《生物技术一》实验教案

1、蚌埠医学院生物技术一实验教案2010/2011学年第二学期选用教材 医用生物化学实验（自编，3版） 生物化学实验（上海交通大学出版社）授课教师 夏 俊 职 称 教 授 授课专业 2009级生物科学本科 教 研 室 检验系生物化学与分子生物学 蚌埠医学院教案2010-2011年度 第 二 学期教师姓名： 职称： 系（部）：生物科学系 教研室：实验中心授课对象： 08生物本科 专业 生物 班级 授课时间：2011 年 3 月 4 日课程名称中文实验动物技术1选用教材现代生物学技术与探索性实验授课时数5英文章节及内容实验动物技术授课地点406教学目的与要求目的要求1、了解实验动物选取、饲喂和处理方法

2、 （大、小鼠的日常饲养管理）2、了解实验动物的编号和分组原则3、掌握动物的抓取与保定技术4、掌握实验动物常用的给药技术教学重点与难点重点：实验动物的随机分组方法。难点实验动物的抓取和保定技术实验动物常用的给药技术教学方法讲述法 、讨论法、示教法教具使用随机数字表、实验动物教学过程及时间分配主要教学内容教学方法一、了解实验动物选取、饲喂和处理方法 （大、小鼠的日常饲养管理）（一）实验动物的选取（二）实验动物的日常饲喂与处理方法大小鼠的日常饲养管理二、实验动物编号和分组原则（一）实验动物的编号实验动物的分组(一）、分组原则随机分组（二）建立对照组自身对照组平行对照组三、实验动物的抓取与固定技术（一

3、）实验动物的抓取固定方法 1. 小鼠抓取固定方法2.大鼠抓取固定方法3.兔的抓取固定方法四、实验动物给药途径及方法（1）皮下注射（2）皮内注射（3）腹腔注射（4）静脉注射a兔b小白鼠和大白鼠学生操作1、大鼠和兔子的随机分组操作。2、小鼠、大鼠、兔子的抓取和固定，要求每位同学熟练掌握3、实验动物给药：灭菌生理盐水5分钟讲述法讲述法10分钟15分钟讲述法示教法10分钟讲述法巡回指导巡回指导35分钟示教巡回指导35分钟教学过程及时间分配主要教学内容教学方法30分钟小鼠（每人1只）：皮下注射0.1ml、腹腔注射0.2ml、尾部静脉注射0.2ml大鼠（每组1只）：皮下注射0.5ml、腹腔注射2ml.兔子

4、（每组1只）：耳缘静脉注射0.5ml。巡回指导30分钟30分钟布置作业或思考题参考书籍与常用网址课后小结蚌埠医学院教案2010-2011年度 第 二 学期教师姓名： 职称： 系（部）：生物科学系 教研室：实验中心授课对象： 08生物本科 专业 生物 班级 授课时间：2011 年 3 月 4 日课程名称中文实验动物技术2选用教材现代生物学技术与探索性实验授课时数5英文章节及内容实验动物技术授课地点406教学目的与要求目的要求1、掌握实验动物的麻醉方法2、掌握实验动物的采血方法3、掌握实验动物的处死方法教学重点与难点重点：1、实验动物的麻醉方法2、实验动物的采血方法3、实验动物的处死方法教学方法讲

5、述法 、示教法教具使用实验动物，大小鼠固定器，家兔固定器教学过程及时间分配主要教学内容教学方法一、掌握实验动物的麻醉方法1麻醉方法 (1)全身麻醉 吸入麻醉法 注射麻醉法(2)动物局部麻醉方法2常用的麻醉药 (1)常用局部麻醉剂(2)常用全身麻醉剂3使用全身麻醉剂的注意事项二、掌握实验动物的采血方法 1.注意事项2.常用实验动物的采血方法 三、掌握实验动物的处死方法 1大鼠和小鼠的处死方法 2狗、兔、豚鼠的处死方法学生操作1、小鼠、大鼠和家兔的麻醉方法小鼠吸入乙醚麻醉大鼠、家兔先乙醚诱导麻醉再注射20%的氨基甲酸乙酯麻醉2、小鼠、大鼠、家兔的采血方法10分钟讲述法10分钟讲述法5分钟讲述法讲述

