天然产物化学02-2__分离和鉴定

1、1第二节第二节分离精制和鉴定的分离精制和鉴定的方法与技术方法与技术2化学成分分离精制常用方法原理化学成分分离精制常用方法原理1、根据物质溶解度差别进行分离 2、根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离3、根据物质的吸附性差别进行分离4、根据物质分子大小差异进行分离5、根据物质解离程度不同进行分离3利用温度不同引起溶解度的改变利用温度不同引起溶解度的改变 结晶、重结晶结晶、重结晶待纯化物待纯化物A+A+杂质杂质B B、C C加加MeOHMeOH热溶热溶热滤热滤残渣残渣（C C）滤液滤液（A+BA+B）冷置析晶冷置析晶母液母液（B B）结晶结晶（A A）56 加另一种极性相差较大的溶剂加另一种极性

2、相差较大的溶剂混合溶剂极性混合溶剂极性改变改变部分物质沉淀析出部分物质沉淀析出 A A 水水/ /醇法：除去水提液中的水溶性杂质醇法：除去水提液中的水溶性杂质 B B 醇醇/ /水法：除去醇提液中的脂溶性杂质水法：除去醇提液中的脂溶性杂质 C C 醇醇/ /醚法（醇醚法（醇/ /丙酮法）：纯化皂苷丙酮法）：纯化皂苷改变混合溶剂极性改变混合溶剂极性7A A 水水/ /醇法醇法除去水提液中的水溶性杂质除去水提液中的水溶性杂质中药中药水提取液水提取液加数倍量加数倍量浓醇浓醇静置过夜静置过夜母液母液（目标成分）（目标成分）沉淀沉淀（水溶性杂质水溶性杂质）（如蛋白质、多糖、果胶、粘液质）（如蛋白质、多糖

3、、果胶、粘液质）8B B 醇醇/ /水法：除去醇提液中的脂溶性杂质水法：除去醇提液中的脂溶性杂质中药中药醇提取液醇提取液加数倍加数倍水水静置过夜静置过夜母液母液（目标成分）（目标成分）沉淀沉淀（脂溶性杂质脂溶性杂质）（如油脂、叶绿素等）（如油脂、叶绿素等）9C C 醇醇/ /醚法（醇醚法（醇/ /丙酮法）：纯化皂苷丙酮法）：纯化皂苷皂苷的皂苷的醇溶液醇溶液加数倍量加数倍量乙醚，乙醚，静置静置母液母液（脂溶液杂质）（脂溶液杂质）沉淀沉淀（皂苷皂苷）10酸、碱、两性成分酸、碱、两性成分 调节调节PHPH改变的分子存在状态改变的分子存在状态改变溶解度改变溶解度 调节调节pH解离型解离型/ /离子态离

4、子态游离型游离型/ /分子态分子态H H+ +BHBH+ +B BOHOH- -H H+ +A A- -HAHAOHOH- -脂溶性脂溶性水溶性水溶性11A A酸酸/ /碱法（酸提取碱沉淀法）：碱法（酸提取碱沉淀法）： 生物碱的提取、纯化生物碱的提取、纯化B B碱碱/ /酸法（碱提取酸沉淀法）：酸法（碱提取酸沉淀法）： 黄酮、蒽醌等酚性成分的提取、纯化黄酮、蒽醌等酚性成分的提取、纯化C. C. 调节调节PHPH至等电点，沉淀蛋白至等电点，沉淀蛋白 12A A酸酸/ /碱法（酸提取碱沉淀法）碱法（酸提取碱沉淀法） 生物碱的提取、纯化生物碱的提取、纯化H H+ +BHBH+ +B BOHOH- -

5、醇提物浸膏（醇提物浸膏（B）药渣药渣酸水提取液酸水提取液稀酸水提取稀酸水提取（ BH+ ）碱化碱化沉淀沉淀（B）碱水液碱水液（水溶性杂质）（水溶性杂质）（脂溶性杂质）（脂溶性杂质）13药材（药材（HA）药渣药渣碱水提取液碱水提取液碱水提取碱水提取（ A- ）酸化酸化沉淀沉淀（HA）酸水液酸水液（水溶性杂质）（水溶性杂质）（脂溶性杂质）（脂溶性杂质）B B碱碱/ /酸法（碱提取酸沉淀法）酸法（碱提取酸沉淀法） 黄酮、蒽醌等酚性成分的提取、纯化黄酮、蒽醌等酚性成分的提取、纯化H H+ +A A- -HAHAOHOH- -14沉淀法沉淀法 在中草药提取液中加入某些试剂使产生沉淀，以在中草药提取液中加

