酶类药物的制备

1、整理课件17.4 7.4 酶类药物酶类药物一、酶类药物的原料来源一、酶类药物的原料来源1、原料选择、原料选择选用原料应注意以下几点选用原料应注意以下几点:（1）不同酶的用料选择：）不同酶的用料选择：哪里有，含量高，选哪哪里有，含量高，选哪。（2）注意不同生长发育情况及营养状况）注意不同生长发育情况及营养状况,用用微生物制微生物制酶酶，故需，故需测其活力来决定取酶阶段测其活力来决定取酶阶段。用动物器官提取。用动物器官提取酶，则与酶，则与动物年龄及饲养条件动物年龄及饲养条件有关。有关。整理课件2（3）从原料）从原料来源是否丰富来源是否丰富考虑；考虑；（4）从）从简化提纯步骤简化提纯步骤着手着手（5

2、）如用动物组织作原料，则此动物）如用动物组织作原料，则此动物宰杀后应立即宰杀后应立即取材。取材。从动物或植物中提取酶受到原料的限制，随着酶应用日从动物或植物中提取酶受到原料的限制，随着酶应用日益广泛和需求量的增加，工业生产的益广泛和需求量的增加，工业生产的重点重点已逐渐已逐渐转向微生物转向微生物。用微生物发酵法生产药用酶，用微生物发酵法生产药用酶，不受季节、气候和地域的限制，不受季节、气候和地域的限制，生产周期短，产量高，成本低，能大规模生产。生产周期短，产量高，成本低，能大规模生产。整理课件3二、微生物酶制剂高产菌株的选育二、微生物酶制剂高产菌株的选育菌种是工业发酵生产酶制剂的重要条件。与增

3、加品种、缩菌种是工业发酵生产酶制剂的重要条件。与增加品种、缩短生产周期、改进发酵和提取工艺条件等密切相关。短生产周期、改进发酵和提取工艺条件等密切相关。优良菌种的获得有优良菌种的获得有三条途径：三条途径：是是从自然界分离筛选从自然界分离筛选：是是用物理域化学方法处理、诱变用物理域化学方法处理、诱变；是用是用基因重组与细胞融合技术基因重组与细胞融合技术。因此微生物的分离筛选。因此微生物的分离筛选是一切工作的基础。是一切工作的基础。整理课件4三、微生物酶制剂生产的发酵技术三、微生物酶制剂生产的发酵技术首先要首先要合理选择培养方法、培养基、培养温度、合理选择培养方法、培养基、培养温度、pH和通和通气

4、量等气量等。还要研究酶的分离提纯技术和制备工艺。还要研究酶的分离提纯技术和制备工艺。（）原料）原料利用微生物生产酶制剂的主要原料为利用微生物生产酶制剂的主要原料为碳源和氮源碳源和氮源，此外，此外还有还有无机盐、生长因素无机盐、生长因素和和产酶促进剂产酶促进剂等。等。整理课件5如果如果添加少量某种物质就能明显增加酶的产量时，这类添加少量某种物质就能明显增加酶的产量时，这类物质通称为物质通称为产酶促进剂产酶促进剂。它们大多属于酶的诱导物或表面活。它们大多属于酶的诱导物或表面活性剂。性剂。1、固体培养法、固体培养法固体培养法亦称固体培养法亦称麸曲培养法麸曲培养法，该法是利用麸皮或米糠为，该法是利用麸

5、皮或米糠为主要原料，另外视需要添加其它谷糠、豆饼等，加水拌成含主要原料，另外视需要添加其它谷糠、豆饼等，加水拌成含水适度的半固态物料作为培养基水适度的半固态物料作为培养基。2、液体培养法、液体培养法液体培养法是利用液体培养进行微生物的生长繁殖和产液体培养法是利用液体培养进行微生物的生长繁殖和产酶。根据酶。根据通气（供氧）方法的不同通气（供氧）方法的不同，又分为，又分为液体表面培养液体表面培养和和液体深层培养液体深层培养两种。两种。整理课件63、影响酶产生的一些因素、影响酶产生的一些因素菌种的产酶性能是决定发酵效果的重要因素，但是发酵菌种的产酶性能是决定发酵效果的重要因素，但是发酵工艺条件对产酶

