川乌、草乌、附子及其复方制剂中乌头类生物碱的含量测定研究概况

1、    川乌、草乌、附子及其复方制剂中乌头类生物碱的含量测定研究概况陈巧玲 提要综述了近年来国内外川乌、草乌、附子及其复方制剂中乌头类生物碱含量测定研究概况。 川乌、草乌、附子及其炮制品均为中国药典1995年版一部收载的常用中药。中医认为这些药具有祛风除湿、温经止痛的作用。现代药理研究证明，乌头类中药具有镇静、镇痛、强心、抗炎、抗肿瘤等作用。由于其主要有效成分为剧毒的双酯型生物碱，而且治疗量与中毒量接近。为确保临床用药安全有效，国内外学者在乌头类生物碱的含量测定方面做了大量工作。 1分光光度法 1.1酸性染料比色法赵玉梅等1选择溴麝香草酚蓝作为酸性染料，

2、比色法测定骨痹痛散中乌头总生物碱含量，以乌头碱(12.06mg/50ml，0.05mol/L H2SO4)作对照，提取液于波长412nm处测定吸光度并计算出乌头总碱含量。平均回收率为97.54%。乌兰娜日等2选择溴甲酚绿为酸性染料，以乌头碱(10mg/100ml，氯仿)作对照，于波长(415±1)nm处测定附子理中丸中乌头总碱含量。平均回收率为99.5%，RSD为1.43%。王海孙等3选择文献2的条件测定风湿骨痛酒中乌头总生物碱含量，平均回收率为98.58%，RSD为1.83%，因处方中有麻黄，所以提取液在水浴上挥去溶剂后应在105烘1h以使麻黄碱挥发，排除干扰。陶建生等4选择溴甲酚

3、绿为酸性染料，以乌头碱做对照于波长416nm，处测定止痛酊中乌头总碱含量。平均回收率为96.9%，RSD为3.0%。杨云5以溴麝香草酚蓝为酸性染料，波长408nm处测定附子理中口服液中乌头总生物碱含量，平均回收率96.79%。 1.2一阶导数分光光度法龙沛霞等6采用一阶导数光谱法测定制川乌、制草乌及附子中乌头生物碱含量。测得结果与中国药典(1995年版)方法的测定结果比较无显著差异，而该方法操作起来更简便。 1.3二阶导数分光光度法徐思文7采用二阶导数光谱法测定三七伤药片中总生物碱含量，样品和标准品溶液在波长(238±2)nm和(246±2)nm处有相应的吸收谷和吸收峰，而

4、阴性对照光谱呈近平行线，不干扰样品中乌头总生物碱的定量分析。所以选择此两波长谷峰之间的导数振幅值作为三七伤药片中总生物碱的定量依据。平均回收率为99.3%。 2薄层扫描法 2.1高效硅胶G板-薄层色谱镇痛宁注射液是由制川乌、盐酸异丙嗪等中西药结合的复方制剂，因处方中异丙嗪具碱性，用碱量法测定乌头碱含量有影响。李焕荣等8选择高效硅胶G板，以氯仿-醋酸乙酯-氨水(15201)为展开剂展开，喷以碘化铋钾显色后，双波长(s=520nm，R=650nm)锯齿形反射扫描测定乌头总碱含量。平均回收率为97.85%，RSD为1.98%。 2.2硅胶GF254板-薄层色谱刘成基等9选择硅胶GF254板，用25%

5、氨水饱和后于氯仿-乙醚(125)展开剂中展开，紫外灯下定位，双波长(s=240nm,R=400nm)锯齿形反射扫描，分别测得草乌及其炮制品中酯型乌头碱含量。邹恩济等10用文献9的薄层条件测定蒙成药那如-3和嘎日迪-5中三种酯型乌头碱含量，效果良好。北川熏等11选择硅胶GF254板，以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(1051)为展开剂，双波长(s=250nm,R=400nm)扫描，考查多种乌头及其炮制品中生物碱的种类及含量差异。 2.3硅胶G板-薄层色谱王浴铭等12选择硅胶G板，以正己烷(氨水饱和)-乙酸乙酯-95%乙醇(643610)为展开剂展开，碘蒸气显色后，双波长(s=365nm,R=270nm