6、入某些试剂使产生沉淀，以获得有效成分或除去杂质的方法。获得有效成分或除去杂质的方法。 （1 1）铅盐沉淀法）铅盐沉淀法 （2 2）试剂沉淀法）试剂沉淀法 15 铅盐沉淀法铅盐沉淀法 铅盐沉淀法为分离某些中草药成分的经典方法之一。铅盐沉淀法为分离某些中草药成分的经典方法之一。 醋酸铅及碱式醋酸铅，能与多种化学成分生成难溶的铅盐醋酸铅及碱式醋酸铅，能与多种化学成分生成难溶的铅盐或络盐沉淀，故可利用这种性质使有效成分与杂质分离。或络盐沉淀，故可利用这种性质使有效成分与杂质分离。 中性醋酸铅可与酸性物质或某些酚性物质结合成不溶性铅中性醋酸铅可与酸性物质或某些酚性物质结合成不溶性铅盐。因此，常用以沉淀有

7、机酸、氨基酸、蛋白质、粘液质、盐。因此，常用以沉淀有机酸、氨基酸、蛋白质、粘液质、鞣质、树脂、酸性皂甙、部分黄酮等。鞣质、树脂、酸性皂甙、部分黄酮等。 与碱式醋酸铅产生不溶性铅盐或络合物的范围更广。与碱式醋酸铅产生不溶性铅盐或络合物的范围更广。16 试剂沉淀法试剂沉淀法 在生物碱盐的溶液中，加入某些生物碱沉淀试剂，则生物在生物碱盐的溶液中，加入某些生物碱沉淀试剂，则生物碱生成不溶性复盐而析出。水溶性生物碱难以用萃取法提碱生成不溶性复盐而析出。水溶性生物碱难以用萃取法提取分出，常加入雷氏铵盐使生成生物碱雷氏盐沉淀析出取分出，常加入雷氏铵盐使生成生物碱雷氏盐沉淀析出 用明胶、蛋白溶液沉淀鞣质；胆甾

8、醇也常用以沉淀洋地黄用明胶、蛋白溶液沉淀鞣质；胆甾醇也常用以沉淀洋地黄皂甙等。皂甙等。17182 2、根据物质在两相溶剂中的分配比、根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离不同进行分离 分配系数（分配系数（K K） 两种相互不能任意混溶的溶剂（如氯仿两种相互不能任意混溶的溶剂（如氯仿与水）如置分液漏斗中充分振摇，放置后即可分成两相。与水）如置分液漏斗中充分振摇，放置后即可分成两相。此时如果其中含有溶质，则溶质在两相溶剂中的分配比此时如果其中含有溶质，则溶质在两相溶剂中的分配比（K）在一定温度及压力下为一常数，可以下式表示：）在一定温度及压力下为一常数，可以下式表示：K=CU/CL K：分配系数

9、；：分配系数；CU：溶质在上相溶剂中的浓度；：溶质在上相溶剂中的浓度；CL：溶质：溶质在下相溶剂中的浓度。在下相溶剂中的浓度。19液液-液萃取法液萃取法逆流连续萃取法逆流连续萃取法逆流分配法（逆流分配法（CCD） 液滴逆流色谱法（液滴逆流色谱法（DCCC）高速逆流色谱法（高速逆流色谱法（HSCCC）气液分配色谱（气液分配色谱（GC或或GLC）液液-液分配色谱（液分配色谱（LC或或LLC）20液液- -液萃取法液萃取法 利用混合物中各成分在两种互不相溶的溶剂中分利用混合物中各成分在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的方法。配系数的不同而达到分离的方法。 萃取时如果各成分的分配系数相差越

10、大，分离效萃取时如果各成分的分配系数相差越大，分离效率越高。率越高。21系统溶剂萃取法：系统溶剂萃取法： 常用来粗分，是将总提物分散于水中，依次用常用来粗分，是将总提物分散于水中，依次用石油醚（或环己烷）、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇石油醚（或环己烷）、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别减压回收溶剂得到相应极性的成分。萃取，分别减压回收溶剂得到相应极性的成分。22 水提取液中的有效成分是亲脂性的物质，一般多水提取液中的有效成分是亲脂性的物质，一般多用亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿或乙醚进行两相用亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿或乙醚进行两相萃取；有效成分是偏于亲水性的物质，需用弱亲萃取；有效成分是偏于亲水性的物

11、质，需用弱亲脂性的溶剂，例如乙酸乙酯、正丁醇等。脂性的溶剂，例如乙酸乙酯、正丁醇等。 提取黄酮类成分多用乙酸乙脂和水的两相萃取。提取黄酮类成分多用乙酸乙脂和水的两相萃取。 提取亲水性强的皂甙则多选用正丁醇、异戊醇和提取亲水性强的皂甙则多选用正丁醇、异戊醇和水作两相萃取。水作两相萃取。23极性极性 成分类型成分类型 适宜溶剂适宜溶剂强亲脂性强亲脂性 挥发油、脂肪油、苷元挥发油、脂肪油、苷元 石油醚石油醚 脂溶性色素、甾醇脂溶性色素、甾醇 己烷己烷亲脂性亲脂性 苷元、生物碱、树脂苷元、生物碱、树脂 乙醚乙醚 醛、醇、酯、有机酸醛、醇、酯、有机酸 氯仿氯仿 小小 强心苷强心苷 氯仿氯仿-乙醇（乙醇（