6、的影响也是十分明显的。工艺条件对产酶的影响也是十分明显的。（1）温度）温度一般发酵温度比种子培养时略高些，这样对产一般发酵温度比种子培养时略高些，这样对产酶有利。酶有利。（2）pH可用糖或淀粉调节，可用糖或淀粉调节，pH低则可用氨来调节。低则可用氨来调节。整理课件7（3）通气（供氧）临界氧浓度）通气（供氧）临界氧浓度。氧必须是溶解于培养基中。氧必须是溶解于培养基中的氧的氧。（4）搅拌）搅拌增加液体湍流速度增加液体湍流速度，减少气泡周围液膜厚度，减少气泡周围液膜厚度。有利于促进细胞的新陈代谢。有利于促进细胞的新陈代谢。（5）泡沫和消沫剂）泡沫和消沫剂由于培养基中蛋白质分子排在气泡表由于培养基中蛋

7、白质分子排在气泡表面形成一层吸附膜，聚集成泡沫层之故面形成一层吸附膜，聚集成泡沫层之故。（6）添加诱导剂和抑制剂）添加诱导剂和抑制剂诱导酶诱导酶的合成，诱导酶诱导酶诱导酶的合成，诱导酶是该酶作用底物或者是其类似物。抑制剂促进酶的形成是该酶作用底物或者是其类似物。抑制剂促进酶的形成。加。加入适量表面活性剂入适量表面活性剂。整理课件8二、酶类药物的提取和纯化二、酶类药物的提取和纯化（一）生物材料的预处理（一）生物材料的预处理1、动物材料的预处理、动物材料的预处理（1）机械处理）机械处理用绞肉机绞，一般细胞并不破碎用绞肉机绞，一般细胞并不破碎。有的酶必须细胞破碎后。有的酶必须细胞破碎后才能有效地提取

8、，在实验室常用的是玻璃匀浆器和组织捣碎器。才能有效地提取，在实验室常用的是玻璃匀浆器和组织捣碎器。（2）反复冻融）反复冻融冷到冷到-10左右，再左右，再缓慢溶解至室温，如此反复多次缓慢溶解至室温，如此反复多次。由于。由于细胞中细胞中冰晶冰晶的形成，及剩下液体中盐浓度的增高，能使细胞中的形成，及剩下液体中盐浓度的增高，能使细胞中颗粒及整个细胞破碎，从而使某些酶释放出来。颗粒及整个细胞破碎，从而使某些酶释放出来。整理课件9（3）丙酮粉）丙酮粉组织经丙酮迅速脱水干燥制成丙酮粉，不仅可组织经丙酮迅速脱水干燥制成丙酮粉，不仅可减少酶的减少酶的变性变性，同时因，同时因细胞结构成份的破碎使蛋白质与脂质结合的

9、某细胞结构成份的破碎使蛋白质与脂质结合的某些化学键打开些化学键打开，促使某些结合酶释放到溶液中促使某些结合酶释放到溶液中。常用的方法是将组织糜或匀浆悬浮于常用的方法是将组织糜或匀浆悬浮于0.0lmolL，pH6.5的磷酸缓冲液中，在的磷酸缓冲液中，在0下一边搅拌，一边徐徐倒入下一边搅拌，一边徐徐倒入10倍体积倍体积的的-15无水丙酮内，无水丙酮内，10min后，离心过滤取其沉淀物，反复后，离心过滤取其沉淀物，反复用冷丙酮洗几次，真空干燥即得丙酮粉。用冷丙酮洗几次，真空干燥即得丙酮粉。丙酮粉在低温下可保存数年。丙酮粉在低温下可保存数年。整理课件102、微生物的预处理、微生物的预处理要是酶是要是酶

10、是胞外酶胞外酶，则可除去菌体后再，则可除去菌体后再直接从发酵液中吸附提直接从发酵液中吸附提取酶取酶。但对。但对胞内酶胞内酶则需则需将菌体细胞破壁将菌体细胞破壁，制成无细胞的悬液后再，制成无细胞的悬液后再行提取。行提取。菌体菌体用生理盐水洗涤除去培养基后，应用生理盐水洗涤除去培养基后，应深冻保存深冻保存。干燥法，因为干燥常能导致干燥法，因为干燥常能导致细胞自溶细胞自溶，增加酶的释放增加酶的释放，从而，从而在后处理中破壁不必太剧烈就能达到预期目的。在后处理中破壁不必太剧烈就能达到预期目的。（1）常用的干燥法有：）常用的干燥法有：空气干燥空气干燥2530真空干燥还真空干燥还原剂作保护剂原剂作保护剂冷

