高效液相色谱法考察甲壳胺对盐酸西替利嗪片剂生物利用度的作用_

1、高效液相色谱法考察甲壳胺对盐酸西替利嗪片剂生物利用度的作用中国医科大学附属第一医院(110001徐亚杰林建阳盐酸西替利嚎(cetirizine dihydrochloride为第一代H1受体拮抗剂羟嗪(hydroxyzine在人体内活性代谢产物,为抗变态反应药,具有长效高选择的H1受体活性,临床证实具有显著抑制外源性组胺的作用,口服后具有良好的抗过敏和抗变态反应疗效。由于该药在水中的溶解度较低,其口服片剂中的药物溶出速度成为该药吸收的限速步骤,普通辅料制成的生物利用度较低。甲壳胺为来源于生物体的成分,口服对人体无毒副作用。低黏度、高脱乙酰度的甲壳胺具有较好的促进药物溶出作用。本实验的目的在于通

2、过对18名健康志愿者随机单剂量口服以甲壳胺为片剂辅料的盐酸西替利嗪片剂与市售盐酸西替利嗪片剂后的血药浓度的研究,验证甲壳胺作为无生理活性、无毒副作用的片剂辅料,可促进药物溶出,从而提高药物的生物利用度,为制剂新辅料的应用提供理论依据。盐酸西替利嗪的血药浓度测定方法较多,本实验采用高效液相色谱法(HPLC,具有灵敏度高、操作简便、速度快、重现性好的优点。1仪器与试剂1.1仪器:日本岛津高效液相色谱仪,包括U.一10AT泵、跹,D一10A紫外检测器、C-R6A积分仪。1.2药品及试剂:受试制剂:盐酸西替利嗪片(10lTIg催,061115,由辽宁药品新技术研究所研制;参比制剂:盐酸西替利嗪片(10

3、mg/粒,070119,由沈阳盛元药业生产。盐酸西替利嗪对照品(含量99.5%辽宁省药品检验所提供;内标为盐酸羟嗪沈阳药科大学药化教研室合成,纯度经质谱法(MS验证大于98.5%;乙腈为色谱纯;磷酸二氢铵为分析纯。2方法和结果2.1色谱条件色谱柱为Hypersil BDSCl8柱,5vm粒径,150mnlX5llLrn I.D.(大连依利特公司;流动相为乙腈一0.05moi/L磷酸二氢铵溶液(37:70,v/v;流速1.5mL/min;检测波长230nm;柱温:室温。2.2样品的处理方法2.2.1样品的预处理:用肝素抗凝的负压真空离心管取全血2lllL,上下震荡3次,以5000r/min离心5

4、min,分离上层血浆,立即置于冰箱,一20贮存。2.2.2血浆样品的处理:取血浆0.5mL,置10mL具塞试管中,精密加入内标溶液(10g/L盐酸羟嗪水溶液100tLL,加l mol/L枸橼酸盐缓冲液(pH6.01.0mL,混匀,加乙酸乙酯一二氯甲烷(30:1,v/v3IllL,密塞,涡流l min(800r/min,往复振荡10min,离心10min(3000r/min,分取281上层有机相,加0.25tool/L H3P04300止,涡流1min(800 r/min,往复振荡10min,离心10min(3000r/min,取水层,进样50止,记录色谱图。2.3血浆标准曲线的制备取空白血浆0

5、.5mL分别加入盐酸西替利嗪标准溶液,配制相当于浓度为25、50、100、500、1000、1500ng/mL 的血浆样品,按“2.2.2”项下进行血浆样品的处理,进样50 mL,记录色谱图;以待测物浓度为横坐标,待测物与内标物的峰面积比值为纵坐标,得回归方程Y=0.02482X+ 1.586×10,即为标准曲线,.=0.9986。本方法的线性范围为251500v.g/L,最低定量限为25飕/L。2.4方法专属性与检测限以分光光度计分别扫描盐酸西替利嗪的甲醇溶液和内标物盐酸羟嗪溶液,盐酸西替利嗪的最大吸收波长为230 rLrn,内标物在230i'fin处吸收度足够大,故选取的

6、检测波长为230nna。在此色谱条件下,西替利嗪的保留时间为6.4 min,内标物的保留时间为8.0min。二者分离度良好,满足分析测试要求。最低检测限为20耀/L。2.5精密度与重现性试验取空白血浆0.5mL,分别加入高、中、低3个浓度的盐酸西替利嗪标准系列溶液,分别相当于血浆样品浓度为50、500、1000旭/L的质量控制(QC样品,按“2.2.2”项下进行血浆样品的处理,6样本,分别测定3次,并与标准曲线同时进行,计算QC样品的测得浓度,与配制浓度对照,求得本法的精密度与重现性,见表l。提示在方法的实施过程中得到的数据准确可靠。衰1盐酸西替利嗪日内和El间的精密度和重现性(j±