12、2：1）中极性中极性 中中 黄酮苷黄酮苷 乙酸乙酯乙酸乙酯 大大 皂苷、蒽醌苷皂苷、蒽醌苷 正丁醇正丁醇亲水性亲水性 极性很大的苷、糖类极性很大的苷、糖类 丙酮丙酮 氨基酸、某些生物碱盐氨基酸、某些生物碱盐 甲醇、乙醇甲醇、乙醇强亲水性强亲水性 蛋白质、粘液质、氨基酸蛋白质、粘液质、氨基酸 水水 果胶、糖类、无机盐类果胶、糖类、无机盐类 24逆流连续萃取法逆流连续萃取法 利用两相溶剂比重不同可自然分层和分散液利用两相溶剂比重不同可自然分层和分散液滴穿过连续相溶剂时发生传质的原理，用一根或滴穿过连续相溶剂时发生传质的原理，用一根或数根萃取管制成逆流连续萃取装置。管内的瓷环，数根萃取管制成逆流连续

13、萃取装置。管内的瓷环，增加液滴上升的路程和在连续相中停留的时间，增加液滴上升的路程和在连续相中停留的时间，更重要的是上升的液滴因撞击填充物而被分散，更重要的是上升的液滴因撞击填充物而被分散，扩大了两相溶剂萃取的接触面积，使更萃取完全。扩大了两相溶剂萃取的接触面积，使更萃取完全。克服了分液漏斗多次萃取和易乳化的麻烦。克服了分液漏斗多次萃取和易乳化的麻烦。25一、简述一、简述 气液分配色谱气液分配色谱 以惰性气体为流动相、以固定液作为固定相的以惰性气体为流动相、以固定液作为固定相的色谱法称为气相色谱法（色谱法称为气相色谱法（GC）。气液色谱的）。气液色谱的固定相是在化学惰性的固体颗粒表面上，涂一固

14、定相是在化学惰性的固体颗粒表面上，涂一层高沸点有机化合物的液膜或直接将高沸点有层高沸点有机化合物的液膜或直接将高沸点有机化合物均匀地涂敷在毛细管的内壁，并形成机化合物均匀地涂敷在毛细管的内壁，并形成一层均匀的液膜。一层均匀的液膜。26 在气液色谱中，当载气携带被测样品进入色谱柱，气相在气液色谱中，当载气携带被测样品进入色谱柱，气相中的被测组分就溶解到固定液中。载气连续流经色谱柱，中的被测组分就溶解到固定液中。载气连续流经色谱柱，溶解在固定液中的组分会从固定液中挥发到气相中，随溶解在固定液中的组分会从固定液中挥发到气相中，随着载气的流动，挥发到气相中的组分又会重新溶解到前着载气的流动，挥发到气相

15、中的组分又会重新溶解到前面的固定液中。这样反复多次溶解、挥发、再溶解、再面的固定液中。这样反复多次溶解、挥发、再溶解、再挥发。由于各组分在固定液中的溶解度不同，溶解度大挥发。由于各组分在固定液中的溶解度不同，溶解度大的组分较难挥发停留在色谱柱中的时间就长些；而溶解的组分较难挥发停留在色谱柱中的时间就长些；而溶解度小的组分易挥发，停留在色谱柱中的时间就短些，经度小的组分易挥发，停留在色谱柱中的时间就短些，经过一定时间后，各组分就彼此分离并依次流出色谱柱。过一定时间后，各组分就彼此分离并依次流出色谱柱。27气相色谱法的优点气相色谱法的优点 分离效率高：是指它对性质极为相似的组分有分离效率高：是指它

16、对性质极为相似的组分有很强的分离能力。很强的分离能力。 灵敏度高：使用高灵敏度的检测器可检测出痕灵敏度高：使用高灵敏度的检测器可检测出痕量组分。量组分。 分析速度快：相对化学分析而言，完成多组分分析速度快：相对化学分析而言，完成多组分分析仅需几分钟至几十分钟。分析仅需几分钟至几十分钟。 分析需要样品量很少。分析需要样品量很少。28高效液相色谱高效液相色谱（HPLC） HPLC是在经典液相色谱基础上引入气相色谱的是在经典液相色谱基础上引入气相色谱的塔板理论，并采用了高压输液泵、高效固定相塔板理论，并采用了高压输液泵、高效固定相和高灵敏度的检测器，具有分析速度快、分离和高灵敏度的检测器，具有分析速