11、冻干燥对较敏感的酶宜用此法。冷冻干燥对较敏感的酶宜用此法。（2）机械法：常用的方法有研磨法，组织匀浆法，超声波法，）机械法：常用的方法有研磨法，组织匀浆法，超声波法，高压匀浆法等。高压匀浆法等。整理课件11（3）酶法处理）酶法处理用得最多的是用得最多的是溶菌酶溶菌酶，如在，如在37，pH8.0下对小球菌进行下对小球菌进行破壁处理，历时破壁处理，历时15分钟，即可提取核酸酶。也有用脱氧核糖核分钟，即可提取核酸酶。也有用脱氧核糖核酸酶处理，操作与溶菌酶同。酸酶处理，操作与溶菌酶同。（二）酶的提取（二）酶的提取1、水溶液提取法、水溶液提取法常用常用稀盐溶液或缓冲液提取稀盐溶液或缓冲液提取。一般在。一

12、般在低温下操作低温下操作。在酸性。在酸性条件下稳定的酶要在酸性条件下提取。一般来说，条件下稳定的酶要在酸性条件下提取。一般来说，碱性蛋白酶碱性蛋白酶用酸性溶液提取，酸性蛋白酶用碱性溶液提取用酸性溶液提取，酸性蛋白酶用碱性溶液提取。整理课件12盐浓度盐浓度一般以一般以等渗为好等渗为好，相当于，相当于0.15molLNaCl的离子的离子强度是最适宜于酶的提取。强度是最适宜于酶的提取。2、有机溶剂提取法、有机溶剂提取法某些某些结合酶结合酶如微粒体和线粒体膜的酶，由于如微粒体和线粒体膜的酶，由于和脂质牢固和脂质牢固结合结合，为此，为此必须除去结合的脂质必须除去结合的脂质，且不能使酶变性，最常用，且不能

13、使酶变性，最常用的有机溶剂是的有机溶剂是丁醇丁醇。3、表面活性剂提取法、表面活性剂提取法表面活性剂能与蛋白质结含而分散在溶液中表面活性剂能与蛋白质结含而分散在溶液中，故可用于提，故可用于提取结合酶。取结合酶。整理课件134、酶制剂的工业提取法、酶制剂的工业提取法(1)(1)发酵液的预处理及过滤发酵液的预处理及过滤微生物发酵液的分离，过滤，发酵液中微生物发酵液的分离，过滤，发酵液中加絮凝剂加絮凝剂或凝固剂或凝固剂。絮凝剂有。絮凝剂有聚丙烯酰胺、右旋糖酐和聚谷聚丙烯酰胺、右旋糖酐和聚谷氨酸氨酸。(2)(2)活性炭、脱色树脂活性炭、脱色树脂。(3)(3)盐析法盐析法用得最多的是用得最多的是（NH4）

14、2SO4，在常温下不会造成酶在常温下不会造成酶的失活，若的失活，若分级沉淀分级沉淀应用得当，杂蛋白杂质也较少。应用得当，杂蛋白杂质也较少。整理课件145、有机溶剂法、有机溶剂法有机溶剂有机溶剂沉淀蛋白质的能力沉淀蛋白质的能力为为丙酮异丙醇乙醇甲醇丙酮异丙醇乙醇甲醇。工业上通常采用工业上通常采用乙醇乙醇作为沉淀剂。作为沉淀剂。6、喷雾干燥直接制备粉末酶制剂、喷雾干燥直接制备粉末酶制剂喷雾干燥用于干燥菌体，药用酶常用冷冻干燥。喷雾干燥用于干燥菌体，药用酶常用冷冻干燥。（三）酶的纯化（三）酶的纯化评价纯化工艺主要看二个指标，一是评价纯化工艺主要看二个指标，一是酶比活酶比活，二是，二是总活力总活力回收