7、s加样量实测量重现性日内精密度日间精密度篷尘篷尘整婴!塾2婴!苎250.050±40.97.46.8500.0493±361.35.47.31000.01007±58O.73.65.82.6回收率试验2.6.1绝对回收率:于空白血浆中加入一定量的盐酸西替利嗪系列标准液,配制成50、500、1000耀/L的系列标准血浆QC样本各3份,按“2.2.2”下方法处理并进样,测定样品含量6次,以实测值与理论值的比值计算绝对回收率。3种浓度的样品绝对回收率分别为93.5%,102.8%和96.9%。2.6.2提取回收率:于空白血浆中加入一定量的盐酸西替利嗪系列标准液,配制成5

8、0、500、1000vg/I.的系列标准血浆QC样本各3份,按“2.2.2”下方法处理并进样,记录色谱图,盐酸西替利嗪峰面积为Al;另取一定量的盐酸西替利嗪标准贮备液,配制成50、500、1000馏/L的系列标准溶液浓度各3份,以同体积进样,记录色谱图,西替利嗪峰面积为A2。以(Al/&×10096计算提取回收率。3种浓度的样品提取回收率分别为73.7%,74.8%和79.5%。内标物的提取回收率为80.1%。3生物等效性试验3.1志愿者及试验设计:18名健康男性受试者,平均(21±0.8岁;平均身高(175±5cm;平均体质量(69±5kg。试

9、验前,所有受试者经体检证实无胃肠道疾病,心、肝、肾功能正常,青霉素皮试为阴性。受试者在试验前1个月内停用一切药品,从开始进入试验后直到试验结束,禁烟酒、禁含咖啡因的饮料。对试验内容及可能出现的不良反应充分了解,并在试验前签署知情同意书。试验方法【l,2-采用单次剂量口服,自身对照随机两制剂、双周期、双交叉试验设计方法:即将18名受试者按体质量随机编号,随机分成2组,每组9名,分别给予受试制剂两替利嗪片(T和参比制剂西替利嗪片(R各20mg,以250mL温开水送服,服药后4h进食低油脂的标准中餐,服药后9h进食低油脂的标准晚餐,交叉给药时标准餐相同。二次试验间隔均定为1周。每次试验于服药前(O

10、h和服药后O.33、O.67、1、1.5、2、3、5、7、10、14、24、34h由前臂静脉取血3111L,置肝素抗凝管中摇匀,立即置离心机中3000r/min离心10rain,分离血浆置于一20冷冻保存至分析。经洗净期l周后交叉给药。3.2药时曲线:绘制18名健康志愿者单次口服受试制剂西替利嗪片(T和参比制剂西替利嗪片(R20mg后的平均血药浓度一时闻fHj线。由曲线可知,西替利嗪在健康人体内的药时变化规律符合一室模型。3.3数据处理:以梯形法求算受试制剂和参比制剂中西替利嚷的AUColo、AUCo。,TT。和q。采用实测值,以消除相血药浓度的对数与对应点时间的线性回归求算西替利嗪的体内消除

11、半衰期,结果表明受试制剂西替利嗪片、西替利嗪胶囊和参比药物在健康志愿者体内的处置均符合口服一级吸收一室开放模型,其主要药代动力学参数见表2。以沈阳市盛元药业产品西替利嗪片为参比制剂,辽宁药品新技术研究所研制西替利嗪片为受试制剂,求得西替利嗪片相对生物利用度为147。9%。表218名健康男性受试者单剂量171服20mg 西替利嗪的平均药代动力学参数(孟±s参数k tl尼凹.AUCo.-a.缱!坠垒b缓:!:坠!皤:h!:坠!西替利嗪片(T11277±2180.75±0.257.9±1.310846±l0681l259±1258参比制剂(

12、R889±1341.12±0.377.5±1.1749±1004,7636±1124 4讨论以后。将受试药和对照药的血药浓度一时间数据用3P87药代动力学程序处理后,得到二者的药代动力学参数,结果表明,正常男性受试者口服含甲壳胺为辅料的片剂和市售片后,药物为一级吸收,单室模型,两者T。,AUC差异有统计学意义(P<0.05,其他药代动力学参数基本致(P> 0.05。含甲壳胺为辅料的片剂与市售片相比,其生物利用度为147.9%,用方差分析法对两者的生物等效性进行评价,可见受试药与对照药的生物利用度有明显的差异,即甲壳胺可显著提高药物的

13、生物利用度。食物对药物的吸收影响较大,为了保证结果的可靠性,除了保证禁食12h外,给药后的进食时间应该安排在4h受试者应选男性,以避免女性因为生理周期造成不可预见的影响,干扰结果的测定。参考文献l The royd pharmaceuticalciety.Martindale:the extra pharmacqxmia(thirtyfirst edition.London:The publications departmerit of the royal pharmaeeutieal society,1996.2中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国药典:二部.北京:化学工业出版社,2000.(收稿日期:200710.30作者简介:徐亚杰,女,1965年11月生,副主任药师,中国医科大学附属第一医院。110001氯氢甘油滴耳液的制备及疗效观察中国医科大学附属第一医院(110001邢俊家用晖氯氢甘油滴耳液是我院研制的一种治疗外耳道炎、中耳炎等常见耳科疾病的外用制剂。处方以氯霉素、氢化可的松为主药,以甘油为溶