生物工艺原理

1、101.名词解释生物技术：应用自然科学和工程学的原理，依靠生物催化剂的作用将物料进行加工以提供产品或用以为社会服务的技术。生物转化： 微生物的生物转化是利用微生物细胞的一种或多种酶，作用于一些化合物的特定部位（基团），使它转变成结构相类似但具有更大经济价值的化合物的生化反应。种子扩大培养：是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，在经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级放大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。生理酸性物质：无机氮源被菌体作为氮源利用后，能形成酸性物质的无机氮源叫生理酸性物质生理碱性物质：如硫酸铵，代谢后能产生碱性物质的无机氮源称为生理

2、碱性物质前体物质： 前体指某些化合物加入到发酵培养基中，能直接彼微生物在生物合成过程中合成到产物物分子中去，而其自身的结构并没有多大变化，但是产物的产量却因加入前体而有较大的提高。促进剂：所谓产物促进剂是指那些非细胞生长所必须的营养物，又非前体，但加入后却能提高产量的添加剂。淀粉的糊化与老化： 糊化：指淀粉受热后，淀粉颗粒膨胀，晶体结构消失，互相接触变成糊状液体，即使停止搅拌，淀粉也不会再沉淀的现象,称为淀粉的糊化。此时的温度称为糊化温度。淀粉的老化实际上是分子间氢键已断裂的糊化淀粉又重新排列形成新的氢键的过程，也就是复结晶的过程。DE值：糖化液中还原糖含量（以葡萄糖计）占干物质的百分率，用以

3、表示淀粉糖的糖组成。分叉中间体：糖代谢的中间体，即可以来合成初级代谢产物，又可以来合成次级代谢产物，这种中间体叫分叉中间体，如丙二酰Co。发酵热：发酵热指的是发酵过程中释放出来的净热量，以J/(m3·h)为单位表示。2.生物反应过程可分为哪四个部分.（1）原材料预处理选择物理、化学方法加工培养基（发酵过程、动植物细胞或组织培养）的配制和灭菌、底物（酶反应过程）的准备。（2） 生物催化剂的制备发酵过程：筛选高产、稳定、易培养的菌种；制备种子。酶反应过程：选择相应的酶，考虑纯度、添加量等；固定化应提前进行，然后装入酶反应器。动植物细胞：建立稳定的细胞系。污水处理：选择适当的降解污染的微生

4、物。（3） 生物反应器及反应条件的选择主要为活细胞生长或酶反应提供适宜的条件。如温度、pH、DO等。建立稳定的条件控制系统。具有方便的参数检测系统。（4） 产物的分离纯化又称下游过程：用适当的方法将含量比较少的产物从反应液（胞外产物）、细胞中（胞内产物）初步提取出来，然后加以精制，达到最后产品的要求。 方法：吸附法、溶媒萃取法、离子交换法、沉淀法或蒸馏法等。3. 生物反应过程的特点有哪些.（1）采用生物催化剂，因此要在常温常压下进行反应。生物催化剂易失活，稳定性差。（2）可以通过DNA重组、细胞融合、诱变育种等手段创造新产品。（3）采用一些可再生资源如：碳水化合物、蛋白质等为主要原料，成本低，

5、废物危害性小。但是原料成分难以控制，质量不稳定。（4）与一般化工生产相比，设备简单，能耗较低。往往反应罐体积很大，需要无菌操作。（5）酶反应过程专一性强，转化率高，但成本高。（6）发酵过程成本低，应用广，但反应机理复杂，较难控制；反应液杂质多，提纯麻烦。（7）生产过程中需要防止杂菌以及噬菌体的污染。2.工业化菌种有哪些要求?1、能够利用廉价的原料，简单的培养基，大量高效地合成产物2、有关合成产物的途径尽可能地简单，或者说菌种改造的可操作性要强3、遗传性能要相对稳定4、不易感染它种微生物或噬菌体5、产生菌及其产物的毒性必须考虑（在分类学上最好与致病菌无关）6、 生产特性要符合工艺要求3.菌种保藏