6、法5分钟示教法10分钟讲述法10分钟示教法10分钟巡回指导45分钟45分钟巡回指导教学过程及时间分配主要教学内容教学方法小鼠断尾采血和尾静脉采血；大鼠尾静脉采血；家兔耳静脉采血、耳动脉采血或心脏采血3、小鼠、大鼠和家兔的处死方法小鼠颈椎脱臼法、击打法或吸入乙醚麻醉处死；大鼠颈椎脱臼法处死；家兔空气栓塞法或急性失血法处死小鼠每人一只；大鼠每组一只；家兔每组一只课堂小结40分钟巡回指导10分钟布置作业或思考题参考书籍与常用网址课后小结蚌埠医学院教案2010-2011年度 第 二 学期教师姓名： 职称： 系（部）：生物科学系 教研室：实验中心授课对象： 08生物本科 专业 生物 班级 授课时间：20

7、11 年 3 月 4 日课程名称中文现代生物学技术选用教材现代生物学技术与探索性实验授课时数5学时英文章节及内容实验二：胎鼠细胞原代培养授课地点教学目的与要求1、熟悉无菌操作技术，强化无菌操作概念，并为细胞传代培养、细胞纯化和冷冻保存等实验鉴定基础。2、理解并掌握细胞原代培养原理。3、掌握独立进行细胞原代培养操作方法与过程。以小鼠胎儿为材料，学习细胞原代培养中常用组织块培养法和消化培养法。教学重点与难点重点无菌操作技术，原代培养的操作过程。掌握组织取材、剪切、细胞分离、混匀、接种和器械使用等操作要领。难点掌握动物细胞培养中的无菌操作技术细节和注意事项。教学方法讲授法、演示法、设问启发法、讨论法

8、、图表法。教具使用多媒体课件、激光笔等教学过程及时间分配主要教学内容教学方法复习旧课：（略）23分钟新课导言：细胞培养概念和意义细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一。可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞生长，代谢，繁殖提供有力的手段，同时也为以后传代培养创造条件。举例：细胞各种生理活动如增殖的研究讲授新课：实验九：胎鼠细胞原代培养2分钟一、实验目的要求讲授1、以小鼠胎儿为材料，学习细胞原代培养中常用的组织块培养法和消化培养法；2、掌握组织取材、剪

9、切、细胞分离、混匀、接种和器械使用等操作要领；3、掌握动物细胞培养中的无菌操作技术，并为下一步细胞传代培养、细胞纯化和冷冻保存等实验提供材料。二、主要器材与试剂培养箱（调整至37），培养瓶、平皿、吸管、移液管、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37）10分钟三、实验原理（一）细胞培养的分类启发式提问细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一。可分为原代培养和传代培养两种。（二）细胞原代培养的原理原代培养：是直接从生物体获取的细胞、组织或器官的一部分进行培养；由于刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞生长，代谢，繁殖提供有力的手段，同时也为以后传代培

10、养创造条件。（三）胰酶消化法原理将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常 用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。25分钟四、内容与操作（一）组织块直接培养法 1、将孕鼠拉颈椎致死，取胎鼠带入超净台内。 2、超净台内，将孕鼠子宫剪开取胚胎。3、用小镊子撕破胎膜，取出胎鼠，用PBS洗涤3次。4、将胚胎转移到另一装有PBS的平皿中，用手术剪将其剪成小块（1mm3），再用PBS液洗三次。5、将组织块转移到培养瓶，贴附瓶壁。翻转此壁朝上， 将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。6、37静置3-5小时，

11、轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37继续培养。（二）、酶消化分离细胞培养法原理：在组织块培养法基础上，经各种酶（常用胰蛋白酶与胶原酶）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养。1、将孕鼠拉颈椎致死，取胎鼠带入超净台内。 2、超净台内，将孕鼠子宫剪开取胚胎。3、用小镊子撕破胎膜，取出胎鼠，用PBS洗涤3次。4、将胚胎转移到另一装有PBS的平皿中，用手术剪将其剪成小块（1mm3），再用PBS液洗三次。5、视组织块量加入5-6倍0.25%胰酶液，37中消化20-40分钟，每隔5分钟振荡一次，使细胞分离。6、加入3-5ml培养液以终止胰酶消化作用。7、静置5-10分钟，使未分散的组

