高效液相色谱法测定头孢氨苄片中头孢氨苄的含量

1、高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊中头孢氨苄的含量姓名:苏鹤桂学号:2006038068【摘要】 ：介绍一种用高技液相色谱法剐定头孢氨苄腔囊含量的方法。方法：以Shlm-packCLC-OD8(150 mm×6 mm，10 um)为色谱柱，甲醇一水(70：30)为流动相，检测波长为262 nm，外标法定量：结果：头袍氨苄浓度线性范围为1009O0ug/ml,相关系数r=0 999 9方法回收率为99 7 ，RSD 为0 89。结论：方法简便快速，结果准确可靠，可作为头孢氨苄制剂的质量控制方法：【关键词】 高效液相色谱法；复方头孢氨苄【Abstract】 Establishes the H

2、PLC to measure the compound cephalexin tablets determination of cephalexin. Method: Uses the C18 column, a methanol to water a 3.86 percent solution of sodium acetate a 4 percent acetic acid (700:300:15:3). Flow rate of 0.8 mL / min, UV detection at 254 nm. Result: cephalexin 20 concentration in a 2

3、00 g / mL and within the framework of the peak area is linear, the correlation coefficient r = 0. 99950.9998. Conclusion: The method is rapid, simple accurate, can be used for the preparation and stability of the finished product quality control.【Key Words】high-performance liquid chromatography (HPL

4、C); compound cephalexin复方头孢氨苄胶囊由头孢氨苄和甲氧苄啶两种成分制成，由于二者合用可双重阻断细菌在生长繁殖过程中细胞壁及菌体内核酸、蛋白质合成，从而显示较好的抗菌作用，其抗菌作用相当于倍量头孢氨苄。由于原有的含量测定方法(容量分析法)较为繁复，不便于操作，故试用高效液相色谱法（HPLC法）测定复方头孢氨苄片中头孢氨苄的含量，结果满意，可用于控制其质量。1. 仪器与试药仪器：DIONEX P680AISO型高效液相色谱仪(Dionex Softron GmbH,GERMANY)、UVD17OU型HPLC检测器(Dionex Softron GmbH,GERMANY)、X

5、S 225A分析天平(Precisa Instruments Ltd. /Switzerland)试药：色谱纯、分析纯的甲醇，双蒸水。头孢氨苄对照品（中国药品生物制品检定所），头孢氨苄胶囊（福建古田药业有限公司 批号081023 标示量0.125 g/片）2. 方法与结果2.1 色谱条件与系统适应性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱 Dikma Technologies DiamonsilTM C18, 5m, 250×4.6mm）；水-甲醇-3.85%醋酸钠溶液-4%醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相；检测波长为254nm；理论塔板数按头孢氨苄峰计算不低于1500

6、；流速：1 ml.min-1。2.2 对照品储备液的制备 取头孢氨苄对照液10 mg，精密称定，置10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。2.3 供试品溶液的制备取本品10个胶囊，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于头孢氨苄0.1 g），置100 ml容量瓶中，加流动相适量，充分振摇使溶解，再加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 ml置10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。2.4 阴性空白溶液的制备：按头孢氨苄胶囊的制备工艺制备缺主药的模拟胶囊，按照“供试品溶液的制备”项下所制备得出的溶液作为阴性空白溶液。2.5 专属性试验在上述色谱条

7、件下，分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性空白溶液各10 l进样，记录色谱图，观察样品峰的保留时间是否有杂峰。2.6 仪器精密度试验精密量取对照品储备液1.0 ml 置10 ml量瓶中，加流动相至刻度（即线性关系考察中的第三个对照品溶液），重复进样5次，每次10 l，在上述色谱条件下进行分析，计算峰面积的RSD，要求RSD不大于2%。表格 1 精密度实验结果测定次数峰面积ARSD%116.531.13216.68316.93416.88516.982.7 方法重复性实验取主药粉末5份精密称定，按照“供试品溶液的制备”项，平行制备样品溶液5份，按样品测定方法测定，算出头孢氮苄峰面积的RSD，要求

8、RSD不大于2%。表格 2 重复性试验结果测定次数取样量（g）峰面积ARSD%10.147618.618.4420.147016.3630.148815.4940.147617.7250.147115.402.8 线性关系考察依次精密量取对照品储备液0.2 ml、0.5 ml、1.0 ml、1.5 ml 、2.0 ml分别置于10 ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，各进样10 l，记录色谱图。以进样浓度（g /ml）为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。以峰面积A对浓度C回归，得回归方程。所得标准曲线如下图：结果表明，头孢氨苄浓度在20-200 g/mL范围内与峰面积有良好线性关系。相关

9、系数 r=0.9993，符合要求。2.9 加样回收率试验采用加样回收法，精密称取 9 份已知含量的同批号头孢氨苄胶囊样品（约相当于头孢氨苄0.05 g）置于10 ml容量瓶中，精密称定，再分别精密称取头孢氨苄对照品 0.625 g ，置 25 ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别精密量取 1 ml，2 ml，3 ml，各三份，加到上述供试品中，按“供试品溶液的制备”项操作制备溶液，按上述色谱条件测定，记录色谱图，按以下公式计算回收率：回收率%=（测定平均值-本底量）/加入量×100%其中本底量为加入流动相的量，加入量为加入对照品和供试品的量。2.10稳定性试验取同一供试品溶液

10、，分别于0，2，4，6，8 h进样，各进样10 l，记录色谱图，峰面积若小于±1.0，则样品溶液稳定性较好。2.11方法耐用性考察分别使用不同流动相组成、不同流动相pH值、不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱、不同柱温和不同流速等，对同一批样品进行测定，观察其结果是否一致。2.12样品含量测定分别取对照品溶液和供试品溶液各10 l，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积外标法计算含量。表格 3 样品含量测定结果测定次数取样量（g）平均重量（g）峰面积A标示量%10.14760.147118.61110.420.147016.3697.530.148815.4991.140.147617.7

11、2105.150.147115.4091.7 3、讨论本次实验由于时间关系,只做了精密度试验、重复性实验及线性与范围（即标准曲线）。1、线性关系考察：本次实验配置5个浓度的对照品溶液,范围在20g/ml200g/ml内。测定各个浓度的峰面积，以浓度（g·ml-1）为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。得回归方程A=0.1539c+1.061,相关系数r=0.9993。结果表明头孢氨苄浓度在20 g/mL200 g/mL范围内与峰面积有良好线性关系。 2、仪器精密度：本实验采用对照品溶液(线性关系中第三个溶液)重复进样5次，进行仪器精密度的考察。实验结果显示，RSD值为1.13%，符

12、合RSD小于2%的要求。证明仪器精密度良好。 3、重复性试验：本实验共制备5份供试品溶液，各吸取10L连续进样进行重复性试验。实验结果表明RSD值为8.44%，不符合RSD小于2%的要求，重复性实验较差。说明在制备溶液过程中存在较大的操作偏差，而且在测定供试品色谱图时也存在操作不熟练或者不规范的现象以及进样误差等问题。在以后的试验中应该加以改正。4、样品含量测定：本实验是利用外标法中标准曲线法对头孢氨苄胶囊中头孢氨苄的含量进行测定。此法优点在于不需要知道校正因子，只要被测组分全部出峰、无干扰、保留时间适宜，就可以进行定量分析。而且操作简单、快捷，应用非常广泛。本次实验结果不是十分理想，说明在制备溶液过程中存在较大的操作偏差，而且在测定供试品色谱图时也存在操作不熟练或者不规范的现象以及进样误差等问题。在以后的试验中应该加以改正。参考文献1 龚道芬，邱海蕴.