6、的环境要素。常用的菌种保藏的方法有哪些？环境因素：干燥、低温、缺氧、缺营养、添加保护剂等1) 斜面保藏法和穿刺保藏法2) 沙土管干燥保藏法3) 液体石蜡保藏法 4) 真空冷冻干燥保藏法 P59 5） 液氮超低温保藏法 6）悬液保藏法7）菌丝速冻法4. 决定种子扩大培养的级数的依据是什么?种子罐级数：是指制备种子需逐级扩大培养的次数，取决于： 菌种生长特性、孢子发芽及菌体繁殖速度；所采用发酵罐的容积5. 选择种子培养基时应考虑那些因素？种龄和接种量一般如何选择？培养基营养成分适合种子培养的需要选择有利于孢子发芽和菌体生长的培养基；营养上要易于被菌体直接吸收和利用；营养成分要适当丰富和完全，氮源和

7、维生素含量要高,营养成分要尽可能与发酵培养基相近。接种量的选择：决定于生产菌种在发酵罐中生长繁殖的速度。采用较大的接种量可以缩短发酵罐中菌丝繁殖到达高峰的时间，使产物的形成提前到来。但若接种量过多，往往使菌丝生长过快，培养液粘度增加，造成溶氧不足，而影响产物的合成。接种量过小，延长发酵周期，往往还会引起其他不正常情况。通常种龄是以处于生命力极旺盛的对数生长期，菌体量还未达到最大值时的培养时间较为合适。时间太长，菌种趋于老化，生产能力下降，菌体自溶；种龄太短，造成发酵前期生长缓慢。不同菌种或同一菌种工艺条件不同，种龄是不一样的，一般需经过多种实验来确定。嗜碱性芽孢杆菌生产碱性蛋白酶，12小时最好

8、。6. 种子质量主要从哪两方面控制?必须保证生产菌种的稳定性，提供种子培养的适宜环境条件，保证无杂菌侵入，少量菌种-无菌生理盐水-递增稀释-平板划线培养。挑出形态整齐，孢子丰满的菌落进行摇瓶试验，测定其生产能力。 2. 无菌检查：显微镜观察、种子液进行无菌试验、生化分析。 种子液平板划线、斜面培养用肉眼观察是否有异常菌落、异常现象及镜检是否有杂菌。2. 选择培养基成分时应考虑哪些问题？（1）营养物质应满足微生物的需要（2）代谢的阻遏和诱导（3）合适的碳氮比（4）pH的要求3.在酒精生产中,葡萄糖转化为酒精的理论转化率如何计算?葡萄糖转化为酒精的代谢总反应衡算式为 C6H12O6 2C2H5OH

9、 + 2CO2 则1mol葡萄糖生成2mol乙醇，理论转化率为 2×46.05/180.1×100%=51.1% 但是在生产中大约有5%的葡萄糖用于合成酵母细胞和副产物，实际上乙醇生成量约为理论值的95%，则乙醇对糖的实际转化率约为48.5%。4. 培养基设计的一般步骤。 根据前人的经验和培养基成分确定时一些必须考虑 的问题，初步确定可能的培养基成分； 通过单因子实验最终确定出最为适宜的培养基成分；数理统计学方法：运用统计学方法设计实验和分析实验结果，得到最佳的实验条件。如正交设计、均匀设计、响应面设计。5. 了解淀粉的性质。 淀粉可分为直链和支链淀粉两类。 直链淀粉通过-

10、1，4键连接。 支链淀粉的直链部分通过-1，4键连接，分支点则有-1，6键连接，支链平均有25个葡萄糖基团，因而还原性末端数量较少。6. 淀粉的水解过程中,葡萄糖会发生哪些反应?葡萄糖在酸性介质中加热脱水环化,形成5-羟甲基糠醛。部分的5-羟甲基糠醛缩合生成黄棕色色素。7淀粉水解过程中液化和糖化检测方法. 检验液化：是否有淀粉，用碘液，是否呈兰色； 检验糖化：是否水解完全 测定还原糖； 用无水酒精(糊精能溶于水，不溶于酒精)。8 淀粉的水解方法有哪些？在淀粉的酸水解过程中，发生哪三种反应？哪个是主导反应？酸解法、 酶解法、 酸酶结合法 在淀粉的酸水解过程中，三种反应同时发生，淀粉的水解反应是主

