血常规操作规程

1、血常规检验一、【检验方法】：CD1700血细胞分析仪二、【原理及意义】：（一）Hb1、原理：红细胞被溶血素溶解，释放出血红蛋白，血红蛋白被SLS的亲水性的烷基部分所改变，由亚铁血红蛋白形态转变为高铁血红蛋白形态，形成SLS-Hb的正铁血红蛋白化合物，在555nm处有吸收峰，通过仪器内部的比色系统比色，可以测定Hb的浓度。该方法利用了氧化血红蛋白法和氰化血红蛋白法的优点。一方面，SLS-Hb法具有和氧化血红蛋白法一样的检测快速、无毒性成分的优点；另一方面也具有氰化血红蛋白法检测结果精确、重复性好的特点。（二）RBC、MCV、MCH、MCHC、HCT、RDW-CV、RDW-SD1、原理：血液被稀释

2、液稀释后，细胞一个一个通过狭缝，狭缝内外是有直流电的电解质环境，当细胞通过时会引起瞬时的电位变化，形成电脉冲，电脉冲的个数反应细胞的个数，大小反应细胞的大小。细胞体积在一定范围内划为红细胞；在某个范围划为血小板。同时通过仪器内部的数据分析系统换算出MCV、MCH、MCHC、Hct和统计学处理得出RDW-CV、RDW-SD分析数据。（三）WBC计数、及其分类1、原理（电阻检测法）：仪器吸取样本，用一定量的试剂和稀释液稀释后，让白细胞一个个依次通过计数池的微孔，利用细胞通过微孔时瞬间的电阻变化产生脉冲电流而计数。脉冲信号经放大、甄别后，微机处理数据得到其体积分布直方图。淋巴细胞群为：35-90fl

3、中间细胞群为：90-160fl粒细胞群为：160-300fl三、【试剂品牌】：1、稀释液：Sandem氯化钠6.38g/L硼酸1.0g/L四硼酸钠0.2g/LEDTA-2K0.2g/L2、Hb溶血素：SULFOLYSER（SLS-200A）月桂洗硫酸钠1.7g/L3、清洗液：SANDEMCELLCLEANSTACCLEANER-SYS次氯酸盐5%4、抗凝剂：KEDTA2HO（1.5-2.2mg每毫升血液）四、【仪器】：CD1700血细胞分析仪五、【操作步骤】：开机：1. 插上电源，打开CD1700血细胞分析仪电源开关2. 仪器进入自动检测系统，自动检测各系统参数，同时测定本底参数。3. 当仪器

4、显示窗口出现“RunReady，说明仪器处于待测标本状态，进行血液质控品测试，通过后可以正常测定血常规标本。4. 打开中文报告处理电脑和打印机，进行中文处理系统，登录.关机：1. 仪器使用完毕，依次按”main”,"specialpRotocol”moRe”进入”startclean”将清洗液置于针下,按键开始吸样，约十分分后清洗完毕,再按“ShutDown"键。2. 自动血细胞计数仪进入自动冲洗状态，当自动血细胞仪显示窗口出现“standby”时可以安全关机，关闭仪器开关，关闭电脑。血细胞分析仪的保养（每周一次）1. 按“main"键，选择drainbath项，

5、按键进入，然后再按一次充满,。2. 选择“startclean"项，按键。3. ，在“RBC”和“WBC”计数池中各加1毫升专用清洁液，浸泡十分钟4. 按“main"键，选择drainbath项，再按一次，再按”clearorifice”，仪器自动清洁保养。5. 仪器表面需经常擦洗，保持仪器整体清洁。每日质控在每天样本检测前，取专用血液质控品做质控，并做好登记。若检测结果均在范围内，则可进行样本检测，若有失控出现，则需重新定标。六、【参考范围】：1. (1)白细胞(WBC)计数：成人(4-10)X109/L儿童(5-12)X109/L新生儿(15-20)X109/L(2)白

