基因工程细胞工程胚胎工程复习

1、基因工程细胞工程胚胎工程复习第1页/共33页1、基因工程的基本操作程序、基因工程的基本操作程序目的基因的获取目的基因的获取基因表达载体的构建基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞目的基因的检测和鉴定目的基因的检测和鉴定（核心）（核心）（三个方法）（三个方法）（三种受体）（三种受体）（三个步骤（三个步骤P14）第2页/共33页2、目的基因获取方法、目的基因获取方法从从基因文库基因文库中获取中获取利用利用PCR技术技术扩增目的基因扩增目的基因人工合成人工合成目的基因目的基因3、基因工程用到的工具酶、基因工程用到的工具酶限制酶和限制酶和DNA连接酶连接酶EcoliDNA连接连

2、接酶酶T4DNA连接酶连接酶第3页/共33页5、基因表达载体的组成、基因表达载体的组成启动子、终止子、目的基因启动子、终止子、目的基因和标记基因和标记基因4、基因工程用到的运载体、基因工程用到的运载体质粒（最常用）质粒（最常用）、噬菌体的衍生物和噬菌体的衍生物和动植物病毒动植物病毒第4页/共33页6、导入受体细胞的方法、导入受体细胞的方法(1)植物细胞植物细胞双子叶植物双子叶植物单子叶植物单子叶植物农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法(2)动物细胞动物细胞显微注射法显微注射法受体细胞常用：受体细胞常用： 受精卵受精卵(3)微生物细胞微生物细胞用用Ca2+处理细胞，成为处理细胞，成为感受态细

3、胞感受态细胞。第5页/共33页基因工程基因工程细胞工程细胞工程 （核移植技术）（核移植技术）7、成功表达的结果：、成功表达的结果：转基因小牛合成人的血清转基因小牛合成人的血清白蛋白。白蛋白。第6页/共33页专题二专题二 细胞工程细胞工程一、植物细胞工程一、植物细胞工程第7页/共33页1、去壁：、去壁：酶解法（酶解法（纤维素酶和果胶酶纤维素酶和果胶酶）2、原生质体融合：、原生质体融合：物理法：物理法：电激、振动、离心电激、振动、离心化学法：化学法：聚乙二醇聚乙二醇3、融合完成的标志：、融合完成的标志：产生新的细胞壁产生新的细胞壁第8页/共33页4、理论基础：、理论基础：细胞膜的流动性细胞膜的流动

4、性植物细胞的全能性植物细胞的全能性5、意义：、意义： 克服不同物种间的远缘杂交不克服不同物种间的远缘杂交不亲和障碍。亲和障碍。植物组织培养技术植物组织培养技术脱分化再分化第9页/共33页若生产人工种子，则培养到 阶段；若提取细胞产品（如紫草素），则一般培养到 阶段；如培育新个体，则应该培养到 阶段。6、关于植物组织培养技术：、关于植物组织培养技术：植物组织培养的植物组织培养的目的不同目的不同，培养阶段，培养阶段也就不同：也就不同：胚状体愈伤组织试管苗第10页/共33页下图为植物体细胞杂交过程示意图。下列说法不正确的是（ ）A. 植物体细胞杂交的最大优点是可以克服远缘杂交不亲和的障碍B. 杂种细

5、胞经过和过程可以培育成杂种植株说明杂种细胞具有全能性C. 尽管愈伤组织可以进行光合作用，但其培养基中仍需要糖类、氨基酸等有机营养D. 若A的基因型为Rr，B的基因型为Yy，则最终形成的杂种植株的基因型为RrYyC第11页/共33页二、动物细胞工程二、动物细胞工程技术手段技术手段动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合动物细胞核移植动物细胞核移植生产单克隆抗体生产单克隆抗体（基础）（基础）第12页/共33页动物细胞培养1、取材：、取材：3、组织处理：、组织处理：4、原代培养、传代培养、原代培养、传代培养、 接触抑制接触抑制剪碎胰蛋白酶或胶原蛋白酶幼龄的动物组织5、培养条件、培养条件无菌无

6、毒、动物血清、CO22、理论基础：、理论基础：细胞增殖第13页/共33页动物体细胞核移植技术1、取材：、取材：卵母细胞原因：原因：卵母细胞体积大，易于操作；含有促使细胞核全能性表达的物质.2、去核方法：、去核方法：显微操作去核法第14页/共33页动物体细胞核移植技术3、理论基础：、理论基础：动物细胞核的全能性4、生殖方式：、生殖方式： 无性生殖5、用核移植得到的动物成为、用核移植得到的动物成为克隆动物克隆动物。第15页/共33页1、该过程中使用到了哪些生物技术手段？2、通过该过程可得出什么结论？3、克隆羊的性别与哪只羊相同？为什么？4、克隆羊的性状主要与哪只羊相同？5、在操作过程中为什么要用去

7、核的卵细胞做受体细胞？6、克隆羊的繁殖过程应属于哪种方式?第16页/共33页转基因克隆动物转基因克隆动物第17页/共33页动物细胞融合技术（制备单克隆抗体）动物细胞融合技术（制备单克隆抗体）1、诱导方法：、诱导方法：物理方法物理方法化学方法化学方法生物方法生物方法:与植物同与植物同灭活的病毒灭活的病毒注射抗原B淋巴细胞第18页/共33页2、理论基础：、理论基础： 细胞膜的流动性、细胞增殖细胞膜的流动性、细胞增殖3、两次筛选的目的、两次筛选的目的第一次：第一次：筛选出杂交瘤细胞筛选出杂交瘤细胞第二次：第二次：筛选出能产生特异性抗体的筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞杂交瘤细胞4、杂交瘤细胞的特点