11、要的，葡萄糖的复合和分解反应是次要的，复合反应和分解反应对葡萄糖的生产来说是不利的，影响菌体的正常发酵及工厂的生产成本。 9 淀粉的双酶制糖工艺中,aa淀粉酶和糖化酶的作用方式.a淀粉酶从淀粉分子内部水解a a- 14糖苷键，不能水解aa -16-糖苷键，但能越过a -16-糖苷键继续水解aa-14-糖苷键，而将aa-1.6糖苷键留在在水解产物中。糖化酶属于外酶，它的底物专一性较低，糖化酶对底物作用从非还原末端开始,将a-1.4和a a-1.6糖苷键水解, 糖化酶在水解淀粉分子和较大分子的低聚糖时，优先水解a-1.4键，此酶也能水解支淀粉分子中的a-1.6键，但速度较慢，如果以裂解a-1.4键

12、速度为100，即裂解a-1.6键速度为33。10 淀粉的双酶制糖工艺中,液化程度控制如何控制?在液化过程中，淀粉液化水解成较小的分子。液化程度不能太低，因为：液化程度低，液化液的黏度就大，难于操作； B 液化程度低，淀粉易老化，不利于糖化，特别会使糖化液的过滤性较差。但是,液化程度也不能太高，因为：糖化酶(葡萄糖淀粉酶)属于外酶，水解是由底物分子的非还原末端开始，使葡萄糖单位逐个从糖苷键中裂解出来，先与底物分子生成络合结构，而后发生水解作用，要求底物分子有一定的大小, 液化超过一定程度，底物分子过小,不利于糖化酶生成络合结构，影响催化效率，使糖化液的最终值偏低。 正常液化条件下，控制值在102

13、0之间为好 1、巴斯德效应及其实质. 在好气条件下，酵母菌发酵能力下降。 实质是细胞内糖代谢降低，导致乙醇积累减少。不仅存在于酵母中，也存在于具有呼吸和发酵能力的 在好气条件下：糖代谢进入TCA环 柠檬酸、ATP 阻遏磷酸果糖激酶的合成 6-P-果糖（积累） 6-P-葡萄糖（积累） 反馈抑制己糖激酶 抑制葡萄糖进入细胞内 葡萄糖利用降低。其他细胞中。 2、酵母的酒精发酵机制. (1 ) 葡萄糖（glucose） EMP 丙酮酸（pyruvic acid） 己糖磷酸化作用 EMP 六碳糖转变为三碳糖磷酸丙糖 丙酮酸 (2) 丙酮酸乙醇 丙酮酸（pyruvic acid ）丙酮酸脱羧酶乙醛（ace

14、taldehyde） 乙醛 乙醇脱氢酶 乙醇 （alcohol） 丙酮酸 CO2+乙醛乙醇（） NADH+H+ NADH+ 由葡萄糖生成乙醇的总反应式为 C6H12O6 + 2ADP +2H3PO4 2CH3CH2OH + 2CO2 + 2ATP15 3、同型乳酸的发酵机制。 进行乳酸发酵的主要是细菌。 它们利用糖经糖酵解途径生成丙酮酸，丙酮酸还原产生乳酸。发酵产物中主要为乳酸的称为同型乳酸发酵，如乳链球菌、乳酪链球菌、干酪乳杆菌、保加利亚乳杆菌等。 EMP 2H（乳酸脱氢酶） C6H12O6 - 2CH3COCOOH -2CH3CHOHCOOH 同型乳酸发酵的特点：1mol的G产生2mol乳

15、酸，理论转化率是100%。另外有很少量的乙醇、乙酸和二氧化碳等。 4、沼气菌包括哪些微生物？产酸阶段的细菌有：梭菌属；芽孢杆菌；葡萄球菌属；变形杆菌属；杆菌属。产甲烷杆菌；甲烷短杆菌；甲烷球菌；甲烷微球菌等细菌 5、甲烷发酵的过程分哪几个阶段？各起什么作用？第一阶段是有机聚合物水解生成单体化合物，进而分解成各种脂肪酸、CO2和H2； 第二阶段是各类脂肪酸进行分解，生成乙酸、 CO2和H2； 第三阶段是由乙酸和CO2及H2反应生成甲烷；前两个阶段也可统称为产酸阶段，产酸阶段也叫液化阶段，参与这一阶段反应的微生物大部分是兼性厌氧细菌，只有少数的原生动物、霉菌和酵母参与这一反应。发酵液中这一类非甲烷