6、细胞分类(成人)：中性粒细胞50-70%淋巴细胞20-40%嗜酸性粒细胞0.5-5%嗜碱性粒细胞0-1%单核细胞3-8%2. 红细胞(RBC):男(45.5)XIO12/L女(3.5-5)X1012/L新生儿(6-7)X1012/L3. 血红蛋白(HGB)：男120160g/L女110-150g/L新生儿170200g/L4 血小板(PLT):(100300)X109/L5 血球压积(HCT):男0.420.49L/L女0.370.43L/L6平均红细胞体积(MCV):8295fl每升血液中血细胞比容(L/L)X1015MCV（fl）=每升血液中红细胞总数7平均红细胞血红蛋白含量(MCH)：2

7、7-31pg每升血液中血红蛋白浓度(g/L)MCH(g/L)=-每升血液中红细胞总数8平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC):每升血液中血红蛋白浓度(g/L)320-360g/LMCHC(g/L)=升血液中血细胞比容(L/L)9RDW-CV、RDW-SD：RDW-CV：11.6%-14.0%；RDW-SD：39.0-46.0fL。10PDW(15.05-18.1)%MPV(9.4-12.5)fl；P-LCR(13-43)。七、【临床意义】：1白细胞(1) 白细胞计数 生理性增加新生儿、运动、饭后、冷水浴后、疼痛、月经期、受寒、妊娠、分娩、阵发性心动过速、阳光或紫外光照射、抽搐、恶心、呕吐、麻醉等。

8、 病理性增加类白血病、白血病、急性化脓性细菌感染、急性溶血、急性失血、单核细胞增多症、淋巴细胞增多症、真性红细胞增多症、腮腺炎、病毒性肝炎、淋巴瘤、组织坏死、手术后、肿瘤转移、药物中毒、代谢性酸中毒、过敏等。 减少伤寒、副伤寒、斑疹伤寒、兔热病、布鲁杆菌热、流感、麻疹、风疹、革登热、传染性肝炎(亦可增多)、疟疾、过敏性休克、系统性红斑狼疮、粟粒性结核、败血症、重症细菌感染、恶液质、放射治疗、肿瘤化疗。恶性贫血、非白细胞性贫血、再生障碍性贫血、脾功能亢进、戈谢病、Felty综合症、Che'diak-Higashi综合症、阵发性睡眠性血红蛋白尿症等。(2) 白细胞分类计数：见下表各种白细胞

9、增多、减少的临床意义细胞类别增多减少中性粒细胞类白血病、白血病、化脓性细胞感染、伤寒、副伤寒、流感、麻疹、再生障嗜酸性粒细胞溶血性贫血、急性出血、急性溶血、碍性贫血、黑热病、病毒感染、原虫嗜碱性粒细胞手术后、恶性肿瘤、组织损伤、皮肤感染、病毒性肝炎、脾功能亢进、贫淋巴细胞病、真性红细胞增多症、脾切除术后。血、原发性中性粒细胞减少症、肝硬化单核细胞参见嗜酸性粒细胞计数急性感染、粟粒性结核、晚期肿瘤、慢粒、何杰金病、癌转移、铅和铋中艾滋病、伴T淋巴细胞减少的免性缺毒等。陷百日咳、传染性单核细胞增多症、淋使用皮质类固醇激素、再生障碍性贫巴细胞性白血病、传染淋巴细胞增多血、多毛细胞白血病.症、病毒性肝

10、炎、弓形虫病单核细胞性白血病、系统性红斑狼疮、亚急性细菌性心内膜炎、活动性结核、急性感染恢复期、原虫感染2红细胞(RBC)： 生理性减少见于妊娠中后期、6个月至2岁的婴儿等。 病理性减少造血原料不足、造血功能障碍、红细胞破坏过多或失血所引起的各种贫血。 相对性增多主要因血浆容量减少所致，见于脱水、呕吐、腹泻、多尿、多汗、大面积烧伤、吸烟、高血压、肥胖等。 代偿性增多主要见于缺氧、新生儿、高原环境、CO中毒、严重肺气肿、肺源性心脏病、先天性心脏病、心衰等。 绝对性增多克隆性真性红细胞增多；非隆性红细胞增多，与促红细胞生成素产生过多有关，见于肾癌、肝细胞癌、雄激素分泌细胞肿瘤、肾囊肿、肾盂积水、肾

