第14章基因重组和基因工程--本科

1、目录目录 Genetic Recombination and Genetic Engineering第第1414章章目录目录第二节第二节 重组重组DNA技术技术又称又称DNA克隆或分子克隆克隆或分子克隆 DNA Recombination Technique is also Called DNA Cloning or Molecular Clone 目录目录重组重组DNA技术的发展史技术的发展史1865年年 G.J.Mendel的豌豆的豌豆杂交试验杂交试验。1944年年 O.T.Avery的肺炎球菌的肺炎球菌转化实验转化实验。1973年年 美国斯坦福大学的科学家构建第一个美国斯坦福大学的科学家

2、构建第一个重组重组DNA分子分子。1977年年 美国南旧金山由博耶和斯旺森建立世界上美国南旧金山由博耶和斯旺森建立世界上第一家遗传第一家遗传工程公司工程公司，专门应用重组，专门应用重组DNA技术制造医学上重要的技术制造医学上重要的药物。药物。1980年年 开始建造第一家应开始建造第一家应用重组用重组DNA技术生产胰岛素技术生产胰岛素的工厂。的工厂。1997年年 英国罗林研究所成功的英国罗林研究所成功的克隆了多莉克隆了多莉。目录目录148148天天目录目录u 克隆是人类在生物科学领域取得的一项克隆是人类在生物科学领域取得的一项重大技术突破，反映了细胞核分化技术、细重大技术突破，反映了细胞核分化技

3、术、细胞培养和控制技术的进步。胞培养和控制技术的进步。 原是英文原是英文clone的音译，意为生物体通过细胞进行的无性繁的音译，意为生物体通过细胞进行的无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群，简称为种群，简称为“无性繁殖无性繁殖”。目录目录一、重组一、重组DNA技术相关概念技术相关概念 克隆克隆(clone):来自同一始祖的相同副本或拷来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。贝的集合。 （） 获取同一拷贝的过程称为克隆化获取同一拷贝的过程称为克隆化(cloning)，即无性繁殖。即无性繁殖。（一）（一） DNA克隆克隆目录目录 技术水平：技术水平：分

4、子克隆分子克隆(molecular clone) （即（即DNA 克隆）克隆） 将某一特定将某一特定DNA片段通过重组片段通过重组DNA技术插入到技术插入到一个载体中，然后在宿主细胞中进行自我复制所一个载体中，然后在宿主细胞中进行自我复制所得到的大量完全相同的该得到的大量完全相同的该DNA片段的片段的“群体群体”。细胞克隆：由单一的共同祖先细胞分裂形成的细胞细胞克隆：由单一的共同祖先细胞分裂形成的细胞 群体。群体。个体克隆（动物或植物）：基因完全相同的两个或个体克隆（动物或植物）：基因完全相同的两个或 更多的个体组成的群体。更多的个体组成的群体。目录目录应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗应用

5、酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质（同源的或异源的、原核的或真核的、传物质（同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的天然的或人工的DNA）与载体与载体DNA接合成一具接合成一具有 自 我 复 制 能 力 的有 自 我 复 制 能 力 的 D N A 分 子分 子 复 制 子复 制 子(replicon)，继而通过转化或转染宿主细胞，筛继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增提取获得大量同一提取获得大量同一DNA分子，也称分子，也称基因克隆或基因克隆或重组重组DNA (recombinant DNA) 。 DNA克隆

6、克隆（）目录目录DNA克隆克隆各种来源各种来源DNA载体载体DNA复制子复制子(replicon)酶学方法酶学方法宿主细胞宿主细胞转染转染转化转化转化子细胞转化子细胞筛选筛选扩增扩增提取提取获得大量同一获得大量同一DNA分子分子目录目录 生物技术工程生物技术工程: 基因工程、蛋白质工程、酶基因工程、蛋白质工程、酶工程、细胞工程等工程、细胞工程等 目的：目的： 分离获得某一感兴趣的基因或分离获得某一感兴趣的基因或DNA 获得感兴趣基因的表达产物（蛋白质）获得感兴趣基因的表达产物（蛋白质） 基因工程基因工程(genetic engineering) 实现基因实现基因克隆所用的方法及相关的工作称基因