16、产生菌的数量大体上与甲烷产生菌相等。1、 试述柠檬酸的积累机制。1、由于锰的缺乏，抑制了蛋白质的合成，而导致细胞内的NH4+ 浓度升高，促进了EMP途径的畅通。 2、由组成型的丙酮酸羧化酶源源不断提供草酰乙酸。 3、在控制Fe+含量的情况下，顺乌头酸酶活性低，从而使柠檬酸积累。 顺乌头酸水合酶在催化时建立如下平衡 柠檬酸：顺乌头酸：异柠檬酸90 ：3：7 4、丙酮酸氧化脱羧生成乙酰辅酶和丙酮酸固定CO反应相平衡，以及柠檬酸合成酶不被抑制，增强了合成柠檬酸的能力。 5、柠檬酸积累增加，pH降低，在低pH条件下，顺乌头酸水合酶和异柠檬酸脱氢酶失活，从而进一步促进了柠檬酸自身的积累。2、 PFK在正

17、常生理条件下能被柠檬酸抑制，但在柠檬酸发酵中，柠檬酸浓度很高，为什么EMP途径仍能保持畅通呢？ 由于TCA循环降低，ATP的生成减少，蛋白质和核酸合成受阻，细胞内的NH4+异常高， NH4+对该酶有活化作用，从而解除了柠檬酸对PFK的抑制。 柠檬酸发酵中黑曲霉对Mn2+极端敏感。黑曲霉在缺锰的条件下发酵 ，细胞发生生理和代谢的变化，才使柠檬酸得以积累。 Mn2+的效应可以认为是由于Mn2+ 缺乏，使蛋白质、核酸的合成受阻，从而使NH4+水平升高，而减弱了柠檬酸对EMP途径关键酶（PFK）的抑制。3、 柠檬酸积累的条件下，所需要的草酰乙酸的来源.在柠檬酸积累的条件下，三羧酸循环已被阻断，不能由此

18、来提供合成柠檬酸所需要的草酰乙酸，必须由另外途径来提供草酰乙酸。研究证实草酰乙酸是由丙酮酸(PYR)或磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)羧化生成的。 丙酮酸羧化酶丙酮酸 + CO2+ ATP-草酰乙酸 + ADP + Pi （主要反应） PEP羧化酶磷酸烯醇丙酮酸+ CO2 + ADP + Pi -草酰乙酸 + ATP4、 在谷氨酸发酵中，生成谷氨酸的主要酶反应有哪些?1.葡萄糖经过EMP和HMP两个途径降解为丙酮酸，生物素充足HMP所占比例是38%，控制生物素亚适量，HMP所占比例约为26%。2.TCA循环中断，丧失-酮戊二酸脱氢酶。3. 草酰乙酸的来源： 在菌体生长期，走乙醛酸循环来提供菌体合成所

19、需中间产物。在生长期之后，进入谷氨酸合成期，为了大量积累谷氨酸，最好封闭乙醛酸循环。可以通过控制生物素亚适量来调节，在进入谷谷氨酸合成期后，几乎没有异柠檬酸裂解酶的活性。4.存在氧化还原共轭体系: 在谷氨酸的生物合成中必须有谷氨酸脱氢酶和异拧檬酸脱氢酶的共轭反应，且两种酶的活性是平衡的，否则不能合成谷氨酸。5、 谷氨酸的理想合成途径及调节机制。1. 优先合成 谷氨酸比天冬氨酸优先合成，谷氨酸合成过量后，抑制和阻遏自身的合成途径，使代谢转向合成天冬氨酸。2.磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的调节：磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶受天冬氨酸的反馈抑制，受谷氨酸和天冬氨酸的反馈阻遏。3. 柠檬酸合成酶的调节： 柠檬酸合

20、成酶是TCA循环的关键酶，除受能荷调节外，还受谷氨酸的反馈阻遏和乌头酸的反馈抑制。4. 异柠檬酸脱氢酶的调节 ：异柠檬酸脱氢酶催化的异柠檬酸脱氢脱羧生成-酮戊二酸的反应和谷氨酸脱氢酶催化的-酮戊二酸还原氨基化生成谷氨酸的反应是一对氧化还原共轭反应，细胞内-酮戊二酸的量与异柠檬酸的量需维持平衡，当-酮戊二酸过量时对异柠檬酸脱氢酶产生反馈抑制作用， 停止合成-酮戊二酸。在谷氨酸产生菌中， -酮戊二酸脱氢酶先天性地丧失或微弱。6. 谷氨酸脱氢酶的调节：谷氨酸对谷氨酸脱氢酶 存在反馈抑制和反馈阻遏。6、 谷氨酸生物合成中，草酰乙酸的来源有哪些？ a.100%由CO2固定反应提供，1摩尔葡萄糖可以生成1

