肌钙蛋白和肌红蛋白测定试剂盒介绍

1、肌钙蛋白和肌红蛋白肌钙蛋白和肌红蛋白测定试剂盒介绍测定试剂盒介绍 胶乳增强免疫比浊法 太原川至生物工程有限公司太原川至生物工程有限公司技术背景技术背景n心脑血管病现已成为我国人口死亡的主要原因，名列第一位，心血管疾病特别是心肌损伤的发病率逐年增加。因此早期进行诊断和积极的治疗，对挽救病人的生命有重要意义。技术技术背景nWHO 1979年制订的AMI的诊断标准 n1.有剧烈而持久的胸痛史：2.明确的心电图改变，包括ST段抬高和异常的Q波出现：3.系列酶的水平的改变，早期浓度升高，随后恢复正常浓度。 技术背景技术背景n随着医学科学研究的进展，心肌损伤的血液生化标志物已从早先的以酶活性酶活性为主的检

2、测发展到目前的以蛋白质质量浓度蛋白质质量浓度为主的检测，包括多种标志物 。nAST、LD及其同工酶以及-羟丁酸脱氢酶等以酶活性为主的检测项目在诊断心脏疾病时已逐渐少用以至不再应用。技术背景技术背景n25%的AMI病人发病早期没有典型的临床症状；n约30%的AMI病人缺乏心电图（ECG）的特异改变；nCK-MB的敏感性和特异性也不尽如人意。 心肌损伤理想的生化标志物心肌损伤理想的生化标志物n在心肌细胞中的浓度很高；而在其它组织中的浓度很低。特异性强特异性强 n在心肌损伤后能很快释放入血。敏感性高敏感性高 n在多日内保持异常。窗口期长窗口期长n检测所需时间短检测所需时间短。肌钙蛋白是迄今为止，基本

3、符合上述标准的标志物。 心肌损伤理想的生化标志物心肌损伤理想的生化标志物n国际临床化学联盟（IFCC）的心肌标志物标准化委员会（CSCM）和美国临床生化学院（NACB）建议：n在临床工作中运用两类心肌损伤标志物：一是有胸痛发生后几小时即增高的早期早期标志物；二是发病后持续增高的具有高度专一性的确定确定标志物。 早期标志物早期标志物（心肌损伤后6h内血中就升高）肌红蛋白（肌红蛋白（MbMb）n优点优点n出现早（2h），敏感性高。阴性有助于排除AMI。n血中半衰期短，观察有无再梗死以及梗死有无扩展。n是AMI溶栓中评价再灌注与否的较敏感准确的指标。n缺点缺点n特异性不高 早期标志物早期标志物（心肌

4、损伤后6h内血中就升高）C C反应蛋白反应蛋白n优点n早期即出现异常增高且“窗口期”较短，在心肌损伤的早期诊断和预后估计有较好的临床价值。n超敏CRP对心梗有一定预报价值。n缺点n特异性不高 晚期标志物晚期标志物（发病后6-9h血中增高并持续数天，对心肌损伤的敏感性和特异性都较高）心肌肌钙蛋白（心肌肌钙蛋白（cTncTn）n 有cTnI和cTnT两种亚型。因cTn灵敏度高、特异性强、发病后持续时间长，是目前诊断心肌损伤较好的确定标志物。新修订新修订MI的诊断标准的诊断标准nESC和ACC于2000年联合发表文件，重新修订MI的诊断标准，最重要的是将检测到心肌损伤标志物（主要是cTn）的异常变化

5、作为诊断MI急性发病的必要条件。新修订新修订MI的诊断标准的诊断标准1.心肌损伤标志物升高2.有剧烈而持久的胸痛史3.明确的心电图改变 1 + 2 or 3 1 + 2 or 3 即可诊断即可诊断 胶乳增强免疫比浊法原理胶乳增强免疫比浊法原理n使用特异抗体结合于胶乳颗粒表面，标本与胶乳试剂在缓冲液中混合，标本中的cTnI与胶乳颗粒表面的抗体结合，使相邻的胶乳颗粒彼此交联，在500600 nm附近测量溶液浊度的增加，其增加的程度与标本中的cTnI浓度相关。 胶乳增强免疫比浊法原理胶乳增强免疫比浊法原理方法学特性方法学特性 （cTnI）n该试剂灵敏度为0.3ng/ml;n线性范围为25ng/ml;