15、回收。整理课件15酶在纯化过程中的一些技术难点：酶在纯化过程中的一些技术难点：1、杂质的除去、杂质的除去酶提取液中，除所需酶外，还含有大量的酶提取液中，除所需酶外，还含有大量的杂蛋白、多糖、杂蛋白、多糖、脂类和核酸脂类和核酸等等。（1）pH和加热沉淀法和加热沉淀法（2）蛋白质表面变性法）蛋白质表面变性法利用蛋白质利用蛋白质表面变性性质的差别表面变性性质的差别，也可除去杂蛋白，加，也可除去杂蛋白，加入入氯仿氯仿和和乙醇乙醇进行震荡，可以除去杂蛋白。进行震荡，可以除去杂蛋白。整理课件16（3）选择性变性法）选择性变性法利用蛋白质稳定性的不同，除去杂蛋白。利用蛋白质稳定性的不同，除去杂蛋白。甚至可用

16、甚至可用2.5%三氯乙酸三氯乙酸处理。处理。（4）核酸沉淀剂法）核酸沉淀剂法用用核酸酶核酸酶，将，将核酸降解成核苷酸核酸降解成核苷酸，使，使粘度下降粘度下降便于离心分便于离心分离。离。用用核酸沉淀剂核酸沉淀剂如如三甲基十六烷基溴化铵、硫酸链霉素、聚三甲基十六烷基溴化铵、硫酸链霉素、聚乙烯亚胺、鱼精蛋白和二氯化锰乙烯亚胺、鱼精蛋白和二氯化锰等。等。（5）将酶与底物结合）将酶与底物结合酶和底物结合或竞争性抑制剂结合后，热稳定性大大提高，酶和底物结合或竞争性抑制剂结合后，热稳定性大大提高，这样就可用加热法除去杂蛋白。这样就可用加热法除去杂蛋白。整理课件172、脱盐和浓缩、脱盐和浓缩（1）脱盐）脱盐脱

17、盐方法是脱盐方法是透析和凝胶过滤透析和凝胶过滤。（2）浓缩）浓缩酶的浓缩方法很多，有酶的浓缩方法很多，有冷冻干燥、离子交换、超滤、凝胶冷冻干燥、离子交换、超滤、凝胶吸水、聚乙二醇吸水吸水、聚乙二醇吸水等。等。3、酶的结晶、酶的结晶把酶提纯到一定纯度以后（通常把酶提纯到一定纯度以后（通常纯度应达纯度应达50%以以上上），可使其），可使其结晶结晶，酶的纯度经常有一定程度的提高。，酶的纯度经常有一定程度的提高。为研究为研究蛋白质空间结构蛋白质空间结构提供提供X射线衍射样品射线衍射样品。整理课件18（1）酶的结晶方法）酶的结晶方法酶的结晶方法主要是缓慢地改变酶蛋白的溶解度，酶的结晶方法主要是缓慢地改变

18、酶蛋白的溶解度，使其略处于过饱和状态。使其略处于过饱和状态。 盐析法：盐析法：操作要在操作要在低温下进行低温下进行，加盐，缓冲液，加盐，缓冲液pH要接近酶的等电点。多数酶就可形成结晶。有时要接近酶的等电点。多数酶就可形成结晶。有时也可交替置在也可交替置在4冰箱中和室温下来形成结晶。冰箱中和室温下来形成结晶。 有机溶剂法：有机溶剂法：酶液中滴加有机溶剂，有时也酶液中滴加有机溶剂，有时也能使酶形成结晶。能使酶形成结晶。一般一般要含少量无机盐的情况下要含少量无机盐的情况下，选择使酶稳定的选择使酶稳定的pH，缓慢地滴加有机溶剂缓慢地滴加有机溶剂。使用的。使用的缓冲液缓冲液一般一般不用不用磷酸盐磷酸盐，

19、而，而用氯化物或乙酸盐用氯化物或乙酸盐。整理课件19 复合结晶法复合结晶法：有时可以利用某些酶与：有时可以利用某些酶与有机化合有机化合物物或或金属离子形成复合物或盐金属离子形成复合物或盐的性质来结晶。的性质来结晶。 透析平衡法透析平衡法 等电点法等电点法（2）结晶条件的选择）结晶条件的选择 酶的纯度酶的纯度：酶的纯度越高，结晶越容易，长成：酶的纯度越高，结晶越容易，长成大的单晶可能性也越大。大的单晶可能性也越大。结晶对酶有明显的纯化作用结晶对酶有明显的纯化作用。 酶的浓度酶的浓度 温度温度：结晶的：结晶的温度温度通常在通常在4下或室温下或室温25下下，低温条件下酶不仅低温条件下酶不仅溶解度低溶