21、摩尔的谷氨酸，理论收率为81.7%。 b.倘若CO2固定反应完全不起作用，丙酮酸在丙酮酸脱氢酶的催化作用下脱氢脱羧全部氧化成乙酰CoA，通过乙醛酸循坏供给四碳二羧酸。3摩尔葡萄糖可以生成2摩尔的谷氨酸，理论收率为54.4%。7、 谷氨酸发酵生产中，生物素如何调节细胞膜的渗透性？ 在发酵的前期，满足细胞的生长，合成完整的细胞膜；中期生物素耗尽，细胞膜合成不完整，完成长菌型细胞向产酸型细胞的转变，细胞膜的渗透性增加，使得谷氨酸渗透到细胞外，在细胞内谷氨酸达不到引起反馈调节的程度，从而使谷氨酸能够源源不断被优先合成。 对于谷氨酸发酵来说，当生物素浓度高时，合成完整的细胞膜，谷氨酸不能透过细胞膜，因而

22、得不到谷氨酸。8、影响抗生素形成的主要调节机制有哪几种？请简单说明。1初级代谢对次级代谢的调节 2碳代谢物的调节3 氮代谢物的调节 4 磷酸盐的调节5 ATP调节 6酶的诱导调节7 反馈调节（反馈调节包括反馈阻遏和反馈抑制。） 8 细胞膜通透性调节9 金属离子和溶解氧的调节 10 营养期（生长期）与分化期（生产期）的关系2、 与传统分批发酵相比，补料分批培养具备哪些优点？补料分批发酵与传统分批发酵相比，其优点在于使发酵系统中维持很低的基质浓度。低基质浓度的优点：1）可解除底物抑制，产物的反馈抑制和快速利用碳源的阻遏效应，并维持适当的菌体浓度，使不致于加剧供氧的矛盾；2）可降低培养基的黏度，并尽

23、可能地延长产物的形成时间。3）避免培养基积累有毒代谢物。与连续发酵相比，补料分批发酵不需要严格的无菌条件，也不会产生菌种老化和变异等问题。3、 在四环素发酵过程中，温度如何影响其生物合成方向？研究发现，温度与微生物的调节机制关系密切。例如，在20时，氨基酸末端产物对其合成途径的第一个酶的反馈抑制作用，比在其正常生长温度37时更大。因此，考虑在抗生素发酵的后期降低温度，加强氨基酸的反馈抑制作用，使蛋白质和核酸的正常合成途径关闭得早些，从而使发酵代谢转向抗生素的合成。4、 发酵过程中，控制pH的方法有哪些？1.考虑发酵培养基的基础配方，特别是碳氮比（C/N） 使之有适当的比例，使发酵过程pH 的变

24、化在适合的范围内。 培养基中含有代谢产酸如葡萄糖产生酮酸、(NH4)2 SO4 和产碱 如NaNO3 、尿素的物质，它们在发酵过程中要影响pH的变化. 2. 添加缓冲剂 CaCO3能与酮酸等反应，而起到缓冲作用，所以它的用量比较重要。在分批发酵中，常采用这种方法来控制pH的变化。或具有缓冲能力的试剂，如磷酸缓冲液等.3、加酸碱调pH 4 、通过补料调节pH 在发酵过程中根据糖氮消耗需要进行补料。（1） 当NH2-N低，pH低时补氨水；当NH2-N低，pH高时补(NH4)2SO4它们不仅可以凋节pH值，还可以补充氮源(2)调节补糖速率，调节空气流量来调节pH，采用补枓的方法来调节pH值，可以同时

25、实现补充营养、延长发酵周期、调节pH值和培养液的特性（如菌浓等等几个目的。最成功的例子就是青霉素的补枓工艺，利用控制葡萄糖的补加速率来控制pH值的变化范围（现已实现自动化），其青霉素产量比用恒定的加糖速率和加酸或碱来控制pH值的产量高25%。5、 请说出用于控制溶氧的常用工艺手段。（1）改变通气速率（增大通风量）：增大KLa值。注意，过分增大通气速率会产生副作用，如泡沫生成、罐温增高等。（2）改变搅拌速度：转速较低时，增大搅拌速度对提高溶氧浓度有明显作用；当转速很高时，再增大搅拌速度起不到调节作用，反而打碎菌丝体，使菌体自溶并减少产量。（3）改变气体组成中的氧分压（4）改变罐压：提高C*。不是

