单克隆抗体技术及其应用

1、Fish Disease Research Center单克隆抗体技术及其应用单克隆抗体技术及其应用报告人：杨金先报告人：杨金先Fish Disease Research Centerp1975年，年，Kohler和和Milstein建立了淋巴细胞杂交建立了淋巴细胞杂交瘤技术，两人由此杰出贡献而荣获瘤技术，两人由此杰出贡献而荣获19841984年度诺贝尔年度诺贝尔生理学和医学奖。生理学和医学奖。：针对预定：针对预定抗原的抗原的同一抗原决定簇的，高度同质同一抗原决定簇的，高度同质的，且能保证的，且能保证无限量供应的抗体。无限量供应的抗体。：抗体的：抗体的多样性多样性、克隆克隆选择学说选择学说、抗

2、体基因的、抗体基因的重排重排理论、抗体理论、抗体结构结构与生物与生物合成合成机制。机制。 单克隆抗体技术简介单克隆抗体技术简介Fish Disease Research CenterFish Disease Research Center骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 （SP2/O-Ag14 ）：）：单克隆技术的原理单克隆技术的原理丧失合成次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（hypoxanthine guanosine phosphoribosyl transferase，HGPRT）无法在无法在HAT选择培养剂中生长选择培养剂中生长能无限地快速增殖 既不合成轻链又不合成重链小鼠脾细胞小鼠脾细胞 （B-Ce

3、ll ）：）：合成和分泌特异性抗体无法进行体外长期培养脾细胞脾细胞SP2/O融合细胞融合细胞：HGPRT，能在，能在HAT选择培养剂中生长选择培养剂中生长能无限地快速增殖 合成和分泌特异性抗体合成和分泌特异性抗体Fish Disease Research Center单克隆抗体制备过程（示意图）单克隆抗体制备过程（示意图）克隆形成克隆形成单克隆细胞单克隆细胞扩大培养，制备抗体、液氮冻存扩大培养，制备抗体、液氮冻存SP2/OB细胞细胞融合细胞融合有限稀释法进行单克隆有限稀释法进行单克隆细胞融合的方法：细胞融合的方法：1、仙台病毒、仙台病毒2、PEG/DMSO3、电融合、电融合Fish Disea

4、se Research Centerv 严格进行无菌操作，防止污染严格进行无菌操作，防止污染（细菌、霉菌、支原体、细胞）v 根据根据实验的目标实验的目标及时及时进行细胞的检测与筛选，进行细胞的检测与筛选，（ELISA、IFA、凝集、中和，）v 对筛选得到的对筛选得到的阳性阳性细胞克隆进行细胞克隆进行早期单克隆早期单克隆（有限稀释法）v 在单克隆细胞建株过程中不定期在单克隆细胞建株过程中不定期验证验证检测检测v 防止单克隆细胞过度生长防止单克隆细胞过度生长 老化老化 死亡死亡 单克隆抗体制备过程的注意事项单克隆抗体制备过程的注意事项Fish Disease Research Center单抗单抗

5、Monoclonal antibody由杂交瘤细胞系产生的，针对同一抗原决定簇的抗体高度均质高度均质。由同一个B细胞克隆产生的同异质同异质的抗体组成，是针对针对抗原的单一决定簇抗体抗原的单一决定簇抗体。单抗纯度高纯度高，专一性强专一性强、重重复性好复性好。无披次差异。易于标准化易于标准化。 能保证无限量供应。单克隆抗体与免疫血清的比较单克隆抗体与免疫血清的比较免疫血清免疫血清又称多克隆抗体（polyclonal antibody），简称多抗。由不同B细胞克隆产生的异质异质的抗体组成，是针对多个不同抗针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物原决定簇抗体的混合物。通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其

6、他蛋白质成分特异性差。不同批次的抗体制剂质量差异很大。难以工业化批量制备。 Fish Disease Research Center单克隆抗体技术的应用单克隆抗体技术的应用n病毒等微生物的中和抗体中和抗体n抗毒素蛇毒、破伤风毒素，等n被动免疫治疗制剂n“生物导弹”诊断技术方法：诊断技术方法：ELISA（间接法、夹心法、竞争法）免疫荧光法胶体金放射免疫法Fish Disease Research CenterFish Disease Research Center我们实验室已经制备的单克隆抗体v鱼类Ig单抗欧洲鳗血清IgM欧洲鳗粘膜Ig石斑鱼IgM大黄鱼IgM鳜鱼IgM鮰鱼IgMv病原微生物 嗜水气单胞菌 杀鲑气单胞菌 鸡IBDV中和单抗 猪PRRSV 猪旋毛虫