17、度快、分离效率高和操作自动化特点的一种色谱技术。效率高和操作自动化特点的一种色谱技术。29 HPLC特别适合高沸点、大分子和热稳定性差的特别适合高沸点、大分子和热稳定性差的化合物的分离分析。化合物的分离分析。中药的成分非常复杂，以中药的成分非常复杂，以往常用的薄层色谱等方法因其精密度、准确度、往常用的薄层色谱等方法因其精密度、准确度、灵敏度、重现性差而不能满足中药现代化发展灵敏度、重现性差而不能满足中药现代化发展的需要。高效液相色谱正是以其稳定、可靠、的需要。高效液相色谱正是以其稳定、可靠、高效的特点成为中药研究的最重要的分析方法。高效的特点成为中药研究的最重要的分析方法。常用于中药质量的控制

18、、天然药物化学成分的常用于中药质量的控制、天然药物化学成分的分离及分析测定等。分离及分析测定等。303132333435 硅胶和氧化铝为极性吸附剂，有以下特点：硅胶和氧化铝为极性吸附剂，有以下特点： 对极性物质具有较强的亲和能力。故同为溶质，对极性物质具有较强的亲和能力。故同为溶质，极性强者将被优先吸附极性强者将被优先吸附。 溶剂极性越弱，则吸附剂对溶质将表现出越强溶剂极性越弱，则吸附剂对溶质将表现出越强的吸附能力。溶剂极性增强，则吸附剂对溶质的的吸附能力。溶剂极性增强，则吸附剂对溶质的吸附能力即随之减弱。吸附能力即随之减弱。 溶质即使被硅胶、氧化铝吸附，但一旦加入极溶质即使被硅胶、氧化铝吸附

19、，但一旦加入极性较强的溶剂时，又可被后者置换洗脱下来。性较强的溶剂时，又可被后者置换洗脱下来。 36 活性炭因为是非极性吸附剂，故与硅胶、氧化铝活性炭因为是非极性吸附剂，故与硅胶、氧化铝相反，对非极性物质具有较强的亲和能力，在水相反，对非极性物质具有较强的亲和能力，在水中对该类物质表现出强的吸附能力。中对该类物质表现出强的吸附能力。 溶剂极性降低，则活性炭对该类物质的吸附能力溶剂极性降低，则活性炭对该类物质的吸附能力也随之降低。故从活性炭上洗脱被吸附物质时，也随之降低。故从活性炭上洗脱被吸附物质时，洗脱溶剂的洗脱能力将随溶剂极性的减弱而增强。洗脱溶剂的洗脱能力将随溶剂极性的减弱而增强。3738

20、39被分离物质的性质被分离物质的性质 被分离的物质与吸附剂，洗脱剂共同构成吸附层被分离的物质与吸附剂，洗脱剂共同构成吸附层析中的三个要素，彼此紧密相连。在指定的吸附析中的三个要素，彼此紧密相连。在指定的吸附剂与洗脱剂的条件下，各个成分的分离情况，直剂与洗脱剂的条件下，各个成分的分离情况，直接与被分离物质的结构与性质有关。对极性吸附接与被分离物质的结构与性质有关。对极性吸附剂而言，成分的极性大，吸附性强剂而言，成分的极性大，吸附性强。404142吸附簿层色谱吸附簿层色谱 薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法。薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法。一般将吸附剂撒布到平面如玻璃片上，形成一薄

21、一般将吸附剂撒布到平面如玻璃片上，形成一薄层进行层析时，即称薄层层析。层进行层析时，即称薄层层析。 43 薄层层析法应用薄层层析法应用 化学成分的预试化学成分的预试 化学成分的鉴定化学成分的鉴定 探索柱层分离的条件探索柱层分离的条件4445制备薄层色谱（制备薄层色谱（PTLCPTLC） 一种是流动相靠毛细管作用力流经固定相（传统一种是流动相靠毛细管作用力流经固定相（传统的制备型薄层色谱），另一些方法是流动相靠外的制备型薄层色谱），另一些方法是流动相靠外力强制流动，如离心薄层色谱和加压薄层色谱。力强制流动，如离心薄层色谱和加压薄层色谱。 46制备薄层色谱（制备薄层色谱（PTLCPTLC）吸附剂吸

22、附剂 硅胶是最常用的吸附剂。上样量与吸附剂的厚度有关。 上样上样 上样前先用样品溶于少量溶剂，样品浓度应在5%-10%左右。 展开剂的选择及展开展开剂的选择及展开 在进行PTLC之前应用分析型TLC预试验来确定展开剂。 被分离物质的回收被分离物质的回收 47吸附柱色谱（柱层析）吸附柱色谱（柱层析）48（1 1）吸附剂的用量）吸附剂的用量 一般为样品量的一般为样品量的3060倍。柱色谱用的硅胶及氧化铝通倍。柱色谱用的硅胶及氧化铝通常以常以100200目或目或200 300目为宜，或甚至直接采用薄目为宜，或甚至直接采用薄层色谱用规格，其分离效果可以大大提高。层色谱用规格，其分离效果可以大大提高。（