6、n批内及批间精密度均小于10%；n以99%单侧界值1.7 ng/ml，敏感性86%，特异性99%，阳性结果预示值97.7%，临床符合率96%。 线性范围线性范围n校准曲线：校准曲线：n采用速率法多点校准，多参数曲线方程（如logit/log）拟合。线性范围达25ng / ml。校准曲线至少稳定30天，测试条件变化时应重新校准，以免试验结果出现偏差。 线性范围线性范围n图1 cTnI浓度与吸光度线性相关图y = -0.0002 x2 + 0.0091 x + 0.0006R2 = 1.00000.000.020.040.060.080.100.120.14051015202530浓度吸光度方法学

7、特性方法学特性 （cTnI）n精密度：精密度：水平质控1质控2均值（ng/ml）5.316.7% CV（批内）4.01.4% CV（批间）4.72.0方法学特性方法学特性 （cTnI）n回收实验 不含Tn I的血清加入已知浓度的cTn I混合，n=5, 加入的Tn I（ng/ml）实测Tn I（ng/ml）回收率（%）4410099.31032020.8104方法学特性方法学特性 （cTnI）n灵敏度灵敏度n用0.00 ng/ml校准品重复测定20次，计算结果如下：n X=0.067 SD=0.019 X + 2.58 SD = 0.1ng/ml 方法学特性方法学特性 （cTnI）n稳定性稳定

8、性n37放置5天后，测定值变化10% 试剂有良好的稳定性，实测效期为两年。 4375Dd %0.46430.49436.46%方法学特性方法学特性 （cTnI）n抗凝剂及抗凝剂及VC影响影响抗凝剂抗凝剂浓度浓度测定值（测定值（x）(ng/ml)回收率回收率(%)-15.0-肝素 12.5U/ml14.395.1枸橼酸钠3.2mg/ml15.1100.2EDTA-K23.2ng/ml 13.2 87.6 Vc50ug/dl 15.099.8Vc 100 ug/dl 15.2101.1方法学特性方法学特性 （cTnI）n抗干扰容量：抗干扰容量：在以知浓度血清中，加入下列物质对在以知浓度血清中，加入

9、下列物质对cTn I的干扰的干扰 10%。n人血清白蛋白 3000 mg/dln甘油三脂 25 mg/dln -球蛋白 5000 mg/dl严重溶血或黄疸可造成负干扰，应予避免。临床评价临床评价n预期值预期值： 149例健康成人血清标本经本法测定，95%单侧分布为1.1 ng/ml， 99%单侧 分布为1.7 ng/ml，此范围仅供参考。 各试验室应确定自己的参考值及诊断标准。 临床评价临床评价n不同分布下的诊断界值不同分布下的诊断界值 单侧上限（单侧上限（%） 临界值临界值 ( ng/ml)86.5 0.8095.0 1.1097.5 1.36 99.01.68 99.51.89不同诊断界值

10、的临床诊断效率不同诊断界值的临床诊断效率 n50例确诊心梗病人和例确诊心梗病人和149例对照标本例对照标本 临界值临界值( ng/ml)特异性特异性 （%）灵敏性（灵敏性（%）符合率（符合率（%） 0.8089.39691.0 1.1094.69494.5 1.3697.39095.51.6899.38696.01.8999.38696.0TNI ROC Curve80848892961000.04.08.012.016.020.01-SPCIFICITYSENSITIVITYROC 曲线曲线注意事项注意事项n标本处理标本处理n用血清或血浆标本（肝素抗凝），在4小时内测定。标本于使用前离心，4