12、织块下沉，取悬液加入到离心管中。8、1000rpm，离心10分钟，弃上清液。9、加入培养液l2 ml（视细胞量），血球计数板计数。10、将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37下培养。80分钟（三）操作演示学生分组，进入无菌操作室具体操作。教师巡视指导五 注意事项1、操作前，提前将操作间和超净工作台内紫外灯打开， 消毒杀菌30 分钟。2、进操作间前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。3、点燃酒精灯，操作在火焰附近进行。4、手不能在开盖的消毒物品上方活动。5、凡在超净台外操作的步骤，各器皿需用盖子或橡皮塞， 以防止细

13、菌落入。六、思考题1、比较组织块培养法和消化培养法获得原代培养物的效果和优缺点。2、观察原代培养细胞中的细胞类型，并根据以往的知识初步分析哪类细胞属于成纤维样细胞，哪类细胞属于上皮样细胞布置作业或思考题1、比较组织块培养法和消化培养法获得原代培养物的效果和优缺点。2、观察原代培养细胞中的细胞类型，并根据以往的知识初步分析哪类细胞属于成纤维样细胞，哪类细胞属于上皮样细胞。参考书籍与常用网址1、章静波，医学细胞生物学实验指导， 人民卫生出版社，2007.6 2、翟中和，细胞生物学（第三版），高等教育出版社，2007.83、生物谷 课后小结蚌埠医学院教案2010-2011年度 第 二 学期教师姓名：

14、 职称： 系（部）：生物科学系 教研室：实验中心授课对象： 08生物本科 专业 生物 班级 授课时间：2011 年 3 月 4 日课程名称中文选用教材现代生物学技术与探索性实验授课时数5英文章节及内容实验三 人类外周血淋巴细胞染色体标本的制备授课地点F座层流室及实验室教学目的与要求要求学生学会人类外周血淋巴细胞染色体的制备方法教学重点与难点重点：人类外周血淋巴细胞染色体的制备方法难点：实验原理教学方法讲述法、板书教具使用教案、讲稿、粉笔教学过程及时间分配主要教学内容教学方法【导言】2分钟2分钟5分钟5分钟15分钟90分钟1分钟目前染色体的研究几乎深入到生物学科的每一个领域，因为染色体是把细胞生

15、物学与分子生物学联系起来的重要桥梁，所以在遗传学研究中工者在医学研究中被广泛重视及应用。今天我们就来学习如何制备人类的染色体标本。【板书】实验三 人类外周血淋巴细胞染色体标本的制备【实验目的】初步掌握人类外周血细胞染色体标本的制备方法。【实验原理】1) 低渗处理分裂细胞可使CS展开；2) PHA可使淋巴细胞转化为淋巴母细胞，并进行mitosis；3) 秋水仙素可使分裂的细胞停止在中期；4) 标本的空气干燥法使细胞和CS展平。【器材及药品】1. 5ml无菌注射器（7号针头），培养瓶、离心管、吸管、预冷载玻片等。 2. 超净工作台，恒温培养箱，天平，离心机、显微镜等。3. 试剂： 1) RPMI-

16、1640 2) 小牛血清（BSA）3) 植物血凝素（PHA）4) 肝素钠（肝素）5) 抗菌素：青霉素100U/ml、链霉素100U/ml6) 秋水仙素（秋水仙碱） 7) 低渗液：0.075M KCl 8) Carnoy固定液： 甲醇冰HAC（3l），现配现用。9) Giemsa染色液：1份原液和9份PBS，现配现用。 10) 磷酸缓冲液（PBS）：1/15M Na2HPO4、1/15M KH2PO4等体积混和。【操作步骤】1. 采血12ml2. 接种0.20.3ml3. 恒温培养3772h终止前24h秋水仙素一滴4. 收集细胞1000rpm810min弃上清5. 低渗处理37低渗液68ml细胞

17、打匀37水浴低渗2530min6. 预固定Carnoy固定液1ml细胞打匀1000rpm810min7. 第一次固定弃上清固定液68ml细胞打匀静置1520min1000rpm810min8. 第二次固定重复上一步操作9. 制细胞悬液弃上清留适量固定液0.51ml10. 滴片Slide冷冻23滴轻吹散过火11. 染色Giemsa染液染色1015min细水洗去多余染液晾干12. 镜检低倍镜油镜五【学生操作】【作业】1. 将分散良好的标本观察人类染色体的形态、结构特点。讲述法讲述法布置作业或思考题1 为了获得较好的分裂相供以后核型分析，在实验操作过程中应注意那些问题？参考书籍与常用网址1遗传学(第

