THP-单核细胞培养

1、这个是急性单核白血病细胞，悬浮的(如果养的时间很长了有的会贴壁)，培养基用普通的1640就可以了，这里是这个细胞株的详细资料供参考。THP-1:humanacutemonocyticleukemiaOrigin:establishedfromtheperipheralbloodofa1-year-oldboywithacutemonocyticleukemia(AML)atrelapsein1978;thecellscanbeusedforinductionofdifferentiationstudies;thecellsweredescribedtoproducelysozymeandtob

2、ephagocytic;carriest(9;11)(p21;q23)leadingtoMLL-AF9fusiongeneMorphology:round,singlecellsinsuspension,partlyinclustersMedium:90%RPMI1640+10%FBSSubculture:maintainat0.1-1.0x106cells/ml;split1:2to1:3every3-4days;seedoutatca.0.5x106cells/mlIncubation:at37Cwith5%CO2Doublingtime:ca.35-50hoursHarvest:satu

3、rationdensityatabout1.0x106cells/mlStorage:frozenwith70%medium,20%FBS,10%DMSOatabout5x106cells/mlMycoplasma:contaminationwaseliminatedwithCiprobay(ciprofloxacin),thennegativeinDAPI,microbiologicalculture,PCRassaysImmunology:CD3-,CD4+,CD13+,CD14(+),CD15+,CD19-,CD33(+),CD34-,CD68+,HLA-DR+Fingerprint:m

4、ultiplexPCRofminisatellitemarkersrevealedauniqueDNAprofileSpecies:confirmedashumanwithIEFofAST,MDH,NPCytogenetics:humannear-tetraploidkaryotype-94(88-96)<4n>XY/XXY,-Y,+1,+3,+6,+6,-8,-13,-19,-22,-22,+2mar,add(1)(p11),del(1)(q42.2),i(2q),del(p21)x2-4,i(7p),der(9)t(9;11)(p22;q23)i(9)(p10)x2,der(1

5、1)t(9;11)(p22;q23)x2,add(12)(q24)x1-2,der(13)t(8;13)(p11;p12),add(?18)(q21)-carriest(9;11)associatedwithAMLM5Viruses:ELISA:reversetranscriptasenegative;PCR:EBV-,HBV-,HCV-,HHV-8-,HIV-,HTLV-I/II-THP-1单核细胞是悬浮生长的细胞，用1640+10%FBS是很容易养的，但复苏的细胞可适当加量至20%FBS。国产与进口的血清都行。培养用的血清必须用胎牛血清，小牛血清中含有微量的胆红素对THP-1单核细胞影响较

6、大。培养基中最好能够加入足够的L-GLn和丙酮酸，以与非必需氨基酸，特别是前两者对于细胞的状态至关重要。尽量使用一次性培养瓶，如果没有条件，重复使用的培养瓶一定要洗干净，切记，切记，否则THP-1单核细胞吞噬杂质后很容易活化死亡。THP-1单核细胞喜欢酸性环境，记住这一点宁酸勿碱。倍增时间小于24小时。THP-1细胞可以传很多代，因此不要担心细胞活性问题，只要耐心与细心。我正在培养两种人B淋巴细胞，L721.221,Raji。对细胞状态好坏的鉴别有一点心得，希望和大家讨论。我们的配方是：（2x1000ml）RPMIMedium1640,10.4g,2x1袋L-Glutamine,2mmol/L

7、,2x300mg2-Mercapto-ethanol,50umol/L,2x3.9ulPyruvicacid,sodiumsalt,1mmol/L,2x110mgHepesFreeacid,-2x1.5gSodiumbicarbonate,-2x1.5gGentamyoinsulfateinjection,50U/ml,2x50000UDDW=>2x1000mlpH=>7.2立即，0.22um滤菌=>4度密封保存用前加10%NBS。一到两个月，需要往保存的1640中加原量的L-Glutamine（分解了）。长的好的细胞有下面几点特征：1.培养液：澄清，能很快变黄（5%CO2培

8、养箱，12h之内），说明增殖快2.低倍镜（10X10）:细胞透亮，晶晶亮”，大小均一，其中还有个别超级大个子”,是处于分裂前期的细胞，胞膜完整，不是细胞肿胀。3.低倍镜（10X10）:聚集悬浮生长的细胞，通常能看到一簇一簇的细胞群，应该就是一个个克隆”吧。4.低倍镜（10X10）:细胞容易悬浮，容易随培养液四处飘荡”，即使形成较大的细胞簇，也是飘飘荡荡”的。5.高倍镜（10X40）:大小钧一，形态规则，胞膜完整。长得不好的细胞正好与前面相反：1.培养液：有浑浊感，不变黄（几天甚至几星期都是红的），细胞根本不在呼吸代谢。2.低倍镜（10X10）:细胞黯淡无光，几乎看不到大个头”的细胞。3.低倍镜（10X10）:很少有小簇细胞群，（若是细胞密度过大造成细胞状态不好，只有很大的细胞群，