第十一章 补体结合试验

1、第十一章第十一章 补体结合试验和补体结合试验和 补体测定技术补体测定技术永州职业技术学院永州职业技术学院 杨晓斌杨晓斌第一节第一节 补体结合试验补体结合试验CFT一一.原理原理根据任何抗原抗体复合物可激活、固着根据任何抗原抗体复合物可激活、固着补体的特性，用一定量的补体和致敏红补体的特性，用一定量的补体和致敏红细胞来检查抗原抗体间有无特异性结合细胞来检查抗原抗体间有无特异性结合的一类试验的一类试验 。 补体结合的经典途径激活物：补体结合的经典途径激活物：抗原抗原-抗体复合物抗体复合物即：特异性抗体（即：特异性抗体（IgG或或IgM）与抗原）与抗原结合形成的免疫复合物结合形成的免疫复合物CFTC

2、FT包括：试验系统和指示系统；有五种包括：试验系统和指示系统；有五种成分参与。成分参与。RBC溶血素待检系统AgAbC指示系统溶血反应不溶血Ag无Ab CRBC溶血素溶血阳性阴性结果二二. 技术要点技术要点因该实验反应成分多，每一反应成分含量过因该实验反应成分多，每一反应成分含量过多或过少都会导致错误结果，因此进行：多或过少都会导致错误结果，因此进行：n溶血素滴定溶血素滴定（溶血素太少，假阳性）（溶血素太少，假阳性）n补体滴定补体滴定 （补体过多，假阴性。补体过（补体过多，假阴性。补体过少，假阳性。）少，假阳性。）n抗原滴定抗原滴定 （抗原太少，假阴性）（抗原太少，假阴性）n正式试验正式试验三

3、三. . 方法评价方法评价1.优点优点：敏感度高，特异性强。反应结果易观察，不同物理性状的抗原均适用。不需特殊设备，宜推广。2. 缺点：缺点：操作复杂麻烦，补体易失活，待检血清或抗原中可能有抗补体成分。该实验优点多，缺点也突出。目前临床很少该实验优点多，缺点也突出。目前临床很少用。用。第二节第二节 补体活性的测定及临床意义补体活性的测定及临床意义血清总补体溶血活性（血清总补体溶血活性（CH50CH50）测定）测定 1.1.原理原理: : 绵羊红细胞（绵羊红细胞（SRBCSRBC），与相应抗体（溶血素）结合后，），与相应抗体（溶血素）结合后，可激活待检血清中的补体而导致可激活待检血清中的补体而导

4、致SRBCSRBC溶血。其溶血程溶血。其溶血程度与血清中补体的含量和功能有关。度与血清中补体的含量和功能有关。由于补体含量与由于补体含量与溶血程度之间呈正相关，但不是直线关系，而呈溶血程度之间呈正相关，但不是直线关系，而呈S S曲曲线关系，故通常取反应曲线中间部位即线关系，故通常取反应曲线中间部位即5050溶血溶血（CH50CH50）为判定终点。）为判定终点。由于抗原抗体复合物激活的是补体的经典途径，由于抗原抗体复合物激活的是补体的经典途径，C1C19 9任何一种成分缺陷都可使任何一种成分缺陷都可使CH50CH50降低，所以此实验反降低，所以此实验反映了总补体的活性。映了总补体的活性。 SRB

5、C+SRBC+溶血素溶血素 致敏致敏SRBC+SRBC+不同稀释度的待检血清（补体）不同稀释度的待检血清（补体）37C37C0 03030分分 以发生以发生50%50%溶血的实验管为终点管，则该管血清溶血的实验管为终点管，则该管血清中含有一个补体单位。中含有一个补体单位。补体总量计算：补体总量计算： 1 CH50CH50（u/mlu/ml）= = 稀释倍数稀释倍数 引起引起50%50%溶血管溶血管 血清量（血清量（mlml） 为什么要以为什么要以50% 50% 溶血作为判断终点？溶血作为判断终点？ 因为溶血程度和总补体活性间为因为溶血程度和总补体活性间为S S型曲线关系，型曲线关系，在在50%

6、50%溶血的附近（溶血的附近（30%30%70%70%），曲线最陡。补体），曲线最陡。补体量稍有变化，溶血程度会发生很大影响，即在量稍有变化，溶血程度会发生很大影响，即在30%30%70%70%溶血范围内能敏感反映补体含溶血范围内能敏感反映补体含量变化。因此，通常量变化。因此，通常以以50%50%溶血作为判断溶血作为判断终点，而不用终点，而不用100% 100% 溶血，因其相对不敏溶血，因其相对不敏感。感。2.技术要点：技术要点：（1 1）溶血素滴定：）溶血素滴定：（2 2）正式试验）正式试验（3 3）50%50%标准管的配制标准管的配制5%SRBC1ml 5%SRBC1ml 离心弃上清离心弃

