MMFSCNJ出口肉及肉制品中奥芬达唑残留量检验方法

1、MM_FS_CNJ_OO出口肉肉制品奥芬达嗖残留量气相色谱法MM_FS_CNJ_0086出口肉及肉制品中奥芬达口坐残留量检验方法1 .适用范围本方法适用于出口猪肉中奥芬达嗖残留量的检验。2 .原理概要试样经用碳酸钠碱化后，用乙酸乙酯及丙酮抽提。蒸发提取液至干，溶解残留物于正己烷中。正己烷溶液中的奥芬达嘤经液-液分配而进入磷酸溶液中。酸溶液经碱化后，再用乙酸乙酯提取。将乙酸乙酯层挥发至近干，残渣溶解于二氯甲烷并加到硅胶小柱中净化，用甲醇二氯甲烷洗脱。洗脱液挥发后，将残渣溶解于流动相中供HPLC测定。3 .主要试剂和仪器.主要试剂乙酸乙酯：重蒸储；丙酮：重蒸循：正己烷：重蒸储：甲醇：重蒸储；二氯甲

2、烷：重蒸储；无水乙醇；无水硫酸钠：650E灼烧4h，贮于密闭容器中备用；碳酸钠溶液：1mol/L。溶解106g无水碳酸钠于1L水中；磷酸溶液：1mol/L。将磷酸85%密度（p）约ml用水稀释至1L;氢氧化钾溶液：10mol/L。溶解560g氢氧化钾于水中，用水稀释到1L;磷酸镂缓冲液：L,pH。溶解磷酸二氢镂（NH4H2PC4）于约950mL水中，用稀氨水调节pH至，并用水稀释到1L（临用时现配）；HPLC流动相：甲醇.磷酸镂缓冲液（55+45）；奥芬达嗖标准品：纯度99%奥芬达嗖标准溶液：准确称取10mg奥芬达嗖标准品，溶于10mL二甲基亚碉，制成浓度为mL的标准储备液。根据需要再用甲醇稀

3、释储备液成适当浓度的标准工作溶液。.仪器液相色谱仪：配有紫外检测器；旋转蒸发器；均质器；离心瓶：250mL；pH计；全玻璃系统蒸镭装置；sep-Pak硅胶小柱；过滤器：Pmo4 .试样的抽取与制备.检验批以不超过2500件为一检验批。同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。.抽样数量批量，件最低抽样数，件1252610051012501025150050110001510012500.抽样方法17按规定的抽样件数，随机抽取，逐件W开启。从每件中取一袋作为原始样品，原始样品总量不少于2kg，放入清洁容器内，加圭寸后，标明标记，及时送交实验室。如每件中无小包装，或有小包装

4、但每袋重量超过2kg者，可用经灭菌的锋利刀，在抽出的包件中，每件割取不少于100g,混合后置于洁净容器内，作为混合原始样。混合原始样的重量不少于2kg。加圭寸后，标明标记，及时送交实验室。.试样制备从所取全部样品中取出有代表性样品约1kg，经组织捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器内作为试样。加圭并标明标记。.试样保存将试样于一18C以下冷冻保存。注：在抽样及制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。5 .过程简述.提取称取10g试样(精确至于250mL离心瓶中，加5mL碳酸钠溶液(1mol/L)和150mL乙酸乙酯，高速匀浆5min。再加80g无水硫酸钠，继续

5、匀浆1min(低速)。于2500r/min离心1min，再将乙酸乙酯层通过滤纸滤入旋转蒸发瓶中。加150mL丙酮到离心瓶中，再低速匀浆提取23min。将丙酮提取液再通过滤纸滤入旋转蒸发瓶中。用10mL无水乙醇洗涤滤纸，将洗液并入滤液中。于50°C水浴上旋转浓缩至干。净化用10mL正己烷溶解残渣，将溶液移到125mL分液漏斗中。用10mL正己烷洗涤蒸发瓶，洗液并入分液漏斗中。然后用2X10mL磷酸溶液(1mol/L)洗涤蒸发瓶，洗液全部并入分液漏斗中。剧烈振摇提取2min，静置10min，使分层。将下层磷酸溶液转入第二个125mL分液漏斗中。再用10mL磷酸溶液(1mol/L)提取正己

6、烷层两次，将磷酸提取液全部并入第二个分液漏斗中。加10mL正己烷到磷酸提取液中，振摇洗涤30s。将磷酸提取液放入100mL的烧杯中，用约9mL氢氧化钾溶液(10mol/L)小心地调节pH到(±。在碱化时，应将烧杯置于冰浴中，并用pH计测pH值。将烧杯中的溶液转入250mL分液漏斗中，用总量为50mL的乙酸乙酯分数次洗涤烧杯，洗液全部转入分液漏斗中。剧烈振摇提取2min,静置分层。将水相放入100mL烧杯中，然后将乙酸乙酯层通过衬有玻璃棉和约40g无水硫酸钠的漏斗滤入250mL旋转蒸发瓶中。将烧杯中的水溶液倒回分液漏斗中，再用50mL乙酸乙酯如法提取一次。弃去下层水溶液，将乙酸乙酯层通

7、过无水硫酸钠漏斗并入同一旋转蒸发瓶中。用25mL乙酸乙酯洗涤无水硫酸钠漏斗，洗液并入蒸发瓶中。置旋转蒸发器上（50C水浴）将提取液挥发至干。用3mL二氯甲烷溶解残渣。用2mL二氯甲烷预淋硅胶小柱，然后将上述二氯甲烷样液倒入硅胶柱中，用3mL二氯甲烷洗涤蒸发瓶两次，洗液也倒入硅胶柱中，弃去流出液。以5mL二氯甲烷洗涤硅胶柱，弃去流出液。用5mL甲醇二氯甲烷（1+3）洗脱柱上奥芬达嗖，收集洗脱液于试管中。通氮气流将洗脱液挥发至干。准确加入流动相以溶解残渣，溶液通过Pm过滤器过滤后，供HPLC测定。HPLC测定液相色谱条件色谱柱：LichrosorbrP18，25cmX（内径），53m粒径），或相当

8、者；保护柱：LichrosorbrP18，3cmX（内径），5口m粒径），或相当者；HPLC流动相：甲醇.磷酸镂缓冲液（55+45）；检测波长：298nm流速：min；进样量：50口L。测定根据样液中被测兽药含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作液和待测样液中奥芬达嗖的响应值均应在仪器检测的线性范围内。标准工作液与样液应等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，奥芬达嗖的保留时间约为；标准品的色谱图见附录A中图A1。,空白试验除不称取试样外，均按上述测定步骤进行。6.结果计算用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中奥芬达嗖的残留含量：式中：X试样中奥芬达口坐残留含量，mg/kg；h样液中奥芬达嗖的色谱峰高，mmhs标准工作液中奥芬达嗖的色谱峰高，mmc标准工作液中奥芬达嗖的浓度，Pg/mL；V样液最终定容体积