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文档简介
1、Reverse transcriptionDNA的双向和单向复制的双向和单向复制环状环状 DNA复制时复制时所形成的所形成的结构结构起点起点复制叉的推进复制叉的推进复制叉复制叉 起点起点 起点起点 起点起点复制叉复制叉复制叉复制叉未复制未复制DNA单向复制单向复制双向复制双向复制（DNA polymorase，Pol）合成合成20个核苷酸即离开模板，填充空隙。个核苷酸即离开模板，填充空隙。 从细胞中分从细胞中分离出离出DNA限制酶截取限制酶截取DNA片断片断分离大肠杆分离大肠杆菌中的质粒菌中的质粒 DNA重组重组用重组质粒用重组质粒转化大肠杆菌转化大肠杆菌培养大肠杆菌培养大肠杆菌克隆大量基因克
2、隆大量基因重组体的筛选重组体的筛选DNA“克隆克隆”过程过程核心酶核心酶 (core enzyme)全酶全酶 (holoenzyme) RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合聚合酶全酶在转录起始区的结合 真核生物DNA聚合酶、及四种，都有5 3聚合功能。及参与核DNA复制； ：链合成的引发，：链的延长 pol；切除引物后填补空隙 ：外切核酸酶 ：线粒体DNA复制真核生物的真核生物的DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶 分子量分子量亚基数亚基数细胞内分布细胞内分布酶活力百分比酶活力百分比外切酶活力外切酶活力DNA聚合酶聚合酶 110-23，000多个多个细胞核细胞核80%无无120，000一个一个细
3、胞核和线粒体细胞核和线粒体2 15%无无-400，000一个一个细胞核细胞核+10 25% 5 -3 外切酶外切酶DNA聚合酶聚合酶 DNA聚合酶聚合酶 45，000一个一个细胞核细胞核10 15%无无逆转录病毒细胞内的逆转录现象逆转录病毒细胞内的逆转录现象RNA 模板模板逆转录酶逆转录酶DNA-RNA 杂杂化双链化双链RNA酶酶单链单链DNA逆转录酶逆转录酶双链双链DNA PCR扩增产物的特异性主要由引物决定，引物的设计是PCR成功的关键， 引物位置和产物长度 根据不同目的和要求确定，长度一般在200800bp之间 引物的长度 一般为1825bp 末端核苷酸 3端不得有任何修饰 GC含量和Tm值 一般在4060%之间，两条相差23 36512 决定哪些基因被转录决定哪些基因被转录 150618 催化功能催化功能 155
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