7、上清 + + 蒸馏水蒸馏水0.5ml 0.5ml 红细胞全溶红细胞全溶 + 0.5ml1.8%NaCl+ 0.5ml1.8%NaCl混匀呈等混匀呈等渗渗 + 1ml5%SRBC+ 1ml5%SRBC混合混合 + + 巴比妥缓冲液巴比妥缓冲液0.5ml0.5ml混匀，混匀，即即50%50%溶血标准比色管。溶血标准比色管。 （4 4）结果观察：）结果观察： 肉眼观察和用分光光度计（肉眼观察和用分光光度计（542nm)542nm)测出与测出与50%50%溶血标准管最近的一管，求出总补体溶血活性。溶血标准管最近的一管，求出总补体溶血活性。 CH50（u/ml）= 1引起引起50%50%溶血管血清量（溶

8、血管血清量（mlml） 稀释倍数稀释倍数（5）计算：3.3.方法评价方法评价方法简便、快速。但敏感低、不能测定补体蛋白绝对值。 4. 临床意义：临床意义：（1 1）CH50 CH50 正常参考值正常参考值5050100100u u/ml/ml（2 2）CH50CH50异常异常 CH50CH50增高：急性炎症；组织损伤；恶性肿瘤增高：急性炎症；组织损伤；恶性肿瘤等。等。 CH50CH50降低：肾小球肾炎；系统性红斑狼疮活降低：肾小球肾炎；系统性红斑狼疮活动期；类风湿性关节炎；亚急性细菌性心内膜动期；类风湿性关节炎；亚急性细菌性心内膜炎；严重肝病炎；严重肝病尤其是肝坏死，可判断肝受损程尤其是肝坏死

9、，可判断肝受损程度。度。第三节第三节 补体组分检测补体组分检测一一.C3含量测定（单向琼脂扩散法）含量测定（单向琼脂扩散法）（也可用火箭电泳或免疫比浊法）（也可用火箭电泳或免疫比浊法） 原理及方法同前原理及方法同前临床意义：临床意义：正常参考值正常参考值 男：男：0.862.52g/L; 女：女：0.862.06g/L含量降低见于：反复感染、急性肾小球肾炎、含量降低见于：反复感染、急性肾小球肾炎、免疫复合物病、摸增生性肾小球肾炎免疫复合物病、摸增生性肾小球肾炎二二. C4活性测定活性测定1.原理：原理：去去C4血清（氨水处理的豚鼠血清）血清（氨水处理的豚鼠血清）+致敏绵羊红细致敏绵羊红细胞胞

10、红细胞不溶解红细胞不溶解+含有含有C4的待检血清的待检血清 红细胞溶解红细胞溶解 溶血程度与待检血清中溶血程度与待检血清中C4活性活性呈正相关。呈正相关。2.技术要点：技术要点：n制备无制备无C4的抗原抗体补体复合物（的抗原抗体补体复合物（EAR4) n 将待检血清稀释一系列倍数，加将待检血清稀释一系列倍数，加EAR4，孵育，孵育，观察溶血程度（方法同观察溶血程度（方法同CH50测定）测定）3. 3. 方法评价方法评价该方法要用新鲜该方法要用新鲜RBCRBC、溶血素、豚鼠血清、影响因素、溶血素、豚鼠血清、影响因素多。多。也可用平皿法：也可用平皿法： 用用EAR4EAR4制备琼脂板制备琼脂板 打

11、孔打孔 加样加样 以以溶血环直径大小判断溶血环直径大小判断C4C4活性。活性。 用免疫化学法检测用免疫化学法检测C4C4含量，简单、特异、重复性含量，简单、特异、重复性好，但不能反映其活性。好，但不能反映其活性。4.4.临床意义临床意义正常参考值：正常参考值：7898.677898.671893.40u/ml1893.40u/ml用于检测先天性补体缺乏；用于检测先天性补体缺乏；含量降低：遗传性血管性水肿、原发性混合性含量降低：遗传性血管性水肿、原发性混合性冷球蛋白血症冷球蛋白血症思考题思考题 1.1.简述补体结合试验的原理。简述补体结合试验的原理。2.2.补体结合试验如何观察结果？补体结合试验如何观察结