血涂片的制备与染色

1、会计学1血涂片的制备与染色血涂片的制备与染色血涂片制备与染色血涂片制备与染色 外周血涂片检查是最有益的血液系统疾病外周血涂片检查是最有益的血液系统疾病检查手段，能为临床提供大量的信息。检查手段，能为临床提供大量的信息。 因此，血涂片制备和染色的质量直接影响因此，血涂片制备和染色的质量直接影响血细胞形态的检验结果。血细胞形态的检验结果。 一张合格的血涂片应该是厚薄适宜，血膜一张合格的血涂片应该是厚薄适宜，血膜头、体、尾分明，分布均匀，两侧留有一定的头、体、尾分明，分布均匀，两侧留有一定的空隙，边缘整齐。空隙，边缘整齐。 一、血涂片制备一、血涂片制备 （一）载玻片要求（一）载玻片要求 制备血涂片使

2、用的载玻片要有很好的清洁度。制备血涂片使用的载玻片要有很好的清洁度。 新载玻片常有游离碱质，应用铬酸清洗液或新载玻片常有游离碱质，应用铬酸清洗液或10%盐酸浸泡盐酸浸泡24h，然后再彻底清洗。，然后再彻底清洗。 已用过的载玻片可在含有适量肥皂水或合成洗已用过的载玻片可在含有适量肥皂水或合成洗涤剂的水中煮沸涤剂的水中煮沸20min，用热水将肥皂和血膜洗去，用热水将肥皂和血膜洗去，再用自来水反复冲洗，擦干或烤干后备用。再用自来水反复冲洗，擦干或烤干后备用。 （二）血涂片制备方法（二）血涂片制备方法 1手工推片法手工推片法 （1）薄血膜推片法（表）薄血膜推片法（表1-4-2）：临）：临床常用的方法，

3、主要用于观察血细胞形态床常用的方法，主要用于观察血细胞形态及仪器法检测结果异常的复查。及仪器法检测结果异常的复查。 （2）厚血膜涂片法：取新鲜血液）厚血膜涂片法：取新鲜血液1滴于载滴于载玻片的中央，用推片的一角将血滴由内向外玻片的中央，用推片的一角将血滴由内向外旋转涂布，制成厚薄均匀、直径约旋转涂布，制成厚薄均匀、直径约1.5cm的圆的圆形血膜，待自然干燥后，滴加数滴蒸馏水，形血膜，待自然干燥后，滴加数滴蒸馏水，使红细胞溶解，脱去血红蛋白，倾去水，血使红细胞溶解，脱去血红蛋白，倾去水，血涂片干燥后即可染色并用显微镜检查。涂片干燥后即可染色并用显微镜检查。 本方法特别适合检查疟原虫、微丝蚴等。本

4、方法特别适合检查疟原虫、微丝蚴等。 2自动涂片法自动涂片法 目前有许多型号的自目前有许多型号的自动血液分析仪，配备有血涂片仪和染色仪，动血液分析仪，配备有血涂片仪和染色仪，可以按照检验人员的指令执行自动送片、可以按照检验人员的指令执行自动送片、取血、推片、标记和染色等任务。取血、推片、标记和染色等任务。 【方法学评价方法学评价】良好的血涂片是血细良好的血涂片是血细胞形态学检查的前提。血涂片制备的方法胞形态学检查的前提。血涂片制备的方法学评价见表学评价见表1-7。 【质量保证质量保证】薄血膜推片法的质薄血膜推片法的质量保证项目与评价见表量保证项目与评价见表1-8，血涂片质，血涂片质量问题及可能的

5、原因见表量问题及可能的原因见表1-9。 （一）染料（一）染料 1碱性染料、酸性染料和复合染料，其组成与特碱性染料、酸性染料和复合染料，其组成与特点见表点见表1-10-0。 （二）染色方法（二）染色方法 1Wright染色法染色法 （1）染色原理）染色原理 1）物理吸附与化学亲和作用：血涂片染）物理吸附与化学亲和作用：血涂片染色过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作色过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。由于血细胞内不同结构所含有的化学成用。由于血细胞内不同结构所含有的化学成分不同，对各种染料的亲和力也不同（表分不同，对各种染料的亲和力也不同（表1-10）。）。 2）pH值的影响：血细胞多种成分

