基因工程的工具

1、普通棉花抗虫棉普通棉花抗虫棉一、体外一、体外DNA重组、转基因技术；分子；创造更符合要求的生重组、转基因技术；分子；创造更符合要求的生物类型或生物产品；定向改变生物的遗传性状物类型或生物产品；定向改变生物的遗传性状,克服远源杂交不克服远源杂交不亲和；基因重组亲和；基因重组例例1：ATGCTGAATTCTATGC ATGCTCCCGGGTATGC TACGACTTAAGATACG TACGAGGGCCCATACGATGCTG AATTCTATGC ATGCTCCC GGGTATGCTACGACTTAA GATACG TACGAGGG CCCATACG【小结小结】：1、原核生物、原核生物 2、DN

2、A，特定核苷酸序列，特定两，特定核苷酸序列，特定两个脱氧核苷酸，磷酸二酯键个脱氧核苷酸，磷酸二酯键3、常见举例常见举例识别序列识别序列切割位点切割位点作用结果作用结果末端类型末端类型EcorEcor限制酶限制酶GAATTCGAATTCGAGA之间之间见例见例1 1粘性末端粘性末端SmaSma限制酶限制酶CCCGGGCCCGGGCGCG之间之间平末端平末端例例2（1）3，平，平，T4DNA连接酶，连接酶， （2）2、4黏性，黏性，E.coliDNA连接酶连接酶【小结小结】1、磷酸二酯键、磷酸二酯键2、3、DNA连接酶连接酶 脱氧核苷酸脱氧核苷酸 断开磷酸二酯键断开磷酸二酯键 DNA聚合酶聚合酶

3、DNA片段片段 合成磷酸二酯键合成磷酸二酯键 限制酶限制酶 DNA分子分子例例3（1）供外源基因插入（）供外源基因插入（2）标记基因，供重组）标记基因，供重组DNA 的鉴定和的鉴定和选择（选择（3）复制）复制【小结小结】1、将外源基因送入受体细胞、将外源基因送入受体细胞 2、质粒，入噬菌体，双、质粒，入噬菌体，双链链DNA；稳定存在并复制，限制酶切点，标记基因；稳定存在并复制，限制酶切点，标记基因GCGC CGCG GAATTC CTTAAG 种类种类来源来源作用不同点作用不同点E.coliDNAE.coliDNA连接酶连接酶大肠杆菌大肠杆菌只连接粘性末端只连接粘性末端T4DNAT4DNA连接

4、酶连接酶T4T4噬菌体噬菌体黏、平末端黏、平末端名称名称来源来源作用作用特点特点名称名称来源来源作用作用名称名称常用的载体常用的载体作用作用质粒质粒条件条件 G A磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键限制酶的识别序列限制酶的识别序列中轴线中轴线1、各种酶识别的核苷、各种酶识别的核苷酸序列？切割的位点？酸序列？切割的位点？2、各限制酶、各限制酶 识别的特识别的特定序列有何定序列有何 特点？特点？作用断开断开特定两个核苷酸之间磷酸二酯键特定两个核苷酸之间磷酸二酯键识别识别特定核苷酸序列特定核苷酸序列黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端氢键自然断开氢键自然断开作用断开断开特定两个核苷酸之间磷酸二酯键

5、特定两个核苷酸之间磷酸二酯键识别识别特定核苷酸序列特定核苷酸序列 被限制酶切开的被限制酶切开的DNA两条两条单链的切口，带有几个单链的切口，带有几个伸出的伸出的核苷酸核苷酸，他们之间正好互补配他们之间正好互补配对，这样的切口叫对，这样的切口叫黏性末端黏性末端。同种限制酶切割的粘同种限制酶切割的粘性末端有何特点？性末端有何特点？平末端平末端 平末端平末端作用断开断开特定两个核苷酸之间磷酸二酯键特定两个核苷酸之间磷酸二酯键识别识别特定核苷酸序列特定核苷酸序列GAATT CGAATTCEcor限制酶的识别序列为限制酶的识别序列为GAATTC，并在，并在GA之之间切割，请画出环状间切割，请画出环状DN

6、A被切割后的结果。被切割后的结果。同种限制酶切割的粘性末端有何特点？同种限制酶切割的粘性末端有何特点？GAATTCGAATTCEcor限限制酶制酶相同相同8下列黏性未端属于同一限制酶切割而成的是下列黏性未端属于同一限制酶切割而成的是 A B C DC1、相同粘性末端自动碱基互补配对、相同粘性末端自动碱基互补配对 2、DNA连接酶催化连接酶催化 合成磷酸二酯键合成磷酸二酯键注意：两注意：两DNADNA片段要具有片段要具有互补的黏性末端互补的黏性末端才能拼起来才能拼起来DNADNA连接酶的缝合作用连接酶的缝合作用E.coliDNA连接酶连接酶T4 DNA连接酶连接平末端之间的过程DNADNA连接酶

7、的缝合作用连接酶的缝合作用效率较低效率较低两个两个DNA片段是否可以通过片段是否可以通过DNA连接酶连接为完整连接酶连接为完整DNA分子？原因？分子？原因？GAATTCGAATTCGAATTCG CTTAAGAATTCGCTTAA最常用载体最常用载体质粒质粒13基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶质粒，便于重组和筛选。已知限制酶的识别序列和切点的识别序列和切点是是GGATCC，限制酶，限制酶的识别序列和切点是的识别序列和切点是GATC。根据图示判断下列操作正确的是。根据图示判断下列操作正确的是A质粒用限制酶质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割，目的基因用限制酶切割