20、解度低，而且，而且不易变性不易变性。整理课件20 时间时间：结晶形成的时间：结晶形成的时间,数小时到几个月数小时到几个月，有的甚至需要，有的甚至需要1年或更长时间年或更长时间。一般来说，。一般来说，较大而性能好的结晶是在生长慢较大而性能好的结晶是在生长慢的情况下得到的的情况下得到的。一般希望使微晶的形成快些，然后慢慢地。一般希望使微晶的形成快些，然后慢慢地改变沉淀条件，再使微晶慢慢长大。改变沉淀条件，再使微晶慢慢长大。 pH pH ：调整调整pH可可使结晶长到最佳大小使结晶长到最佳大小，也可，也可改变晶形改变晶形。结。结晶溶液晶溶液pH一般选择在被结晶酶的等电点附近。一般选择在被结晶酶的等电点

21、附近。 金属离子：金属离子：许多金属离子能引起或有助于酶的结晶，在许多金属离子能引起或有助于酶的结晶，在酶的结晶过程中常用金属离子有酶的结晶过程中常用金属离子有Ca2+、Zn2、Co2、Cu2、Mg2、Mn2、Ni2等。等。整理课件21晶种：不易结晶的蛋白质和酶，有的需晶种：不易结晶的蛋白质和酶，有的需加入微量的加入微量的晶种晶种才能结晶，才能结晶，结晶器皿处理结晶器皿处理 ：结晶用的器皿要结晶用的器皿要充分清洗、烘干充分清洗、烘干。使用前用结晶母液再冲洗一次。使用前用结晶母液再冲洗一次。结晶的玻璃器皿，结晶的玻璃器皿，可用可用硅涂料硅涂料进行表面处理，以使进行表面处理，以使表面光滑且不润湿表

22、面光滑且不润湿。这样可这样可减少晶核数目减少晶核数目，形成大的结晶形成大的结晶。4、酶分离和纯化工作的注意事项、酶分离和纯化工作的注意事项（1）防止酶蛋白变性）防止酶蛋白变性（2）防止辅因子的流失）防止辅因子的流失（3）防止酶被蛋白水解酶降解）防止酶被蛋白水解酶降解整理课件22 三、三、 酶类药物酶类药物（一）药用酶类的概述（一）药用酶类的概述早期酶制剂主要用于治疗早期酶制剂主要用于治疗消化道疾病，烧伤及感染消化道疾病，烧伤及感染引起的炎症疾病引起的炎症疾病，现在国内外己广泛应用于多种疾病，现在国内外己广泛应用于多种疾病的治疗，其制剂品种已超过的治疗，其制剂品种已超过700余种。余种。1、促进

23、消化酶类、促进消化酶类2、消炎酶类、消炎酶类3、与、与纤维蛋白溶解作用纤维蛋白溶解作用有关的酶类有关的酶类4、抗肿瘤的酶、抗肿瘤的酶5、其它药用酶、其它药用酶整理课件23（二）胃蛋白酶（二）胃蛋白酶（Pepsin，EC3.4.4.1）胃蛋白酶广泛存在于哺乳类动物的胃液中，药用胃蛋白胃蛋白酶广泛存在于哺乳类动物的胃液中，药用胃蛋白酶系从猪、牛、羊等家畜的胃粘膜中提取。酶系从猪、牛、羊等家畜的胃粘膜中提取。1、组成（结构）、性质、组成（结构）、性质药用胃蛋白酶是胃液中药用胃蛋白酶是胃液中多种蛋白水解酶的混合物多种蛋白水解酶的混合物，含有，含有胃蛋白酶、组织蛋白酶、胶原酶胃蛋白酶、组织蛋白酶、胶原酶