18、二版).,刘祖洞 2细胞生物学与医学遗传学实验指南 蔡绍京 第二军医大学出版社课后小结1 总体教学效果较好，讲解实验过程仔细并强调注意事项，使学生较好的掌握了实验原理和步骤。2 要进一步锻炼学生的动手能力，特别是关于无菌操作的过程和注意事项。蚌埠医学院教案2010-2011年度 第 二 学期教师姓名： 职称： 系（部）：生物科学系 教研室：实验中心授课对象： 08生物本科 专业 生物 班级 授课时间：2011 年 3 月 4 日课程名称中文选用教材现代生物学技术与探索性实验授课时数5英文章节及内容实验三 人类染色体核型分析授课地点 F座实验室教学目的与要求： 1、掌握核型分析的基本过程方法 2

19、、掌握核型的书写 3、初步掌握镜下人类非显带核型分析方法教学重点与难点：重点：1、核型分析的基本过程和方法2、镜下人类非显带染色体核型分析方法难点：镜下人类非显带染色体核型分析方法教学方法：设问 启发 讲述 演示教具使用：黑板 粉笔 挂图教学过程及时间分配主要教学内容教学方法【复习理论课】5分钟【新课导入】3分钟【讲授新课】2分钟10分钟20分钟50分钟20分钟10分钟复习人类染色体相关内容，人类染色体的结构，数目及其分组情况。导言：当人类染色体异常时，就会导致染色体疾病的发生，在临床上我们通常通过人类外周血细胞制的染色体标本来观察，那么我们如何观察和判断人类染色体的核型呢？【板书】实验一 人

20、类染色体核型分析一 实验目的二 实验原理 1 染色体核型 2 核型分析 3 核型表达式 4 丹佛体制三 实验步骤1 染色体数目分析2 形态结构分析3 核型照片剪贴4 染色体测量四 学生动手操作 巡视指导五 结果观察并绘图六 总结讨论七 布置预习实验二提问设问启发讲述演示 讲述示教启发布置作业或思考题1、 绘制人类非显带染色体快速线条图2、 正常人非显带核型照片剪贴参考书籍与常用网址1.细胞生物学与医学遗传学实验指南 蔡绍京 第二军医大学出版社，20022. 医学遗传学原理 孙开来 译 科学出版社，2001网站：1、www.ncbi.nlm.nih,gov/dmim2、www.sanger,ac

21、.uls课后小结 蚌埠医学院教案2010-2011年度 第 二 学期教师姓名： 职称： 系（部）：生物科学系 教研室：实验中心授课对象： 08生物本科 专业 生物 班级 授课时间：2011 年 3 月 4 日课程名称中文探索性实验选用教材现代生物学技术与探索性实验授课时数5英文章节及内容实验四 荧光原位杂交授课地点教学目的与要求【目的与要求】 1.通过实验了解常用荧光原位杂交技术的种类和基本原理；2.初步掌握原位杂交技术的操作方法和步骤；3.了解荧光原位杂交方法的应用。教学重点与难点教学重点、难点：初步掌握原位杂交技术的操作方法和步骤；教学方法讲述，示教等教具使用教学过程和时间分配主要教学内容

22、教学方法一、 荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization FISH)是近几年来发展起来的一项新技术，它是基于Southern blot原理，在同位素标记探针进行原位杂交基础上发展起来的。二、 FISH技术原理与方法三、 FISH探针（一）、FISH探针的标记 （二）FISH的探针类型四、内容与操作布置作业或思考题（1）通过实验总结荧光原位杂交实验的技术关键。（2）实验中会不会出现假阳性，为什么？参考书与常用网址王延华，分子杂交理论与技术(第2版) 科学出版社，2009年，北京。贝蒂 (Beatty Barbara) (作者), 王瑛 (译者

23、), 张诗武 (译者)， 荧光原位杂交技术，天津科技翻译出版公司; 第1版 (2003年)课后小结蚌埠医学院教案2010-2011年度 第 二 学期教师姓名： 职称： 系（部）：生物科学系 教研室：实验中心授课对象： 08生物本科 专业 生物 班级 授课时间：2011 年 3 月 4 日课程名称中文探索性实验课程选用教材现代生物学技术与探索性实验授课时数5学时英文章节内容组织切片技术-HE染色授课地点教学目的与要求1、了解组织石蜡切片法的原理与整个过程。2、了解组织切片HE染色的原理与整个过程步骤。3、初步掌撑石蜡切片技术。4、初步掌握HE染色技术。5、了解组织切片的方法。教学重点与难点【重点