23、2 2）洗脱剂的选择，以）洗脱剂的选择，以TLC摸索洗脱条件装柱，摸索洗脱条件装柱，湿法装柱（以起始洗脱剂拌匀装柱）或干法装柱湿法装柱（以起始洗脱剂拌匀装柱）或干法装柱49（3 3）样品的预处理）样品的预处理 能直接溶于洗脱剂的样品用适量洗脱剂溶解样品，尽可能能直接溶于洗脱剂的样品用适量洗脱剂溶解样品，尽可能少，以利样品在吸附剂柱上形成狭窄的原始谱带。少，以利样品在吸附剂柱上形成狭窄的原始谱带。 不能溶解于洗脱剂的样品，则将用能使之溶解的溶剂溶解不能溶解于洗脱剂的样品，则将用能使之溶解的溶剂溶解后，再用少量吸附剂拌匀，并减压抽干溶剂或在后，再用少量吸附剂拌匀，并减压抽干溶剂或在60下加下加热挥

24、尽溶剂，置真空干燥器中减压干燥或直接减压抽干、热挥尽溶剂，置真空干燥器中减压干燥或直接减压抽干、研粉后再小心铺在吸附剂柱上。研粉后再小心铺在吸附剂柱上。50（4 4）洗脱用溶剂的极性宜逐步增加，跳跃不能太大。）洗脱用溶剂的极性宜逐步增加，跳跃不能太大。 实践中多用混合溶剂，并通过巧妙调节比例以改变极性，达实践中多用混合溶剂，并通过巧妙调节比例以改变极性，达到梯度洗脱分离物质的目的。一般混合溶剂中强极性溶剂的到梯度洗脱分离物质的目的。一般混合溶剂中强极性溶剂的影响比较突出，故不可随意将极性差别很大的两种溶剂组合影响比较突出，故不可随意将极性差别很大的两种溶剂组合在一起使用。在一起使用。5152（

25、5 5）为避免发生化学吸附，酸性物质宜用硅胶、碱）为避免发生化学吸附，酸性物质宜用硅胶、碱性物质则宜用氧化铝进行分离。性物质则宜用氧化铝进行分离。 硅胶、氧化铝用适当方法处理成中性时，情况会有所缓解。硅胶、氧化铝用适当方法处理成中性时，情况会有所缓解。通常在分离酸性（或碱性）物质时，洗脱溶剂中分别加入通常在分离酸性（或碱性）物质时，洗脱溶剂中分别加入适量醋酸（或氨、吡啶、二乙胺），常可收到防止拖尾、适量醋酸（或氨、吡啶、二乙胺），常可收到防止拖尾、促进分离的效果。促进分离的效果。5354555657聚酰胺色谱的应用聚酰胺色谱的应用 聚酰胺对一般酚类、黄酮类化合物的吸附是可逆的（鞣质聚酰胺对一般

26、酚类、黄酮类化合物的吸附是可逆的（鞣质除外），分离效果好，加以吸附容量又大，故聚酰胺色谱除外），分离效果好，加以吸附容量又大，故聚酰胺色谱特别适合于该类化合物的制备分离。特别适合于该类化合物的制备分离。 对生物碱、萜类、甾体、糖类、氨基酸等其它极性与非极对生物碱、萜类、甾体、糖类、氨基酸等其它极性与非极性化合物的分离也有广泛的用途。性化合物的分离也有广泛的用途。 因为对鞣质的吸附特强，近乎不可逆，故用于植物粗提取因为对鞣质的吸附特强，近乎不可逆，故用于植物粗提取物的脱鞣质处理特别适宜。物的脱鞣质处理特别适宜。 聚酰胺色谱也有薄层色谱和柱色谱两种方式。聚酰胺色谱也有薄层色谱和柱色谱两种方式。 5

27、85960大孔吸附树脂分离条件的确立大孔吸附树脂分离条件的确立树脂的选择树脂的选择 首先，要根据被分离化合物的分子体积的大小通首先，要根据被分离化合物的分子体积的大小通过预实验确定适当孔径的树脂。过预实验确定适当孔径的树脂。 其次，要根据分子中是否含有酚羟基、羧基或碱其次，要根据分子中是否含有酚羟基、羧基或碱性氮原子来确定树脂的型号和分离条件。性氮原子来确定树脂的型号和分离条件。6162影响分离的因素：影响分离的因素： 分子极性的大小：分子极性的大小： 极性较大的化合物适宜于在中极性的树极性较大的化合物适宜于在中极性的树脂上分离，而极性较小的化合物则适于在脂上分离，而极性较小的化合物则适于在非