24、等，为粗制的酶制剂。水溶等，为粗制的酶制剂。水溶液呈液呈酸性酸性，难溶于乙醇、氯仿等有机溶剂难溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。pI为为pH1.0，最适最适pH1.52.0。可溶于可溶于70乙醇和乙醇和pH4的的20乙醇中。乙醇中。胃蛋白酶能水解大多数天然蛋白质底物胃蛋白酶能水解大多数天然蛋白质底物。整理课件242、生产工艺、生产工艺（1）工艺路线：）工艺路线：胃蛋白酶原胃蛋白酶原盐酸催化激活盐酸催化激活成胃蛋白酶。成胃蛋白酶。常用的常用的脱脂剂脱脂剂有乙醚、氯仿、四氯化碳。有乙醚、氯仿、四氯化碳。整理课件25（2）胃膜素和胃蛋白酶）胃膜素和胃蛋白酶联产工艺联产工艺：向经：向经消化、提取、脱脂、消化、

25、提取、脱脂、分层、浓缩及分层、浓缩及60丙酮沉淀分离胃膜素丙酮沉淀分离胃膜素的的母液母液中，边搅拌边中，边搅拌边加加冷丙酮冷丙酮，至比重为，至比重为0.91，即有，即有淡黄色胃蛋白酶沉出淡黄色胃蛋白酶沉出，静放过夜，静放过夜，去上清液，沉淀真空干燥，即得胃蛋白酶。去上清液，沉淀真空干燥，即得胃蛋白酶。（3）结晶胃蛋白酶的制备：药用胃蛋白酶原粉，）结晶胃蛋白酶的制备：药用胃蛋白酶原粉，溶于溶于20酒精酒精中，加中，加H2SO4调调pH3.0，5静置静置20h后过滤，加后过滤，加硫酸镁至硫酸镁至饱和，进行盐析饱和，进行盐析。盐析物再在。盐析物再在pH3.84.0的乙醇中溶解的乙醇中溶解，过滤，过滤

26、，滤液用滤液用硫酸调硫酸调pH至至1.82.0，即析出，即析出针状胃蛋白酶针状胃蛋白酶。沉淀再溶。沉淀再溶于于20%pH4的乙醇中，过滤，滤液用硫酸调的乙醇中，过滤，滤液用硫酸调pH至至1.8，在，在20放置，可得放置，可得板状或针状结晶板状或针状结晶。整理课件26（三）胰蛋白酶（三）胰蛋白酶胰蛋白酶是从牛、羊胰脏提取、结晶的冻干制剂。胰蛋白酶是从牛、羊胰脏提取、结晶的冻干制剂。易溶于易溶于水，不溶于氯仿、乙醇、乙醚等有机溶剂。在水，不溶于氯仿、乙醇、乙醚等有机溶剂。在pH1.8时，时，短时短时煮沸几乎不失活煮沸几乎不失活；在；在碱溶液中加热则变性沉淀，碱溶液中加热则变性沉淀，Ca2+有保护和

27、有保护和激活作用，激活作用，胰蛋白酶的胰蛋白酶的pI为为10.1。牛胰蛋白酶在牛胰蛋白酶在肠激酶或自身催化下，释放出肠激酶或自身催化下，释放出6肽肽，变成，变成有活有活性的胰蛋白酶性的胰蛋白酶。胰蛋白酶分子量。胰蛋白酶分子量24000，由，由223个氨基酸残基组个氨基酸残基组成。成。胰蛋白酶胰蛋白酶专一专一作用于由作用于由碱性氨基酸精氨酸及亮氨酸羧基所碱性氨基酸精氨酸及亮氨酸羧基所组成的肽键组成的肽键。酶本身。酶本身很容易自溶很容易自溶。整理课件272、生产工艺、生产工艺（1）工艺路线：）工艺路线：整理课件28（四）糜蛋白酶（四）糜蛋白酶（Chymotrypsin，EC3.4.4.5）胰蛋白酶

28、可胰蛋白酶可激活糜蛋白酶原激活糜蛋白酶原成成-糜蛋白酶糜蛋白酶。2、生产工艺、生产工艺整理课件29（五）尿激酶（五）尿激酶（Urokinase，EC3.4.99.26）尿激酶，是一种碱性蛋白酶。由肾脏产生，主要存在于人尿激酶，是一种碱性蛋白酶。由肾脏产生，主要存在于人及哺乳动物的尿中。人尿平均含量及哺乳动物的尿中。人尿平均含量56国际单位国际单位m1。1、组成（结构）性质、组成（结构）性质（1）尿激酶）尿激酶有多种分子量形式有多种分子量形式。尿中的。尿中的尿胃蛋白酶原尿胃蛋白酶原，在，在酸酸性条件下可以激活性条件下可以激活生成生成尿胃蛋白酶尿胃蛋白酶，把天然尿激酶降解成为把天然尿激酶降解成为尿