26、十分有效（5）改变发酵液的理化性质：如加消沫剂、补加无菌水、改变培养基的成分等（6）加入传氧中间介质：一般是不溶于培养液的液体，呈乳化状态来提高气液相之间的传递。传氧中间介质有：血红蛋白、烃类碳氢化合物（煤油、石蜡等）、含氟碳化物。6、 CO2对细胞的作用机制是怎样的？CO2对细胞的作用是影响细胞膜的结构溶解CO2 主要作用在细胞膜的脂肪酸核心部位 影响磷脂的亲水头部带电荷的表面及细胞膜表面上的蛋白质 当细胞膜的脂质相中CO2浓度达到一临界值时，膜的流动性及表面电荷密度发生变化。这将导致膜对许多基质的运输受阻，影响了细胞膜的运输效率，使细胞处于“麻醉”状态，生长受抑制，形态发生变化。7、 发酵

27、过程中产生泡沫的原因是什么？对发酵会带来什么危害？控制和消除泡沫的方法有哪些？原因（1）由外界引进的气流被机械地分散形成（2）由发酵过程产生的气体聚结生成的发酵泡沫（3）发酵液中糖、蛋白质和代谢物等的存在起到加强或稳定泡沫的作用危害（1）使发酵罐的装填系数减少（2）造成大量逃液，导致产物损失（3）增加了染菌的机会（4）增加了菌群的非均一性（5）消泡剂的加入给提取工序带来困难方法 机械消沫化学消沫（消沫剂消沫）（在起泡液中不溶或难溶、聚醚类消泡剂、高碳醇、硅酮类)8、 染菌的主要原因有哪些?种子带菌：种子带菌又分为种子本身带菌和种子培养过程中染菌。加强种子管理，严格无菌操作，种子本身带菌是可以克

28、服的。种子培养过程染菌与发酵一样有许多因素造成。种子带菌可使发酵染菌具有延续性。空气带菌：空气除菌技术虽已有较大改善，但仍然没有使染菌率降低到理想的程度。因为空气除菌系统较为复杂，环节多，偶遇不慎便会导致空气除菌失败。空气带菌也使发酵染菌具有延续性，导致染菌范围扩大至所有发酵罐。培养基或设备灭菌不彻底：灭菌技术的好坏与灭菌质量很有关系。蒸汽通入培养基，升温快慢、保温时间产生过多泡沫蒸汽总压是否达到要求标准，一般为孤立事件，不具有延续性设备渗漏：设备渗漏包括夹套穿孔、盘管穿孔、接种管穿孔、阀门渗漏、搅拌轴渗漏、罐盖漏和其它设备漏等。这种途径造成染菌的危害性较大，加强设备本身及附属零部件的严密度检

29、查，对制服染菌是极其主要的，也是重要的。原材料储存和保管，如液胨、玉米浆、糖蜜等有机原料杂菌的数量发酵罐、培养基配制罐等设备的清洗质量有无灭菌的死角，对减少或避免染菌仍然是十分必要的。9 、发酵过程中，不同时期出现染菌后如何处理？（1）种子培养期染菌：由于接种量较小，生产菌生长一开始不占优势，而且培养液中几乎没有产物，容易污染杂菌。处理措施 种子受到杂菌污染后，应经灭菌后弃之，并对种子罐、管道等进行仔细检查和彻底灭菌。同时采用备用种子。（2）发酵前期染菌：发酵前期最易染菌，且危害最大。原因 发酵前期菌量不很多，与杂菌没有竞争优势；且还未合成产物或产生很少，抵御杂菌能力弱。在这个时期要特别警惕以制止染菌的发生。处理措施 如培养基中的碳、氮源含量还比较高时，终止发酵，将培养基重新进行灭菌处理后再用；或者补充新鲜培养基，再进行灭菌处理。也可采取降温培养、调节pH值、调整补料量、补加培养基等措施。（3）发酵中期染菌 ：发酵中期染菌