7、工程，克隆所用的方法及相关的工作称基因工程，又称重组又称重组DNA工艺学。工艺学。 （）目录目录（二）工具酶（二）工具酶 限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶 Klenow片段：片段：DNA聚合酶聚合酶大片段大片段 逆转录酶逆转录酶 DNA连接酶连接酶 碱性磷酸酶碱性磷酸酶 末端转移酶末端转移酶 Taq DNA聚合酶聚合酶重组重组DNA技术中常用的工具酶技术中常用的工具酶工工 具具 酶酶功功 能能限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶识别特异序列，切割识别特异序列，切割DNADNA连接酶连接酶催化催化DNA中相邻的中相邻的5 磷酸基和磷酸基和3 羟基末端之间形成磷酸羟基末端之间形成磷酸二酯键，使二酯键，

8、使DNA切口封合或使两个切口封合或使两个DNA分子或片段连接分子或片段连接DNA聚合酶聚合酶合成双链合成双链cDNA分子或片段连接分子或片段连接缺口平移制作高比活探针缺口平移制作高比活探针DNA序列分析序列分析填补填补3 末端末端Klenow片段片段又名又名DNA聚合酶聚合酶I大片段，具有完整大片段，具有完整DNA聚合酶聚合酶I的的53 聚合、聚合、35 外切活性，而无外切活性，而无53 外切活性。常用于外切活性。常用于cDNA第二链合成，双链第二链合成，双链DNA 3 末端标记等末端标记等反转录酶反转录酶合成合成cDNA替代替代DNA聚合酶聚合酶I进行填补，标记或进行填补，标记或DNA序列分

9、析序列分析多聚核苷酸激酶多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸催化多聚核苷酸5 羟基末端磷酸化，或标记探针羟基末端磷酸化，或标记探针末端转移酶末端转移酶在在3 羟基末端进行同质多聚物加尾羟基末端进行同质多聚物加尾碱性磷酸酶碱性磷酸酶切除末端磷酸基切除末端磷酸基目录目录限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶(restriction endonuclease) 限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶(restriction endonuclease, RE)是识别是识别DNA的特异序列的特异序列, 并在识别位点或其并在识别位点或其周围切割双链周围切割双链DNA的一类内切酶。的一类内切酶。GGATCCCCTAGGGCCT

10、AGGATCC GBam H 定义：定义： （）目录目录此酶存在于细菌体内，与甲基化酶共此酶存在于细菌体内，与甲基化酶共同构成细菌的限制同构成细菌的限制-修饰系统，限制外源修饰系统，限制外源DNA，保护自身，保护自身DNA。、（基因工程技术中常用（基因工程技术中常用型）型） 分类：分类： 作用：作用：目录目录第一个字母取自产生该酶的细菌属名，用大写；第一个字母取自产生该酶的细菌属名，用大写；第二、第三个字母是该细菌的种名，用小写；第二、第三个字母是该细菌的种名，用小写；第四个字母代表株；第四个字母代表株；用罗马数字表示发现的先后次序。用罗马数字表示发现的先后次序。 命名：命名：Hin d 属属

11、 系系 株株 序序Haemophilus influenzae d株株流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌d株的第三种酶株的第三种酶目录目录 双链双链DNADNA中含有两个结构相同、方向相反的序中含有两个结构相同、方向相反的序列，称为反向重复序列，也叫回文结构。即每条列，称为反向重复序列，也叫回文结构。即每条单链以任一方向阅读时与另一条链以相同方向阅单链以任一方向阅读时与另一条链以相同方向阅读时的序列是一致的。读时的序列是一致的。 限制酶（限制酶（型）识别及切割位点型）识别及切割位点类酶识别序列特点类酶识别序列特点 回文结构回文结构（）目录目录Bam HGTCCAGGCCTAGGATCC GGGATCCC

12、CTAGGHindGTCGACCAGCTGGACCTG平端切口平端切口（切割点是识别序列的对称轴）（切割点是识别序列的对称轴）粘端切口粘端切口切口切口 ：平端切口、粘端切口平端切口、粘端切口5粘性末端粘性末端 3粘性末端粘性末端目录目录 3突出粘性末端突出粘性末端GATCC G 5突出粘性末端突出粘性末端GATCC GGCCTAG5GCCTAG3目录目录来源不同的限制酶，但能识别和切割来源不同的限制酶，但能识别和切割同一位点，这些酶称同一位点，这些酶称同功异源酶同功异源酶。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCC GBam HGGATCCCCTAGGGCCTAGGATCC GBst同功异