28、极性树脂上分离。非极性树脂上分离。 对于中极性树脂来说，被分离化合物分对于中极性树脂来说，被分离化合物分子上能形成氢键的基团越多，吸附力越强。子上能形成氢键的基团越多，吸附力越强。 63 分子体积的影响：分子体积的影响： 对于非极性大孔吸附树脂而言，化合物对于非极性大孔吸附树脂而言，化合物体积越大，吸附力越强，这与大体积分子体积越大，吸附力越强，这与大体积分子疏水性强有关。疏水性强有关。 64 pH： 一般酸性化合物在适当酸性溶液中可被一般酸性化合物在适当酸性溶液中可被充分吸附，碱性化合物则在碱性条件下易充分吸附，碱性化合物则在碱性条件下易被吸附，中性化合物在中性情况下吸附较被吸附，中性化合物

29、在中性情况下吸附较好。好。65大孔吸附树脂的处理大孔吸附树脂的处理 市售大孔吸附树脂一般含有未聚合的单体、致孔市售大孔吸附树脂一般含有未聚合的单体、致孔剂（多为长碳链的脂肪醇类）、分散剂和防腐剂剂（多为长碳链的脂肪醇类）、分散剂和防腐剂等杂质，使用前必须经过处理。等杂质，使用前必须经过处理。 处理方法是：采用乙醇湿法装柱，随用乙醇在柱处理方法是：采用乙醇湿法装柱，随用乙醇在柱上作流动清洗，并不时检查流出的乙醇，直至流上作流动清洗，并不时检查流出的乙醇，直至流出的乙醇液与水混合不呈现白色乳浊现象即可，出的乙醇液与水混合不呈现白色乳浊现象即可，然后用大量蒸馏水洗去乙醇。然后用大量蒸馏水洗去乙醇。6

30、6大孔吸附树脂柱色谱大孔吸附树脂柱色谱 样品一般用水溶液上柱。洗脱时根据吸附作用强弱样品一般用水溶液上柱。洗脱时根据吸附作用强弱不同选用不同浓度的甲醇、乙醇等含水溶剂，直至不同选用不同浓度的甲醇、乙醇等含水溶剂，直至纯的甲醇、乙醇，乃至丙酮、乙酸乙酯等。对非极纯的甲醇、乙醇，乃至丙酮、乙酸乙酯等。对非极性大孔吸附树脂，洗脱溶剂极性越小，洗脱能力越性大孔吸附树脂，洗脱溶剂极性越小，洗脱能力越强。对于中等极性的大孔吸附树脂和极性较大的化强。对于中等极性的大孔吸附树脂和极性较大的化合物来说，则以用极性较大的溶剂为宜。合物来说，则以用极性较大的溶剂为宜。 67 树脂柱的清冼和再生：用乙醇、丙酮、异丙醇

31、、树脂柱的清冼和再生：用乙醇、丙酮、异丙醇、2-5%2-5%盐酸、盐酸、2-5%2-5%氢氧化钠渗漉法洗脱或回流。氢氧化钠渗漉法洗脱或回流。 洗脱顺序：一般被分离物质极性越小，越先被洗脱顺序：一般被分离物质极性越小，越先被洗脱下来，极性越大，越后洗脱下来。洗脱下来，极性越大，越后洗脱下来。68大孔吸附树脂在中药生产中的应用大孔吸附树脂在中药生产中的应用（1 1）活性成分的提取分离）活性成分的提取分离 如皂甙（人参总皂甙、如皂甙（人参总皂甙、蒺藜总皂昔）、黄酮（葛根总黄酮、山楂总黄酮、蒺藜总皂昔）、黄酮（葛根总黄酮、山楂总黄酮、淫羊藿总黄酮）、内酯、生物碱等化合物；淫羊藿总黄酮）、内酯、生物碱等

32、化合物；（2 2）质量标准制定）质量标准制定 除去干扰成分。除去干扰成分。 69大孔吸附树脂大孔吸附树脂在中药生产中应用的优点在中药生产中应用的优点缩小剂量，提高制剂的内在质量缩小剂量，提高制剂的内在质量 减小产品的吸湿性减小产品的吸湿性有效去除重金属有效去除重金属7071727374凝胶过滤法分离原理 葡聚糖凝胶在水中膨胀成球形颗粒，具有三维空间的网状葡聚糖凝胶在水中膨胀成球形颗粒，具有三维空间的网状结构。由于凝胶网孔半径的限制，大分子将不能渗入凝胶结构。由于凝胶网孔半径的限制，大分子将不能渗入凝胶颗粒内部（即被排阻在凝胶粒子外部），故在颗粒间隙移颗粒内部（即被排阻在凝胶粒子外部），故在颗粒