11、移植、小脑血管瘤、子宫肌瘤。3、血红蛋白(Hb)：生理性增加：新生儿、高原居住者。病理性增加：真性红细胞增多症、代偿性红细胞增多症(如先天性青紫性心脏病、慢性肺性疾病、脱水)。减少：各种贫血、白血病、产后、手术后、大量失血。4红细胞比积（HCT）：与红细胞计数、血红蛋白测定的意义类同。5血小板（PLT）：（1）生理性正常人血小板在一天内可有6%-10%变化；表现为早晨低，午后较高；春季低，冬季略高；平原较低，高原较高；静脉血比毛细血管血高10%；月经前低，后升高；妊娠中晚期升高，分娩后减低；运动后升高，休息后恢复。（2）病理性减少：除创伤之外，血小板减少是引起出血的常见原因。常见疾病有：、血小

12、板生成障碍，如急性白血病、再生障碍性贫血；、血小板破坏过多，如ITP、脾功能亢进，系统性红斑狼疮；、血小板消耗过多，如DIC、血栓性血小板减少性紫瘢。增多（血小板大于400X109/L）：、骨髓增生性疾病：慢性粒细胞白血病，真性红细胞增多症；、原发性血小板增多症；、急性大出血，急性溶血，急性化脓性感染；、脾切除手术后。6MCV、MCH、MCHC主要用于贫血的形态学分类，见下表:贫血的形态学分类MCV(fL)MCH(pg)MCHC(g/L)大红细胞性贫血100-16035-50310-370正红细胞性贫血80-10027-35310-370单纯小细胞性贫血72-8021-26300-370小细胞

13、低色素性贫血50-8012-30240-3007RDW-CV、RDW-SD：（1）用于缺铁性贫血的诊断和疗效观察，缺铁性贫血时RDW增大，经治疗后可恢复正常。（2）用于小细胞低色素性贫血的鉴别，缺铁性贫血时RDW增大，而轻型珠蛋白生成障碍性贫血时RDW正常。（3）RDW与MCV结合可将贫血分为6种。小细胞均一性：MCV下降，RDW正常，如轻型珠蛋白生成障碍性贫血。小细胞不均一性：MCV下降，RDW增大，如缺铁性贫血。正常细胞均一性：MCV、RDW均正常，如某些慢性疾病。正常细胞不均一性：MCV正常，RDW增大，如早期缺铁性贫血。大细胞均一性：MCV增大，RDW正常，如再生障碍性贫血。大细胞不均

14、一性：MCV、RDW均增大，如巨幼细胞性贫血。8MPV、PDW、P-LCR： MPV其临床意义要结合PLT的变化才有价值。、鉴别血小板减少的原因：当骨髓造血功能损伤致血小板减少时，MPV减少；当血小板在周围血液中破坏增多时，导致血小板减少，MPV增大；血小板分布异常致血小板减少时，MPC正常。、MPV增大可作为骨髓造血功能恢复的较早期指征：骨髓造血功能衰竭时，MPV与PLT同时持续下降；造血功能抑制越严重，MPV越小；当造血功能恢复时，MPV增大常先于PLT升高。、其它：MPV增大见于骨髓纤维化、ITP、血栓性疾病及血栓前状态、脾切除、慢粒、巨大血小板综合症、镰刀细胞性贫血；MPV减小见于脾亢