11、000转/分，15分钟。28贮存的标本应在24小时内测定，如标本存放超过24小时，应于20以下冻存，融化后必须离心，避免反复冻 融。 注意事项注意事项n标本避免溶血及黄疸。n血清分离胶有明显负干扰。n慎用抗凝剂。n胶乳试剂避免冰冻。方法学特性方法学特性 （Myoglobin）n试剂灵敏度为1.0 ng/ml;n线性范围为500 ng/ml;n批内及批间精密度小于5.6 %；n95%临界值 为57 ng/ml时，敏感性96.1%，特异性93.0%，阳性结果预示值94.6%，临床符合率94.7%。 Myo CurveMyo Curvey = 0.0003x - 0.0016R2 = 0.9984-

12、0.0020.0390.0790.1190.1590100200300400500方法学特性方法学特性 （Myoglobin）n校准曲线校准曲线方法学特性方法学特性 （Myoglobin）n精密度精密度均值18751.4CV批内%1.834.56CV批间%2.525.38方法学特性方法学特性 （Myoglobin）n灵敏度灵敏度n用0.00 ng/ml校准品重复测定20次，计算结果如下：n X=0.020 SD=0.007 X + 2.58 SD = 0.037 ng/ml回收试验：回收试验：（Myoglobin）n血清中加入已知浓度的纯化Mb，20次重复试验，计算结果如下： 加入（ng/ml

13、）实测(ng/ml）回收率（%）500484.997250245.898125122.79862.5629931.231.5101抗干扰容量抗干扰容量 （MYO）n在以知浓度血清中，下列物质在以知浓度血清中，下列物质I的干扰的干扰 10%。interferent Level testedexpected recovery回收率回收率30177.0167.4959550177.0175.4999930177.0162.3929250177.0164.59393300177.0158.69090600177.0151.6868630122.9110.6909060122.9110.39090130

14、0122.9118.496961700122.9121.19999Triglycerides(mg/dl)Albumin(mg/ml)Globulins(mg/ml)Haemoglobin(mg/dl)Bilirubin(mg/dl)方法学特性方法学特性 （Myo）n稳定性稳定性n37放置5天后，测定值变化10% 试剂有良好的稳定性，实测效期为两年。 4375Dd %1091035.50%方法比较方法比较y = 0.0003x - 0.0016R2 = 0.9984y = 7E-05x - 0.0023R2 = 0.9972-0.0020.0390.0790.1190.159010020030

15、0400500600CZ.KitDiasys Kit线性 ( CZ.Kit)线性 ( Diasys Kit)校准曲线比较校准曲线比较Mb两种方法比较y = 0.9833x - 10.508R2 = 0.99430100200300400500050100150200250300350400450500DiasysCZ两法相关性两法相关性临床评价临床评价n预期值预期值： 100例非相关人血清标本经本法测定，95%单侧分布为57 ng/ml， 99%单侧 分布为79 ng/ml，此范围仅供参考。 各试验室应确定自己的参考值及诊断标准。 临床评价临床评价n不同分布下的诊断界值不同分布下的诊断界值 单

16、侧上限（单侧上限（%）界值界值 ( ng/ml)88.9 50.095.0 57.097.5 62.6 99.070.0 99.575.6不同诊断界值的临床诊断效率不同诊断界值的临床诊断效率 n127例已确诊心梗病人和例已确诊心梗病人和100例对照标本例对照标本 界值界值( ng/ml)特异性特异性 （%） 灵敏性（灵敏性（%） 符合率（符合率（%）50.0 88.0 97.6 93.457.0 93.096.1 94.762.6 95.0 93.7 94.370.0 98.0 91.3 94.375.6 98.0 87.4 92.1ROC 曲线曲线Mb ROC 380.082.084.086.088.090.092.094.096.098.0100.00.04.08.012.016.020.01-SPCIFICITYSENSITIVITY允许的生物学变异允许的生物学变异n肌红蛋白： 5.6%nCK-MB质量： 9.3%ncTn： 10%标准化问题标准化问题肌红蛋白、CK-