13、源酶：同功异源酶：目录目录有些限制性内切酶虽然识别序列不完全有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同，但切割相同，但切割DNA后，产生相同的粘性末端，后，产生相同的粘性末端，称为同尾酶。这两个相同的粘性末端称为配称为同尾酶。这两个相同的粘性末端称为配伍未端伍未端(compatible end)。 GGATCC CCTAGG AGATCT TCTAGAGCCTAG GATCC GATCTAG GATCT A 同尾酶同尾酶名称名称 识别序列及切割位点识别序列及切割位点名称识别序列及切割点名称识别序列及切割点切割后产生切割后产生突出末端突出末端:BamH 5GGATCC.3GATCC.3Bgl 5AG

14、ATCT.3GATCT.3EcoREcoR 5GAATTC.3AATTC.3Hind Hind 5AAGCTT.3AGCTT.3 HpaHpa 5CCGG.3CGG.3 MboMbo 5GATC.3GATC.3 NdeNde 5GATATG.3TATG.3切割后产生切割后产生3突出末端突出末端:Apa 5GGGCCC.3C.3Hae 5PuGCGCPyPy.3.3Kpn 5GGTACC.3C.3Pst 5CTGCAG.3G.3Sph 5GCATGC.3C.3切割后产生平末端切割后产生平末端:Alu 5AGCT.3CT.3EcoR 5GATATC.3ATC.3HaeHae 5GGCC.3CC.3

15、PvuPvu 5CAGCTG.3CTG.3SmaSma 5CCCGGG.3GGG.3 限制性内切核酸酶限制性内切核酸酶目录目录（三）目的基因（三）目的基因(target gene) （） cDNA (complementary DNA) 指经反转录合成的、与指经反转录合成的、与RNA (通常指通常指mRNA或病毒或病毒RNA)互补的单链互补的单链DNA。以。以单链单链cDNA为模板、经聚合反应可合成双为模板、经聚合反应可合成双链链cDNA。 基因组基因组DNA (genomic DNA) 指代表一个细胞或生物体整套遗传信息指代表一个细胞或生物体整套遗传信息(染色体及线粒体染色体及线粒体)的所有

16、的所有DNA序列。序列。 目录目录（四）基因载体（四）基因载体 定义定义为携带目的基因，实现其无性繁殖或表达为携带目的基因，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。分子。 常用载体常用载体（） 质粒质粒DNA、噬菌体、噬菌体DNA、病毒、病毒DNA这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因、单一的限制酶切点等。基因、单一的限制酶切点等。 目录目录n载体的选择标准：载体的选择标准：能自主复制；能自主复制；具有两个以上的遗传标记物，便

17、于重组体具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选和鉴定；的筛选和鉴定；有克隆位点（外源有克隆位点（外源DNA插入点），常具有插入点），常具有多个单一酶切位点，称为多克隆位点；多个单一酶切位点，称为多克隆位点；分子量小分子量小，以容纳较大的外源以容纳较大的外源DNA。目录目录克隆载体克隆载体(cloning vector)为使插入的外源为使插入的外源DNA序列被扩增而特意序列被扩增而特意设计的载体称为设计的载体称为克隆载体克隆载体。表达载体表达载体(expression vector) 为使插入的外源为使插入的外源DNA序列可转录翻译成序列可转录翻译成 多肽链而特意设计的载体称为多肽链而特意设

18、计的载体称为表达载体表达载体。目录目录1.1.质粒质粒 (plasmid)特点特点: : 能在宿主细胞内独立自主复制；带有某些遗能在宿主细胞内独立自主复制；带有某些遗传信息传信息, , 会赋予宿主细胞一些遗传性状。会赋予宿主细胞一些遗传性状。 概念：概念：是存在于细菌染色是存在于细菌染色体外的小型环状双链体外的小型环状双链DNADNA分子，大小为分子，大小为1-200kb1-200kb。耐四环素基因耐四环素基因耐氨苄青霉素基因耐氨苄青霉素基因目录目录 噬菌体噬菌体DNA改造系统改造系统 gt系列（插入型，适用系列（插入型，适用cDNA克隆）克隆） EMBL系列（置换型，适用基因组克隆）系列（置