6、属值的影响：血细胞多种成分属于蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所于蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随着溶液的带电荷随着溶液的pH而定。因此，血细而定。因此，血细胞染色对氢离子浓度十分敏感。胞染色对氢离子浓度十分敏感。 染色时常用缓冲液（染色时常用缓冲液（pH6.46.8）来调节）来调节染色时的染色时的pH值，以达到满意的染色效果（表值，以达到满意的染色效果（表1-11）。）。 （2）试剂）试剂 1）Wright染液：染液： Wright染液是由伊染液是由伊红和亚甲蓝溶解于甲醇而成。甲醇的作用：红和亚甲蓝溶解于甲醇而成。甲醇的作用： 溶解伊红和亚甲蓝。溶解伊红和亚甲蓝。 具有很强的脱水作

7、用，可以固定红具有很强的脱水作用，可以固定红细胞形态，提高对染料的吸附作用，增强细胞形态，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。染色效果。 2）磷酸盐缓冲液（）磷酸盐缓冲液（pH 6.8） （3）染色方法与结果判断：染色方）染色方法与结果判断：染色方法见表法见表1-11-1。 2Giemsa染色法染色法 （1）染色原理：与）染色原理：与Wright染色法基染色法基本相同。本相同。Giemsa染色法加强了天青的作染色法加强了天青的作用，提高了噻嗪类染料的效果。用，提高了噻嗪类染料的效果。 （2）试剂：染液放置越久，其染色）试剂：染液放置越久，其染色效果越好。效果越好。 （3）染色：）染色：Giem

8、sa染色法的步骤与方染色法的步骤与方法见表法见表1-11-2。 3Wright-Giemsa染色法染色法 Wright-Giemsa染色法结合了染色法结合了Wright染色法和染色法和Giemsa染色法的优点。在染色法的优点。在Wright染液配方的基础上，染液配方的基础上，每每1.0g Wright染料添加染料添加0.3g Giemsa染料。染染料。染色步骤与色步骤与Wright染色法相同。染色法相同。 【方法学评价方法学评价】血涂片染色的方法学评血涂片染色的方法学评价见表价见表1-12。 【质量保证质量保证】染色过深、过浅与血染色过深、过浅与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、涂片中细胞

9、数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度、染液浓度、pH密切相关。密切相关。Wright染色染色的质量保证见表的质量保证见表1-13。血涂片染色不佳。血涂片染色不佳的原因及纠正措施见表的原因及纠正措施见表1-14。谢谢！ （2）厚血膜涂片法：取新鲜血液）厚血膜涂片法：取新鲜血液1滴于载滴于载玻片的中央，用推片的一角将血滴由内向外玻片的中央，用推片的一角将血滴由内向外旋转涂布，制成厚薄均匀、直径约旋转涂布，制成厚薄均匀、直径约1.5cm的圆的圆形血膜，待自然干燥后，滴加数滴蒸馏水，形血膜，待自然干燥后，滴加数滴蒸馏水，使红细胞溶解，脱去血红蛋白，倾去水，血使红细胞溶解，脱去血红蛋白，倾去水，血涂片干燥

10、后即可染色并用显微镜检查。涂片干燥后即可染色并用显微镜检查。 本方法特别适合检查疟原虫、微丝蚴等。本方法特别适合检查疟原虫、微丝蚴等。 【质量保证质量保证】薄血膜推片法的质薄血膜推片法的质量保证项目与评价见表量保证项目与评价见表1-8，血涂片质，血涂片质量问题及可能的原因见表量问题及可能的原因见表1-9。 （2）试剂）试剂 1）Wright染液：染液： Wright染液是由伊染液是由伊红和亚甲蓝溶解于甲醇而成。甲醇的作用：红和亚甲蓝溶解于甲醇而成。甲醇的作用： 溶解伊红和亚甲蓝。溶解伊红和亚甲蓝。 具有很强的脱水作用，可以固定红具有很强的脱水作用，可以固定红细胞形态，提高对染料的吸附作用，增强细胞形态，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。染色效果。 2）磷酸盐缓冲液（）磷酸盐缓冲