24、】：1 石蜡切片技术与HE染色的原理。2 石蜡切片技术的技巧掌握。【难点】： 石蜡切片技术的技巧掌握。教学方法讲授、演示、示教、讨论、总结。主要词汇 取材、固定、脱水、透明、浸蜡、 包埋、石蜡切片、水化、HE染色。教具使用石蜡切片机、水浴锅、显微镜、多媒体教学设备等。教学过程及时间分配主要教学内容教学方法新课导入5分钟讲授新课10分钟20分钟设问：什么方法能够看到组织的细微结构，导入石蜡切片的概念。讲述石蜡切片的应用范围。实验三 石蜡切片与HE染色技术一、实验目的要求强调需要初步掌握石蜡切片与HE染色技术。二、主要器材与试剂三、实验原理细胞核内的染色质主要是脱氧核糖核酸（DNA），DNA的双螺

25、旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精（硷性染料）以离子键或氢键结合而染色。苏木精在碱性染料中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。 细胞浆内主要成分是蛋白质，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。伊红是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。伊红是细胞浆的良好染料。 四、内容与操作取材、材料越新鲜越好，一般不超过死后24小时。活体应选择病变部与可疑病变部切取，

26、切取时要由表及里，有浅入深并包括周围正常组织一部分。切取组织块大小，以1.5×1.5×0.3厘米为宜，最厚不宜超过0.5厘米。组织块病变一面应平整光滑，另一面可不平整，以便包埋时辨认。特殊材料应根据器官的结构特点切取。管状，囊状和皮肤组织应注意垂直切取（横切）。带有薄膜的组织，要防止切时薄膜分离和脱落。启发PPT课件讲授PPT课件讲授教学过程及时间分配主要教学内容教学方法80分钟80分钟30分钟做好标记。固定、固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与活组织相似的结构状态。常用的固定液（10%的福尔马林溶液）。冲洗、流水（自来水）冲洗12小

27、时到24小时脱水、梯度酒精脱水透明、透明的目的及常用二甲苯作为透明剂。(提示二甲苯有毒)浸蜡、可在5658恒温箱中进行。包埋、注意各组织块之间的距离和每个组织块的位置和方向。 切片、切片完整，厚度46um，薄厚均匀，无褶无刀痕。 染色、强调脱蜡、水化、染色、水洗、在脱水、透明、封片。观察、染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。 讨论：在梯度乙醇脱水的步骤中，为什么无水乙醇要两次？演示、指导（学生反复练习）讨论、总结思考题【思考题】1、浸蜡的过程中为什么先用二甲苯与石蜡的混合液，且是辣的浓度由低到高，直至纯液体石蜡 ？2、影响染色效果的因素有哪些？染色不清晰怎么补救？参考书籍与常用网址课后

28、小结蚌埠医学院教案2010-2011年度 第 二 学期教师姓名： 职称： 系（部）：生物科学系 教研室：实验中心授课对象： 08生物本科 专业 生物 班级 授课时间：2011 年 3 月 4 日课程名称中文探索性实验课程选用教材现代生物学技术与探索性实验授课时数5学时英文章节内容组织切片-免疫组化技术授课地点教学目的与要求1、掌握免疫组织化学技术的基本原理 2、了解免疫组织化学技术的实验步骤。3、初步掌撑免疫组织化学技术4、了解免疫荧光技术教学重点与难点【重点】：1 免疫组化技术的基本原理的原理。2 初步掌撑免疫组织化学技术。【难点】： 免疫组化技术的基本原理的原理。教学方法讲授、演示、示教、

29、讨论、总结。主要词汇 免疫、免疫组化、免疫荧光、DAB显色、抗原修复。 抗原、抗体、一抗、二抗、内源性过氧化物酶、目标蛋白。教具使用石蜡切片机、水浴锅、微波炉、显微镜、多媒体教学设备等。教学过程及时间分配主要教学内容教学方法新课导入10分钟讲授新课10分钟20分钟1、总结石蜡切片的实验。提问上次课的要点。2、设问：怎样检测切片或细胞中的目标蛋白的存在（目的基因是否正确表达）？导入免疫组化的概念。讲述免疫组化的应用范围（科研与临床）。实验四 石蜡切片与HE染色技术一、实验目的要求强调需要初步掌握免疫组化的基本原理和技术。二、主要器材与试剂一抗、二抗、DAB显色液、苏木素染液、0.1M柠檬酸钠缓冲