19、换型，适用基因组克隆）2.2.噬菌体噬菌体(phage) M13噬菌体噬菌体DNA改造系统（含改造系统（含lacZ基因）基因） M13mp系列系列线性双链线性双链DNA分子，大小约分子，大小约50kb。目录目录 酵母人工染色体酵母人工染色体 (yeast artificial chromosome, YAC)柯斯质粒载体柯斯质粒载体 (cosmid vector) 动物病毒动物病毒DNA改造的载体改造的载体 （如腺病毒，腺病毒相关病毒，逆转录病毒）（如腺病毒，腺病毒相关病毒，逆转录病毒）3.其他其他目录目录 以以 质质 粒粒 为为 载载 体体 的的DNA 克克 隆隆 过过 程程目录目录二、重组

20、二、重组DNA技术基本原理技术基本原理（）目的基因的获取目的基因的获取DNA导入受体菌导入受体菌外源基因与载体的连接外源基因与载体的连接克隆载体的选择和构建克隆载体的选择和构建重组体的筛选重组体的筛选克隆基因的表达克隆基因的表达 目录目录（一）目的基因的获取（一）目的基因的获取1. 化学合成法化学合成法要求：已知目的基因的核苷酸序列或其产要求：已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列物的氨基酸序列 。2. 基因组基因组DNA文库文库(genomic DNA library)3. cDNA文库文库(cDNA library)4. 聚合酶链反应聚合酶链反应(polymerase chain r

21、eaction, PCR) (见第见第22章章) 目录目录已知目的基因的核苷酸序列已知目的基因的核苷酸序列已知基因产物的氨基酸序列已知基因产物的氨基酸序列 。化学合成法化学合成法推导出编码基因核苷酸序列推导出编码基因核苷酸序列化学合成仪化学合成仪合成目的基因合成目的基因 一般用于小分子活性多肽基因的合成。如胰岛素原、一般用于小分子活性多肽基因的合成。如胰岛素原、干扰素基因等。干扰素基因等。目录目录化学合成法获取目的基因化学合成法获取目的基因由已知氨基酸序列推测可能的由已知氨基酸序列推测可能的DNA序列。序列。组织或细胞染色体组织或细胞染色体DNA基因片断基因片断克隆载体克隆载体重组重组DNA分

22、子分子含重组分子的转化菌含重组分子的转化菌限制性内切酶限制性内切酶受体菌受体菌基因组基因组DNA文库文库存在于转化细胞内存在于转化细胞内由克隆载体所携带的所由克隆载体所携带的所有基因组有基因组DNA的集合的集合从基因组从基因组DNA文文库获取目的基因库获取目的基因限制酶切位点限制酶切位点限制酶消化限制酶消化 除去中间片段除去中间片段cos LR coscos L左臂左臂R cos右臂右臂真核生物染真核生物染色体色体DNA限制酶部分消化限制酶部分消化 外源外源DNA与载体与载体DNA混合混合 连接反应连接反应 体外包装体外包装 用重组噬菌体用重组噬菌体感染大肠杆菌感染大肠杆菌 20 Kb DNA

23、 片段片段 cos LR cos20 Kb 外源外源 DNA 片段片段 基因文库基因文库用随机切割的真核生物染色体用随机切割的真核生物染色体DNA片段构建基因文库片段构建基因文库 目录目录 以以mRNA为模版，反转录合成为模版，反转录合成cDNA ，与载体拼接后导入受体菌，即获得与载体拼接后导入受体菌，即获得cDNA文库。文库。由总由总mRNA 制作的制作的cDNA文库包含了细胞表文库包含了细胞表达的各种达的各种mRNA信息，自然也含有我们感兴信息，自然也含有我们感兴趣的基因。目前发现的多数蛋白质的编码基趣的基因。目前发现的多数蛋白质的编码基因都是如此分离的。因都是如此分离的。 从从cDNA文

24、库获取目的基因文库获取目的基因 mRNA cDNA 双链双链cDNA 重组重组DNA分子分子 cDNA文库文库 反转录酶反转录酶 载体载体 受体菌受体菌 复制复制 从从cDNA文库获取目的基因文库获取目的基因 逆转录酶逆转录酶A A A A T T T T AAAASISI核酸酶核酸酶 DNA聚合酶聚合酶碱水解碱水解 T T T T目录目录（二）克隆载体的选择和构建（二）克隆载体的选择和构建外源外源DNA片断离开染色体是不能复制的，片断离开染色体是不能复制的，必须借助载体，随载体的复制而复制，重组必须借助载体，随载体的复制而复制，重组DNA技术中克隆载体的选择和改进是一种极富技术中克隆载体的选