6、)锯齿形反射扫描测定活血壮筋丹中乌头总碱含量。平均回收率为95.75%，RSD为0.824%。杨基生等13选择硅胶G板，以苯-乙酸乙酯-二乙胺(720.4)为展开剂，以改良碘化铋钾显色，于波长495nm处扫描测定复方中药橡皮膏中乌头碱含量。平均回收率为99.3%。 2.4G-CMC-Na板-薄层色谱陈晓斌等14选择硅胶G-0.5%CMC-Na板，以正丁醇-苯-乙酸乙酯-甲醇-氨水(20.314.52.31.53.0)为展开剂展开，喷以0.05mol/L硫酸-碘化铋钾显色后，于波长(s=503nm,R=550nm)锯齿形反射扫描测定风湿痹痛丸中毒性成分士的宁、马钱子及乌头碱含量，其中乌头碱平均回

7、收率为99.1%，RSD为1.2%。 3高效液相色谱法 3.1内标法邹恩济等15采用反高效液相色谱法，以甲萘基为内标，分离测定两种蒙成药那如-3、嘎日迪-5中草乌的3种剧毒性成分，选择色谱柱为150mm×4.6mm id的不锈钢柱；流动相甲醇-水-氯仿-三乙醇(703020.1)，检测波长230nm。平均回收率：中乌头碱98.7%，RSD2.1%；乌头碱93.65%，RSD为1.1%；次乌头碱101.7%，RSD3.2%。 3.2外标法北川熏等16采用Kadial-Pak CN柱，以乙腈-0.01mol/L二丁基胺磷酸盐(5545)为流动相，测定多种中药中乌头类生物碱含量。Hideo

8、 Bando等17采用Nucleosil CN柱，以0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH2.5)-乙腈(7129)为流动相，测定日本乌头中双酯型生物碱含量。彭波等18采用Hh反高效液相色谱法测定川乌和附片中乌头类生物碱含量。色谱柱为ODS柱；流动相甲醇-水-乙腈(67332)，pH4.5；检测波长235nm；柱温35。平均回收率：中乌头碱100.48%，RSD为1.47%；乌头碱98.07%，RSD为1.7%；次乌头碱100.65%，RSD为1.6%。朱瑞龙等19采用高效相色谱法测定附子理中丸中双酯型乌头碱含量。以甲醇-水-氯仿-二乙胺(7030300.2)为流动相；固定相为C18(10m,4

9、.6mm×250mm)；检测波长279nm，平均回收率：中乌头碱97.8%，RSD为1.69%；乌头碱96.0%，RSD为2.41%；次乌头碱96.7%，RSD为1.98%。李薇等20采用高效液相色谱法测定肩痛散中乌头总碱含量。色谱柱为YWG-C18H37(4.0mm×300mm)；流动相甲醇-水-氯仿-三乙胺(703010.2)；检测波长240nm，平均回收率为98.4%，RSD为2.57%。 4气相色谱法 川乌、草乌是风湿骨痛酒中的主要成分，戴忠等21采用气相色谱法测定其中的酯型生物碱含量。色谱柱为2m×3mm玻璃柱填充102酸洗白色担体(80-100目)；固