33、间隙移动，并随溶剂一起从柱底先行流出；小分子因可自由渗入动，并随溶剂一起从柱底先行流出；小分子因可自由渗入并扩散到凝胶颗粒内部，故通过色谱柱阻阻力增大、流速并扩散到凝胶颗粒内部，故通过色谱柱阻阻力增大、流速边缓，将较晚流出。边缓，将较晚流出。 样品混合物中各个成分因分子大小各异，渗入至凝胶颗粒样品混合物中各个成分因分子大小各异，渗入至凝胶颗粒内部的程度也不尽相同，故在经历一段时间流动并达到动内部的程度也不尽相同，故在经历一段时间流动并达到动态平衡后，即按分子由大到小顺序先后流出并得到分离。态平衡后，即按分子由大到小顺序先后流出并得到分离。 7576 葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶 由平均分子量一定的葡聚

34、糖及交联剂交联聚合而成。由平均分子量一定的葡聚糖及交联剂交联聚合而成。 凝胶颗粒网孔大小取决于交联剂的用量及反应条件。交联凝胶颗粒网孔大小取决于交联剂的用量及反应条件。交联剂用量越多，即交联度越高，则网孔越紧密，孔径越小，剂用量越多，即交联度越高，则网孔越紧密，孔径越小，吸水膨胀越小；交联度越低，则网孔越稀疏，孔径越大，吸水膨胀越小；交联度越低，则网孔越稀疏，孔径越大，吸水膨胀也越大。吸水膨胀也越大。 商品型号即按交联度大小分类，并以吸水量多少表示。以商品型号即按交联度大小分类，并以吸水量多少表示。以Sephadex G-25为例，为例，G为凝胶（为凝胶（Gel），后附数字），后附数字=吸水吸

35、水量量10，故，故G-25示该葡聚糖凝胶吸水量为示该葡聚糖凝胶吸水量为2.5ml/g。 Sephadex G型只适用于在水中应用，不同规格适合不同分型只适用于在水中应用，不同规格适合不同分子量的物质。子量的物质。77 羟丙基葡聚糖凝胶羟丙基葡聚糖凝胶 为为Sephadex G经羟丙基化处理后得到的产物。其分子中的经羟丙基化处理后得到的产物。其分子中的葡萄糖部分与羟丙基以醚键形式结合。葡萄糖部分与羟丙基以醚键形式结合。 与与Sephadex G比较，比较，Sephadex HL-20分子中分子中-OH基总数虽基总数虽无改变，但碳原子所占比例却相对增加。因此与无改变，但碳原子所占比例却相对增加。因

36、此与Sephadex G仅具亲水性不同，不仅可在水中应用，也可在极性有机仅具亲水性不同，不仅可在水中应用，也可在极性有机溶剂或它们与水组成的混合溶剂中膨润使用。溶剂或它们与水组成的混合溶剂中膨润使用。 Sephadex LH-20除保留有除保留有Sephadex G-25原有的分子筛特原有的分子筛特性，可按分子量大小分离物质外，在由极性与非极性溶剂性，可按分子量大小分离物质外，在由极性与非极性溶剂组成的混合溶剂中常常起到反相分配色谱的效果，适用于组成的混合溶剂中常常起到反相分配色谱的效果，适用于不同类型有机化合物的分离。不同类型有机化合物的分离。78超滤法超滤法 超滤法是现代分离技术领域中先进

37、的技术之一。超滤法是现代分离技术领域中先进的技术之一。可以在原生物体系环境下实现物质分离，高效浓可以在原生物体系环境下实现物质分离，高效浓缩富积产物，有效去除杂质。缩富积产物，有效去除杂质。79超滤法分离的原理超滤法分离的原理 超滤是一种以压力为驱动力，利用超滤膜的筛分作用，根超滤是一种以压力为驱动力，利用超滤膜的筛分作用，根据相对分子质量的不同来进行分离的膜技术。据相对分子质量的不同来进行分离的膜技术。 超滤膜的孔径通常在超滤膜的孔径通常在1300nm之间，选用不同孔径的超滤之间，选用不同孔径的超滤膜，可以将相对分子质量在几百到几十万之间的物质进行膜，可以将相对分子质量在几百到几十万之间的物

38、质进行分离。分离。 待分离组分的大小一般要相差待分离组分的大小一般要相差10倍以上。倍以上。80超滤膜的选择超滤膜的选择1、膜孔径（、膜孔径（截留分子量）的选择截留分子量）的选择 膜的孔径或截留分子量的选择虽然主要是根据被分离物膜的孔径或截留分子量的选择虽然主要是根据被分离物的相对分子质量。的相对分子质量。 由于超滤膜具有一定的孔径分布，加之中药提取液的粘由于超滤膜具有一定的孔径分布，加之中药提取液的粘度较大，所含高分子胶体物质较多，膜污染现象较严重。度较大，所含高分子胶体物质较多，膜污染现象较严重。因此，膜的孔径或截留分子量应稍大一些。因此，膜的孔径或截留分子量应稍大一些。812、膜材质的选