30、液（pH6.0）、3%H2O2三、实验原理1、免疫组化原理利用特异性的抗原抗体反应，以标记抗体检测抗原的存在。标记物可以是荧光素（免疫荧光技术），也可以是辣根过氧化物酶DAB显色（免疫组化）。2、DAB显色原理： DAB即3,3N-Diamionobenzidine Tertrah-ydrochloride(中文：3，3二氨基盐酸联苯胺或3，3，4，4四氨基联苯四盐酸）是辣根过氧化物酶的常用底物，在该酶的作用下，DAB会产生不溶于水和乙醇棕色沉淀，因此可以继续用苏木素复染细胞核。细胞核呈蓝色，目标（标记辣根过氧化物酶的抗体检测）抗原部分呈棕色。四、内容与操作1、 石蜡切片60预热1020分钟。

31、 2、 常规脱蜡水化：二甲苯5分钟，2次；无水乙醇5分钟，2次；95乙醇5分钟，2次；75乙醇5分钟1次；ddH2O 5分钟1次。3、PBS洗 3次，5分钟/次 4、抗原修复：用0.1M柠檬酸钠缓冲液（pH6.0）于微波炉煮沸。5、封闭内源性过氧化物酶：3%H2O2室温湿盒孵育10分钟。6、PBS洗 3次，5分钟/次。启发PPT课件讲授PPT课件讲授教学过程及时间分配主要教学内容教学方法80分钟80分钟30分钟7、正常山羊血清室温湿盒封闭30分钟。8、一抗孵育：将组织切片于稀释的一抗溶液中37湿盒孵育60分钟或4过夜。9、室温复温15分钟。10、PBS洗 3次，5分钟/次。11、二抗室温湿盒孵

32、育 A、每张切片加1滴或50UL聚合物增强剂室温下孵育30分钟。 PBS洗 3次，5分钟/次。B、每张切片加1滴或50UL酶标二抗室温下孵育30分钟。 PBS洗 3次，5分钟/次。12、 DAB显色，室温110分钟。DAB滴加到组织切片时作用时间最长不宜超过10分钟（最好在5分钟内），否则不管有无阳性结果均应终止反应（DAB有致癌作用，故操作时应戴手套）。 13、ddH2O洗 3次，5分钟/次。14、苏木素复染110分钟。15、脱水：95乙醇2次，10分钟/次无水乙醇2次，10分钟/次。16、透明：二甲苯2次，10分钟/次。17、中性树胶封片。继续练习石蜡切片技术。讨论：免

33、疫组化与免疫荧光有什么不同?各有什么优缺点？演示、指导（学生反复练习）讨论、总结思考题【思考题】1、为什么要封闭内源性过氧化物酶？2、为什么要修复待测抗原？3、免疫组化与免疫荧光在临床和科研中的应用有哪些？参考书籍与常用网址课后小结蚌埠医学院教案2010-2011年度 第 二 学期教师姓名： 职称： 系（部）：生物科学系 教研室：实验中心授课对象： 08生物本科 专业 生物 班级 授课时间：2011 年 3 月 4 日课程名称中文探索性实验选用教材生物科学系编写授课时数5英文章节及内容实验 PCR及其凝胶成像应用授课地点教学目的与要求1.掌握PCR原理和技术种类；2.了解PCR技术在现代生物化

34、学与生命科学上的应用；3.熟悉PCR技术体系及最适条件；4.熟悉PCR仪的操作及其程序的编写；5.掌握用凝胶成像采集系统进行采图的方法；6.了解凝胶成像对大分子物质进行粗定量分析的方法。教学重点与难点教学重点、难点：熟悉PCR仪的操作及其程序的编写；掌握用凝胶成像采集系统进行采图的方法；教学方法讲述，示教等教具使用多媒体等教学过程和时间分配主要教学内容教学方法1、聚合酶链式反应2、PCR的原理：类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成3、PCR反应体系与反应条件：PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+)4、PCR步骤及其程序设计:标准的PCR过程分为三步：1）DNA变性（90-96）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA2）退火（25-65）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。3）延伸（70-75）：在Taq酶