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文档简介

1、实验三实验三 琼脂免疫电泳实验琼脂免疫电泳实验实验目的实验目的 了解免疫电泳的原理和用途。 掌握免疫电泳的操作过程和方法。 掌握免疫电泳实验结果的分析方法，并对粗提的蛋白进行检测。 免疫电泳为区带电泳与双向免疫扩散的结合。先利用区带电泳技术将不同电荷和分子量的蛋白抗原在琼脂内分离，然后在与电泳方向平行的方向上开槽，加入抗血清。37下使两者扩散，各区带蛋白在相应的位置与抗体反应形成弧形沉淀线。免疫电泳原理图解见图。实验原理实验原理免疫电泳原理图解实验材料：牛血清粗提蛋白琼脂糖巴比妥缓冲液PH8.6，离子强度0.05）兔抗牛血清（1配制配制1.2的琼脂，加热使之融化。的琼脂，加热使之融化。 （巴比

2、妥缓冲液配制）（巴比妥缓冲液配制）（2吸取吸取34 mL琼脂溶液，均匀涂布到载玻片上，注意琼脂溶液，均匀涂布到载玻片上，注意要马上用吸管尖把琼脂表面整平，若有气泡立刻除去，并立要马上用吸管尖把琼脂表面整平，若有气泡立刻除去，并立即于中间横放一根毛细管，待凝，制成即于中间横放一根毛细管，待凝，制成2mm的琼脂板。的琼脂板。（3取打孔器在图示的位置打孔图），此二孔位置要对称。取打孔器在图示的位置打孔图），此二孔位置要对称。于酒精灯上小心烘烤，使琼脂与玻璃板贴紧。于酒精灯上小心烘烤，使琼脂与玻璃板贴紧。操作步骤操作步骤2mm2mm图2 胶板打孔及挖槽示意图（4用微量加样器加入用微量加样器加入1020

3、uL的粗提蛋白的粗提蛋白和牛血清和牛血清 ，不要溢出可加入指示剂），不要溢出可加入指示剂） 。（5把载玻片放到电泳槽中，倒入巴比妥缓冲液，把载玻片放到电泳槽中，倒入巴比妥缓冲液，琼脂板两端用滤纸与缓冲液搭桥，接通电源，电压琼脂板两端用滤纸与缓冲液搭桥，接通电源，电压10-12v/cm电泳电泳1-2h。（6样品中有蓝色染料，当蓝色接近另一端时，终样品中有蓝色染料，当蓝色接近另一端时，终止电泳，小心取出载玻片。止电泳，小心取出载玻片。（7用刀片在胶体的中央，划两道平行线。刀刻要用刀片在胶体的中央，划两道平行线。刀刻要深及底部，两道平行线间隔不可大于深及底部，两道平行线间隔不可大于3 mm。用大。用大头针挑去琼脂。头针挑去琼脂。（8加入人全血清，放入湿盒中，加入人全血清，放入湿盒中，37 下扩散下扩散24h。本卷须知本卷须知（1浇载玻片时，玻片应保持水平，琼脂 面要尽量铺平。（2加样应一次加满，并防止样品溢出孔 外。（3电泳过程中注意防止发热，以免影响 电泳结果。（4电泳时要使滤纸与凝胶密切接触， 不可有缝隙。思考题思考题（1画出沉淀线的形态、数量和位置，并予以简要说明。（2与相关的免疫学试验进行比较，探讨免疫电泳的主要优点。 PH8.6巴比妥缓冲液配制：巴比妥缓冲液配制： 巴比妥酸巴比妥酸 0.92g -100

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