15、、化疗后、AA、巨幼细胞性贫血等。 PDW是反映血小板体积大小的异质性参数，增大见于急淋化疗后、巨幼细胞性贫血、脾切除、慢粒、巨大血小板综合症、血栓性疾病等；可用于鉴别原发性血小板增多症和反应性血小板增多症，前者PDW增加，后者PDW正常。 P-LCR代表血小板计数中体积12fL的血小板的比值或数量，有助于识别堆集血小板、大血小板和细胞碎片，并可监测骨髓的造血功能。八、【标本采集】：随机采取病人静脉血，用40g/LEDTA-K抗凝（50ul抗凝lml血，相当于2mgEDTAK/lml血）。22九、【注意事项】：1、血细胞计数应用EDTA-K为抗凝剂，用量为EDTA-K2H01.52.0mg可抗

16、凝lml血，22*2不能用肝素或枸橼酸钠等抗凝剂。2、采集后在室温中贮存不应超出6h；如需制用血涂片应在2h内完成。3、测定前抗凝血应充混匀，任何小凝块或血小板聚集均会影响血细胞计数。4、注意病理因素对血液分析仪使用的影响，特别是各系统的报警提示。如是否有大血小板对血小板计数的影响；有无有核红细胞对白细胞计数的影响等等。5、如有冷凝集现象，将血置37°C水浴箱10min后立即测试。十、【质量控制】：1每日工作开始应先做全血质控品，。2出现失控，应校正后并重做质控，直至符合质控要求。3按要求做好仪器校正和仪器对比工作。4做好质控、失控和校正登记。十一、【报告复查】：对以下情况的样本进行

17、复查(仪器及手工)；白细胞低于3.0X109/L；(2)红细胞数与血红蛋白明显不符；血小板低于50X109/L；(4) 白细胞分类时，中间细胞15%，以及机器未能分出的样本需手工分类。白细胞计数:原理：血液经稀酸溶液稀释后，红细胞被破坏，放入血细胞计数池内，置显微镜下计数，求得每微升中的白细胞数。试剂：冰醋酸10ml蒸馏水加至500ml10g/L美蓝3滴器材：20微升吸管，血细胞计数板，显微镜。操作：加计数试剂0.38ml于小试管内，取血20微升吹入试剂，混匀。静置1-2分钟。低倍计数，计数4角得4大方格，计数总数乘以50即为白细胞/微升。血小板计数:原理：血液用血小板计数试剂稀释后，在显微镜

18、下计数。试剂1. 草酸铵稀释液草酸铵1.0g,乙二胺四乙酸二钠0.014g,40%甲醛溶液0.1ml加水至100ml,加亚甲蓝少许，过滤后置冰箱备用。2. 许汝和稀释液尿素9g,乙二胺四乙酸二钠0.5g,巴比妥钠0.3g,加蒸馏水水至100ml，过滤后置冰箱备用。3. Barr稀释液白皂素0.25g，枸橼酸钠3.5g，煌焦油蓝0.1g,40%甲醛溶液1.0ml，加水至100ml，过滤后置冰箱备用。操作1. 选上述任一试剂（本科室用2液），每管加0.38ml，加入全血20微升，充分混匀。2. 用改良牛鲍计数板，将血液稀释液充池后，置于有滤纸得培养皿内，放置至少10min,待血小板沉降后计数。3. 计数中央大方格内5个中方格得血小板数，其结果乘1000，即得每微升血液中血小板数。手工白细胞分类计数:、原理把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用复合染料染色，根据各类白细胞形态特征予以分类计数，得出相对比值（百分率），以观察数量、形态和质量的变化，对疾病有辅助诊断意义。、试剂瑞姬氏复合染色液I液：取瑞氏染粉lg、姬姆萨染粉0.3g，置洁净研钵中，加少量甲醇（分析纯），研磨片刻，吸出上层染液。再加少量甲醇，继续研磨，再吸出上液。如此连续几次，共用甲醇500ml。收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各振摇3分钟，共5天，以后存放一周即能使用。II液：pH6.4-6.8磷酸盐缓冲液磷酸二氢