25、择和改进是一种极富技术型的专门工作，目的不同、操作基因的性技术型的专门工作，目的不同、操作基因的性质不同载体的选择和改建方法也不同。质不同载体的选择和改建方法也不同。目录目录（三）外源基因与载体的连接（三）外源基因与载体的连接1. 粘性末端连接粘性末端连接 即即DNA的体外重组，靠的体外重组，靠DNA连接酶将外连接酶将外源基因与载体共价连接，其连接方式主要有：源基因与载体共价连接，其连接方式主要有：1）同一限制酶切位点连接）同一限制酶切位点连接 2）配伍末端连接）配伍末端连接2、平端连接：、平端连接：非配伍粘性末端经特殊酶处理，使非配伍粘性末端经特殊酶处理，使单链突出处被补齐或削平，变为平端，

26、也可实行平单链突出处被补齐或削平，变为平端，也可实行平端连接。端连接。目录目录目的基因目的基因载体载体限制性内切酶限制性内切酶限制性内切酶限制性内切酶T4 DNA连接酶连接酶15C重组体重组体载体自连载体自连目的基因目的基因 自连自连目录目录3、同聚物加尾连接、同聚物加尾连接 在末端转移酶作用下，在在末端转移酶作用下，在DNA片断末端加上同聚片断末端加上同聚物序列，制造出粘性末端，而后进行粘性末端接。物序列，制造出粘性末端，而后进行粘性末端接。4、人工接头连接、人工接头连接 对平端对平端DNA片断或载体片断或载体DNA可在连接前将磷酸可在连接前将磷酸化的接头或适当分子连到平末端，使产生新的酶化

27、的接头或适当分子连到平末端，使产生新的酶切位点，再用识别新位点的限制酶切割，产生粘切位点，再用识别新位点的限制酶切割，产生粘性末端，这也是粘性末端连接的一种特殊形式。性末端，这也是粘性末端连接的一种特殊形式。目录目录（四）重组（四）重组DNA导入受体菌导入受体菌u外源外源DNA(DNA(含目的含目的DNA)DNA)与载体在体外连接成重组与载体在体外连接成重组DNADNA分子后，需将其导入受体细胞分子后，需将其导入受体细胞( (形成转化子形成转化子) )。随受。随受体细胞生长、增殖，重组体细胞生长、增殖，重组DNADNA分子也复制、扩增，这分子也复制、扩增，这一过程即为无性繁殖。一过程即为无性繁

28、殖。目录目录受体菌条件：受体菌条件：1）容易接纳重组分子）容易接纳重组分子2）对载体的复制扩增无严格要求）对载体的复制扩增无严格要求3）不存在特异的限制）不存在特异的限制-修饰酶体系降解或修饰修饰酶体系降解或修饰 外源外源DNA4）符合）符合“重组重组DNA操作规则操作规则”的安全标准。的安全标准。目录目录1. 直接选择法直接选择法(1) 抗药性标记选择抗药性标记选择(2) 标志补救标志补救(marker rescue)(3) 分子杂交法分子杂交法原位杂交原位杂交Southern印迹印迹2. 免疫学方法免疫学方法如免疫化学方法及酶免检测分析等如免疫化学方法及酶免检测分析等（五）重组体的筛选（五

29、）重组体的筛选目录目录对于带有抗药基因的质粒重组体，可采用插对于带有抗药基因的质粒重组体，可采用插入灭活法进行筛选。入灭活法进行筛选。抗药性标记选择抗药性标记选择(插入失活法插入失活法)目录目录 概念：若克隆的基因能够在宿主菌表达，概念：若克隆的基因能够在宿主菌表达，且表达产物与宿主菌的营养缺陷互补，那且表达产物与宿主菌的营养缺陷互补，那么就可以利用营养突变菌株进行筛选，这么就可以利用营养突变菌株进行筛选，这就是标志补救。就是标志补救。 例如：例如：u标志补救标志补救目录目录组氨酸缺陷组氨酸缺陷型大肠杆菌型大肠杆菌无组氨酸无组氨酸的培养基的培养基酵母咪唑甘油磷酵母咪唑甘油磷酸脱水酶基因酸脱水酶