39、择膜材质的选择 膜表面是液体和膜相互作用的界面，溶质和膜之间有静电膜表面是液体和膜相互作用的界面，溶质和膜之间有静电相互作用或电荷转移反应，膜表面的极性、溶液的相互作用或电荷转移反应，膜表面的极性、溶液的pHpH值等值等均会影响膜的分离效率。均会影响膜的分离效率。 中药成分中胶质等粘性物质的含量很高，膜的污染现象较中药成分中胶质等粘性物质的含量很高，膜的污染现象较为严重。因此，最好采用抗污性较好的膜材料，如聚丙烯为严重。因此，最好采用抗污性较好的膜材料，如聚丙烯腈、磺化聚砜膜等。腈、磺化聚砜膜等。82超滤法的特点超滤法的特点 选择性高，分离效率高选择性高，分离效率高 减少工序，缩短生产周期，节

40、约原料，降低成本减少工序，缩短生产周期，节约原料，降低成本 物质不发生相变，常温操作物质不发生相变，常温操作 去杂质效果好去杂质效果好 除热原效果好除热原效果好 除菌效果好除菌效果好83超滤膜分离技术应用超滤膜分离技术应用膜分离做为一种高效、节能、无污染的新型分膜分离做为一种高效、节能、无污染的新型分离技术，在日本已应用到离技术，在日本已应用到“汉方药汉方药”的生产中；的生产中；国内同仁堂的药酒生产也采用了该技术。此外，国内同仁堂的药酒生产也采用了该技术。此外，还用于某些中药注射剂的研究开发和生产。还用于某些中药注射剂的研究开发和生产。超滤膜分离技术在医药领域的应用曾被列为国超滤膜分离技术在医

41、药领域的应用曾被列为国家家“八五八五”重点科技项目。重点科技项目。84中药有效部位和有效成分的分离纯化中药有效部位和有效成分的分离纯化 浓缩，提高药效成分浓度，减少剂量浓缩，提高药效成分浓度，减少剂量 制备中药注射剂、制备中药口服液等制备中药注射剂、制备中药口服液等 有机溶剂回收有机溶剂回收85透析法透析法 透析法是膜过滤法中的一种。透析法是膜过滤法中的一种。原理：原理：利用小分子物质在溶液中可通过半透膜、利用小分子物质在溶液中可通过半透膜、而大分子物质不能透过半透膜的性质，以达到分而大分子物质不能透过半透膜的性质，以达到分离的目的，本质上是一种分子筛作用。离的目的，本质上是一种分子筛作用。8

42、6 应用：应用：对于生物大分子，一般可以通过透析法进对于生物大分子，一般可以通过透析法进行浓缩和精制（如药用酶的精制）。行浓缩和精制（如药用酶的精制）。分离和纯化皂苷、蛋白质、多肽、多糖等大分子分离和纯化皂苷、蛋白质、多肽、多糖等大分子物质，可将其留在半透膜内，而将如无机盐、单物质，可将其留在半透膜内，而将如无机盐、单糖、双糖等小分子的物质透过半透膜，进入膜外糖、双糖等小分子的物质透过半透膜，进入膜外的溶液中，而加以分离精制。的溶液中，而加以分离精制。 875 5、根据物质离解程度不同进行分离、根据物质离解程度不同进行分离 离子交换法离子交换法 离子交换树脂为固定相，用水或含水溶剂装柱离子交换

43、树脂为固定相，用水或含水溶剂装柱 含水流动相通过树脂含水流动相通过树脂 可交换离子与树脂上的交换基团交换，吸附到树脂可交换离子与树脂上的交换基团交换，吸附到树脂上上 中性及无交换离子的成分流出中性及无交换离子的成分流出 将吸附到柱上的成分洗脱下来将吸附到柱上的成分洗脱下来88离子交换树脂的种类离子交换树脂的种类 阳离子交换树脂：强酸性（阳离子交换树脂：强酸性（-SO-SO3 3-H-H+ +） 弱酸性（弱酸性（-COO-H-COO-H+ +） 阴离子交换树脂：强碱性（阴离子交换树脂：强碱性（-N+-N+（CHCH3 3）3 3ClCl- -） 弱碱性（弱碱性（-NH-NH2 2，-NH-NH-，-N=-N=） 89离子交换树脂的应用离子交换树脂的应用 不同电荷离子的分离不同电荷离子的分离 如水提液中酸性、碱性、两性化合物的分离如水提液中酸性、碱性、两性化合物的分离 相同电荷但解离程度不同离子的分离相同电荷但解离程度不同离子的分离 如碱性不同的生物碱的分离如碱性不同的生物碱的分离 9091NOOCH3COCHPhCH2OHNOCH3CO CHPhCH2OHN+OH-OOCH3OCH3 碱性碱性 碱性不同的生物碱的分离碱性不同的生物碱的分离929394未知化合物结构鉴定流程未知化合物结构鉴定流程1、初步推断化合物类型