8、、杂交瘤细胞的特点既能无限繁殖，又能产生特异性抗体。既能无限繁殖，又能产生特异性抗体。5、的特点、的特点特异性强、灵敏度高，能大量生产（制备）。特异性强、灵敏度高，能大量生产（制备）。第19页/共33页比较项目 植物细胞工程 动物细胞工程 原理植物组织培养细胞全能性 植物体细胞杂交细胞的全能性、细胞膜流动性动物细胞培养细胞增殖 体细胞核移植动物细胞核的全能性 单克隆抗体的制备细胞膜的流动性、细胞增殖 动物细胞融合细胞膜流动性工具酶纤维素酶、果胶酶胰蛋白酶、胶原蛋白酶动、植物细胞工程技术手段的原理和工具酶第20页/共33页如图表示单克隆抗体的制备过程，请回答下列 问题：（1 1）细胞A A具有产

9、生 的功能。细胞B B的突出特点是 。诱导细胞A A和B B融合的诱导剂通常是或聚乙二醇。 （2 2）若细胞A A的基因型为AAAA，细胞B B的基因型为BBBB，生产的目标应该是基因型为的细胞。 可通过特定的培养基将所需的融合细胞筛选出来。特异性抗体能够无限增殖灭活的病毒AABBAABB选择第21页/共33页（3 3）动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还含有。细胞培养应在含5 5COCO2 2的恒温培养箱中进行，COCO2 2的作用是 。 （4 4）单克隆抗体与常规抗体相比， 具有 等特点。单克隆抗体与抗癌药物结合制成“生物导弹”，可

10、明显减少用药量和副作用，原因是 。动物血清维持培养液的pHpH特异性强、灵敏度高，并可大量生产单克隆抗体能够和癌细胞特异性结合第22页/共33页胚胎移植胚胎移植专题三专题三 胚胎工程胚胎工程第23页/共33页1、卵母细胞的采集、卵母细胞的采集注射促性腺激素注射促性腺激素超数排卵超数排卵屠宰场卵巢获取屠宰场卵巢获取借助仪器从活体卵借助仪器从活体卵巢直接吸取巢直接吸取需要体需要体外培养外培养不需要体外培养减数第二次减数第二次分裂中期分裂中期第24页/共33页2、供体和受体的处理、供体和受体的处理供体供体两次激素两次激素处理处理超数排卵处理超数排卵处理同期发情处理同期发情处理受体受体一次激素一次激素

11、处理处理同期发情处理同期发情处理3、胚胎选择、胚胎选择 牛、羊选择牛、羊选择桑椹胚或囊胚桑椹胚或囊胚第25页/共33页4、胚胎移植的、胚胎移植的优势（意义）优势（意义）可以充分发挥雌性优良个体的繁殖可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。潜力。5、胚胎移植的、胚胎移植的生理基础生理基础常考：常考：受体对移入子宫的外来胚胎没有受体对移入子宫的外来胚胎没有免疫排斥反应免疫排斥反应。P76第26页/共33页5、基因表达载体的组成、基因表达载体的组成启动子、终止子、目的基因启动子、终止子、目的基因和标记基因和标记基因4、基因工程用到的运载体、基因工程用到的运载体质粒（最常用）质粒（最常用）、噬菌体的衍生物

12、和噬菌体的衍生物和动植物病毒动植物病毒第27页/共33页下图为植物体细胞杂交过程示意图。下列说法不正确的是（ ）A. 植物体细胞杂交的最大优点是可以克服远缘杂交不亲和的障碍B. 杂种细胞经过和过程可以培育成杂种植株说明杂种细胞具有全能性C. 尽管愈伤组织可以进行光合作用，但其培养基中仍需要糖类、氨基酸等有机营养D. 若A的基因型为Rr，B的基因型为Yy，则最终形成的杂种植株的基因型为RrYyC第28页/共33页下图为植物体细胞杂交过程示意图。下列说法不正确的是（ ）A. 植物体细胞杂交的最大优点是可以克服远缘杂交不亲和的障碍B. 杂种细胞经过和过程可以培育成杂种植株说明杂种细胞具有全能性C.

13、尽管愈伤组织可以进行光合作用，但其培养基中仍需要糖类、氨基酸等有机营养D. 若A的基因型为Rr，B的基因型为Yy，则最终形成的杂种植株的基因型为RrYyC第29页/共33页动物体细胞核移植技术3、理论基础：、理论基础：动物细胞核的全能性4、生殖方式：、生殖方式： 无性生殖5、用核移植得到的动物成为、用核移植得到的动物成为克隆动物克隆动物。第30页/共33页（3 3）动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还含有。细胞培养应在含5 5COCO2 2的恒温培养箱中进行，COCO2 2的作用是 。 （4 4）单克隆抗体与常规抗体相比， 具有 等特点。单克隆抗体与抗癌药物结合制成“生物导弹”，可明显减少用药量