30、基因促进组氨酸合成促进组氨酸合成 噬菌体噬菌体DNADNA重组体重组体标志补救标志补救目录目录 互补互补(alpha complementation)(alpha complementation)Lac Z-半乳糖苷酶半乳糖苷酶N端端146个氨基酸残基个氨基酸残基C端端2个片段组合后有活性，可使个片段组合后有活性，可使X-gal水解成深蓝水解成深蓝色产物。色产物。X-gal（5-5-溴溴-4-4-氯氯-3-3-吲哚吲哚-b-D-b-D-半乳糖）半乳糖）形成蓝形成蓝色菌落色菌落目录目录 蓝白筛选示意图蓝白筛选示意图 互补互补利用利用互补原理筛选重组体互补原理筛选重组体pUC18 目录目录重组重组

31、DNADNA技术操作过程可形象归纳为：技术操作过程可形象归纳为： 小结小结（）分分分离目的基因分离目的基因 切切限制酶切目的基因与载体限制酶切目的基因与载体接接拼接重组体拼接重组体 转转转入受体细胞转入受体细胞筛筛筛选重组体筛选重组体 目录目录重组重组DNA技术操作的主要步骤技术操作的主要步骤（）载体载体质粒质粒噬菌体噬菌体病毒病毒目的基因（外源基因）目的基因（外源基因）基因组基因组DNA cDNA 人工合成人工合成PCR产物产物限制酶消化限制酶消化开环载体开环载体DNA目的基目的基因因连接酶连接酶重组体重组体转化转化体外包装，转染体外包装，转染带重组体的宿主带重组体的宿主筛选筛选表型筛选表型

32、筛选酶切电泳鉴定酶切电泳鉴定菌落原位杂交菌落原位杂交目录目录蛋白质表达体系的建立：蛋白质表达体系的建立： 表达载体的构建表达载体的构建 受体细胞的建立受体细胞的建立 表达产物的分离纯化表达产物的分离纯化（六）克隆基因的表达（六）克隆基因的表达表达体系包括原核表达体系和真核表达体系两类。表达体系包括原核表达体系和真核表达体系两类。目录目录1. 原核表达体系原核表达体系 （E.coli表达体系最为常用表达体系最为常用） 标准：标准：选择标志选择标志强启动子强启动子 翻译调控序列翻译调控序列多接头克隆位点多接头克隆位点E.coli表达体系的不足表达体系的不足 不宜表达真核基因组不宜表达真核基因组DN

33、A不能加工表达的真核蛋白质不能加工表达的真核蛋白质表达的蛋白质常形成不溶性包涵体表达的蛋白质常形成不溶性包涵体 (inclusion body) 很难表达大量可溶性蛋白很难表达大量可溶性蛋白（）目录目录优点：优点：可表达克隆的可表达克隆的cDNA及真核基因组及真核基因组DNA可适当修饰表达的蛋白质可适当修饰表达的蛋白质表达产物分区域积累表达产物分区域积累缺点：缺点：操作技术难、费时、经济操作技术难、费时、经济2. 真核表达体系真核表达体系 酵母、昆虫、哺乳类动物细胞酵母、昆虫、哺乳类动物细胞应用较多的哺乳类细胞是应用较多的哺乳类细胞是（） COS细胞（猿猴肾细胞）细胞（猿猴肾细胞） CHO 细

34、胞（中国仓鼠卵巢细胞）细胞（中国仓鼠卵巢细胞）目录目录第三节第三节 重组重组DNA技术与医学技术与医学的关系非常密切并前景远大的关系非常密切并前景远大DNA Recombination Technique is Closly Related with Medicine and has a Good Perspective目录目录一、疾病基因的发现与克隆一、疾病基因的发现与克隆根据基因定位克隆之并研究其性质，而认根据基因定位克隆之并研究其性质，而认识疾病的分子机制。识疾病的分子机制。 疾病基因发现的两个典型例子疾病基因发现的两个典型例子: 脆性脆性X综合征综合征Kallmann综合征综合征目录目录二、生二、生物制药物制药 利用基因工程生产有药用价值的蛋白质、多利用基因工程生产有药用价值的蛋白质、多肽产品已成为当今世界一项重大产业，并将肽产品已成为当今世界一项重大产业，并将有望成为有望成为2121世纪的支柱产业。世纪的支柱产业。 美国美国Eli Lilly公司于公司于19821982年首先利用重组年首先利用重组DNADNA技术合成人胰岛素并投放市场，标志着技术合成人胰岛素并投放市场，标志着生物工程药物时代的开始。迄今为止，已有生物工程药物时代的开始。迄今为止，已有5050多种基因工程药物上市，近千种处