学习情境2微生物的接种、分离与培养及技术子学习情境2.1玻璃器皿的清洗包扎及灭菌

1、 学习情境学习情境2 2 微生物的接种、分离与培养及技术微生物的接种、分离与培养及技术子学习情境子学习情境2.1 2.1 玻璃器皿的清洗包扎及灭菌玻璃器皿的清洗包扎及灭菌 一、目的要求一、目的要求 1 1、了解玻璃器皿的清洗、棉塞制作、移液管和培养皿的、了解玻璃器皿的清洗、棉塞制作、移液管和培养皿的包扎方法；包扎方法；2 2、掌握干燥灭菌、湿热灭菌的原理和方法。、掌握干燥灭菌、湿热灭菌的原理和方法。二、基本原理二、基本原理 实验室中使用的玻璃器皿简介实验室中使用的玻璃器皿简介 微生物学实验所用的玻璃器皿，大多要进行消毒、灭菌微生物学实验所用的玻璃器皿，大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物，因此

2、对其质量、洗涤和包装方法均有一定和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。玻璃器皿的质量一般要求的要求。玻璃器皿的质量一般要求硬质玻璃硬质玻璃，才能承受高温和，才能承受高温和短暂灼烧而不致破坏；玻璃器皿的短暂灼烧而不致破坏；玻璃器皿的游离碱含量要少游离碱含量要少，否则会影，否则会影响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的性状和包装方法的要求性状和包装方法的要求，以，以能防止污染杂菌为准；能防止污染杂菌为准；洗涤洗涤玻璃器皿的方法不当也会影响实验玻璃器皿的方法不当也会影响实验的结果。目前微生物学实验室中，有些玻璃器皿（如培养皿、的结果。目前微生物学实验室中

3、，有些玻璃器皿（如培养皿、吸管等）已被吸管等）已被一次性塑料制品一次性塑料制品所代替，但玻璃器皿仍是重要的所代替，但玻璃器皿仍是重要的实验室用具。实验室用具。 清洗清洗包装包装灭菌灭菌洗涤剂、试管刷等洗涤剂、试管刷等报纸、牛皮纸、专用塑料袋或器皿等报纸、牛皮纸、专用塑料袋或器皿等干热灭菌干热灭菌 湿热灭菌湿热灭菌 紫外灭菌紫外灭菌 过滤过滤玻璃器皿的清洗玻璃器皿的清洗器皿包扎器皿包扎 实验室常用的灭菌方法有干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法、实验室常用的灭菌方法有干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法、紫外线照射法和微孔滤膜法等。紫外线照射法和微孔滤膜法等。干热灭菌和高压蒸汽灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋干热灭

4、菌和高压蒸汽灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。白质凝固变性而达到灭菌的目的。紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和成和DNADNA链的交联，从而抑制了链的交联，从而抑制了DNADNA的复制。的复制。过滤除菌是通过机械作用滤去液体或气体中细菌的方法。过滤除菌是通过机械作用滤去液体或气体中细菌的方法。 （三）灭菌的常用方法和基本原理（三）灭菌的常用方法和基本原理 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，

5、然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，波长为紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，波长为200300nm200300nm的紫外线都有杀的紫外线都有杀菌能力，其中以菌能力，其中以260nm260nm的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机制主要是因为它诱导菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了了胸腺嘧啶二聚体胸腺嘧啶二聚体的形成，从而抑制了的形成

6、，从而抑制了DNADNA的复制。另一方面，由于辐射的复制。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成能使空气中的氧电离成OO，再使，再使O O2 2氧化生成臭氧（氧化生成臭氧（O O3 3）或使水（）或使水（H H2 2O O）氧）氧化生成过氧化氢（化生成过氧化氢（H H2 2O O2 2），），O O3 3和和H H2 2O O2 2均有杀菌作用。紫外线穿透力不大，均有杀菌作用。紫外线穿透力不大，所以，所以，只适用于无菌室、接种箱、手术室内的空气及物体表面的灭菌只适用于无菌室、接种箱、手术室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过紫外线灯距照射物以不超过1 12m2m为宜。为宜。 此外

7、，为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外线灯以此外，为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外线灯以前，可在无菌室内（或接种箱内）喷洒前，可在无菌室内（或接种箱内）喷洒3535的石炭酸的石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内的桌面，凳子可方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内的桌面，凳子可用用2323的来苏尔擦洗，然后再开紫外线灯照射，即可的来苏尔擦洗，然后再开紫外线灯照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目的。增强杀菌效果，达到灭菌目的。结合理论知识结合理论知识和生活，在使和生活，在使用紫外灭菌时用紫外灭菌时你应该注意什你应该注意什么？么？三、实验器材三、实验器材 仪器和其他用品：试管、三角烧瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、仪器和其他用品：试管、三角烧瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基分装