种申购、保管、使用、传代、存储等诸方面。六、检测过程安全操作注意事项安全操作注意事项感染性物质（菌种）的储存、包装与运输感染性物质（菌种）的储存、包装与运输 食品微生物检测中使用的标准（参照菌种）的包装与运输应按照病原微生物实验室生物安全管理条例和人间传染的病原微生物名录有关规定进行。

58、以食品微生物检测中常见的沙门氏菌属为例，其属于第三类病原微生物，实验活动所需生物安全实验室级别为二级。运输包装分类为B类。具体要求如下：1.运输专用名称为：诊断标本或临床标本或生命物质B类。英文运输专用名称为：Biological substance，category B。UN编号为：UN3373。2.应有三层包装： 第一层包装要求用保存标本的原始容器(外螺旋管),称为主容器(见图1)，需将盖口密封，主容器单包装最大运输量液体1L，固体4kg；运输标本的主容器运输标本的主容器 第二层包装可以采用专用二级包装桶或耐高压塑料袋，称为辅助容器(见图2)，应防水、防破损、防泄漏，并含吸收材料；运输标本

59、的辅助容器运输标本的辅助容器 (吸收材料吸收材料) 第三层包装是将密封好的辅助容器放入运输包装盒, 称为外包装(见附图5)，最大运输量为液体4L、固体4kg，至少有一个表面100mm 100mm，运输包装盒要求有保持冷藏低温功能，应含制冷器件、衬垫材料。 运输标本的外包装运输标本的外包装七、废弃物处理七、废弃物处理 废弃物是指将要丢弃的所有物品。废弃物是指将要丢弃的所有物品。 废弃物处理的首要原则废弃物处理的首要原则：是所有感染性材料必须在实验室：是所有感染性材料必须在实验室内清除污染、高压灭菌或焚烧。内清除污染、高压灭菌或焚烧。 用以处理潜在感染性微生物或动物组织的所有的实验室物用以处理潜在

60、感染性微生物或动物组织的所有的实验室物品，在被丢弃前应考虑的主要问题有：品，在被丢弃前应考虑的主要问题有：1 1、是否已采取规定程序对这些物品进行了有效的清除污染或消毒？、是否已采取规定程序对这些物品进行了有效的清除污染或消毒？2 2、如果没有，他们是否以规定的方式包裹，以便就地焚烧或运送到其、如果没有，他们是否以规定的方式包裹，以便就地焚烧或运送到其他有焚烧设施的地方进行处理？他有焚烧设施的地方进行处理？3 3、丢弃已清除污染的物品时，是否会对直接参与丢弃的人员，或在设、丢弃已清除污染的物品时，是否会对直接参与丢弃的人员，或在设施外可能接触到丢弃物的人员造成任何潜在的生物学或其他方面的危害？