29、激酶尿激酶。（2）尿激酶是）尿激酶是专一性很强的蛋白水解酶专一性很强的蛋白水解酶，血纤维蛋白溶酶原血纤维蛋白溶酶原是它唯一的天然蛋白质底物是它唯一的天然蛋白质底物，它作用于，它作用于精氨酸精氨酸-缬氨酸键使纤缬氨酸键使纤溶酶原转为纤溶酶溶酶原转为纤溶酶。尿激酶也具有。尿激酶也具有酯酶活力酯酶活力。整理课件30（3）尿激酶的）尿激酶的pI为为pH89，主要部分在，主要部分在pH8.6左右。溶液状左右。溶液状态不稳定，态不稳定，冻干状态可稳定数年冻干状态可稳定数年。加入。加入1EDTA、人血白蛋、人血白蛋白或明胶可防止酶的表面变性作用。白或明胶可防止酶的表面变性作用。2、生产工艺、生产工艺（1）工

30、艺路线：）工艺路线：整理课件31（2）工艺过程：）工艺过程：硅藻土吸附硅藻土吸附，0.02氨水氨水加加0.1molL氯化钠氯化钠洗洗脱。脱。QAESephadex层析柱层析柱去热原、色素。去热原、色素。CMC浓缩浓缩。整理课件32（六）溶菌酶（六）溶菌酶（Lysozyme）溶菌酶，又称溶菌酶，又称胞壁质酶胞壁质酶或或N-乙酰胞壁质聚糖水乙酰胞壁质聚糖水解酶解酶。它广泛存在于鸟类和家禽的。它广泛存在于鸟类和家禽的蛋蛋清、哺乳动物清、哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿、乳汁、白细胞和组织（如的泪、唾液、血浆、尿、乳汁、白细胞和组织（如肝、肾）细胞内，其中以肝、肾）细胞内，其中以蛋清含量最丰富蛋清含量最丰

31、富。溶菌酶是一种溶菌酶是一种具有杀菌作用具有杀菌作用的的天然抗感染物质天然抗感染物质，具有具有抗菌、抗病毒、抗炎症抗菌、抗病毒、抗炎症。1、组成（结构）和性质、组成（结构）和性质溶菌酶是一溶菌酶是一碱性球蛋白碱性球蛋白，分子中，分子中碱性氨基酸、碱性氨基酸、酰氨残基及芳香族氨基酸（如色氨酸）比例很高酰氨残基及芳香族氨基酸（如色氨酸）比例很高。整理课件33溶菌酶能溶菌酶能催化粘多糖催化粘多糖或或甲壳素甲壳素中的中的N-乙酰胞壁酸乙酰胞壁酸和和N-乙酰氨基葡萄糖之间的乙酰氨基葡萄糖之间的-1，4糖苷键糖苷键。溶菌酶溶菌酶是一种罕见的稳定蛋白质是一种罕见的稳定蛋白质。在。在pH5.5加热加热4h后，

32、酶变得更活泼后，酶变得更活泼。低浓度的低浓度的Mn（10-7molL）在中性和碱性条件下能在中性和碱性条件下能使酶免受热的失活作用使酶免受热的失活作用。整理课件342、生产工艺、生产工艺（1）工艺路线）工艺路线整理课件35（七）超氧化物歧化酶（七）超氧化物歧化酶（SuperoxidedismutaseSOD）超氧化物歧化酶是一种超氧化物歧化酶是一种重要的氧自由基清除剂重要的氧自由基清除剂，作为药，作为药用酶在美国、德国、澳大利亚等国有产品，此酶属用酶在美国、德国、澳大利亚等国有产品，此酶属金属酶金属酶，它催化的化学反应是：它催化的化学反应是：由于由于SOD能能专一清除超氧阴离子自由基专一清除超氧阴离子自由基（O2-）；故引起国）；故引起国内外生化界和医药界的极大关注。目前内外生化界和医