10、体相10%DEGS+1%H3PO4；检测器FID(230)；载气氮气；柱温195，平均回收率为98.4%。 5碱量法 小活洛丸是由制川乌、制草乌等6种中药组成。和中国药典(1995)一部颜根宝等22采用有机溶剂萃取，样品经分离提纯后采用碱量法测定其总乌头生物碱含量。平均回收率为94.79%，RSD为2.14%。 邓建平等23报道川乌、附片中乌头类生物碱含量测定方法的比较研究。各种方法各有其优点，碱量法适用于川乌、草乌、附子单味药材乌头生物碱含量测定。分光光度法一般只能测定乌头生物碱总量，若采用改良异羟酸铁比色法可测定酯型乌头碱含量，但该方法灵敏度差，干扰因素较多，重现性不够理想，有待进一步研究

11、改进。薄层扫描法集分离、测定于一体，不仅可用于单味药材川乌、草乌、附子中乌头碱的含量测定，还广泛应用于含有川乌的复方中药制剂中酯型生物碱含量测定。高效液相色谱法可分别测定中乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量，该方法操作简便，结果准确、重现性好，是目前复方中药制剂中乌头类生物碱含量测定的首选方法。 作者单位:华南农业大学生物技术学院广州 510642 参考文献 1赵玉梅，周慎.骨痹痛散中乌头总生物碱的含量测定.药物分析杂志，1995，15(增刊)433 2乌兰娜日，王玉梅，王伟等.酸性染料比色法测定附子理中丸中总乌头碱的含量.现代应用药学，1996，13(4)30 3王海孙.风湿骨痛酒中乌头总生物碱

12、的含量测定.中成药研究，1988，10(4)14 4陶建生，徐莲英，何文月.止痛酊的药剂学研究.中成药，1991，13(8)4 5杨云.附子理中口服液中乌头类生物碱的含量测定.中国实验方剂学杂志，1997，3(3)43 6龙沛霞，王玉珍.一阶导数紫外分光光度法测定制川乌、制草乌、附子中生物碱含量.中草药，1996，27(9)531 7徐思文.二阶导数光谱法测定三七伤药片中乌头总碱含量.中成药，1990，12(6)11 8李焕荣，张荣华，崔健等.薄层扫描法测定镇痛宁注射液中乌头碱的含量.中草药，1996，27(1)58 9刘成基，曾诠，林革等.草乌及其炮制品中毒性生物碱的分离和测定.中药通报，1

13、987，12(2)19 10邹恩济，武文慧.双波长薄层扫描法测定蒙成药草乌制剂中乌头碱的含量.中成药，1988，10(10)17 11北川熏，陈兆隆，吉原等.Chemical studies on crude drug processing (1). aconiti tuber(2), on the constituents of pao-fuzi, the processed tuber of aconitum carmichaeli DEBX, and biological activities of lipo-alkaloids, 药学杂志(日)，1984，104(8)858 12王浴铭

14、，梁生旺，任大伟.活血壮筋丹中乌头碱含量的双波长薄层扫描法测定.中成药，1988，10(1)13 13杨基森，王贵荣，郭毅.薄层扫描法测定复方中药橡皮膏中乌头碱含量.中成药，1989，11(3)12 14陈晓斌，将建春，张淑芳.双波长薄层扫描测定风湿痹痛丸中士的宁、马钱子碱、乌头碱的含量.中国中药杂志，1994，19(8)482 15邹恩济，冯国庆.高效液相色谱法测定蒙成药草乌制剂中乌头碱的含量.中成药，1992，(14)17 16北川熏，陈兆隆，吉原等.Chemical studies on crude drug processing (), aconiti tuber(3), quanti

15、tative determinative of aconitine alkaloids in aconiti tuber by means of high performance liquid chromatography, 药学杂志(日)，1984，104(8)867 17Hideo Bando.Studies on the constituents of aconitum species the components of aconitum japonicum TH-ONB Chem. Pharm. Bull, 1985,33(11)4717 18彭波，杨华元，刘世端.反相离子对高效液相色谱法分离测川乌和附子片中乌头类生物碱的方法研究.药物分析杂志，1995，15(6)13 19朱瑞龙，景明，柴国林等.HPLC测定附子理中丸双酯型乌头碱含量.中成药，1