菊花的组织培养综述

1、课题一课题一 菊花的组织培养菊花的组织培养有丝分裂有丝分裂受精卵受精卵 在个体发育中，由一个在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在或一种细胞增殖产生的后代，在形态、结构和生理功能上发生稳形态、结构和生理功能上发生稳定性差异的过程。定性差异的过程。一、知识回顾 黑色素细胞在体外培养黑色素细胞在体外培养3030多代后仍能合多代后仍能合成黑色素；离体培养的上皮细胞，始终保持成黑色素；离体培养的上皮细胞，始终保持为上皮细胞，而不会变成其他类型的细胞。为上皮细胞，而不会变成其他类型的细胞。 细胞分化发生在整个生命进程中。细胞分化发生在整个生命进程中。 造血干细胞造血干细胞 原红细胞原红细胞 早

2、幼红细早幼红细胞胞 中幼红细胞中幼红细胞 晚幼红细胞晚幼红细胞 成成熟红细胞熟红细胞 死亡死亡4 4、普遍性、普遍性 细胞分化是细胞分化是否意味着细胞否意味着细胞中遗传物质的中遗传物质的改变？改变？ EDCA BEDCA BEDCA BEDCA B基因基因 红细胞红细胞合成血红蛋白合成血红蛋白 ( (不合成肌动蛋白不合成肌动蛋白) )肌细胞肌细胞肌动蛋白基因开启肌动蛋白基因开启合成肌动蛋白合成肌动蛋白 ( (不合成血红蛋白不合成血红蛋白) )肌动蛋白基因关闭肌动蛋白基因关闭血红蛋白基因关闭血红蛋白基因关闭血红蛋白基因开启血红蛋白基因开启 细胞产生了不同种类的蛋白质细胞产生了不同种类的蛋白质即出

3、现了不同的结构和功能即出现了不同的结构和功能愈伤组织愈伤组织胚状体胚状体19581958，美国，斯图，美国，斯图尔德尔德 植物组织培养植物组织培养离体二、基础知识二、基础知识（一）植物组织培养概念关键词：关键词： 外植体、脱分化、再分化、愈伤组织外植体、脱分化、再分化、愈伤组织 在在无菌无菌和和人工控制人工控制条件下，将离体的条件下，将离体的植物植物器官、组织、细胞器官、组织、细胞，培养在人工配置，培养在人工配置的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其脱分化产生愈伤组织再分化形成丛芽，其脱分化产生愈伤组织再分化形成丛芽，最终形成最终形成完整的植株完整的植株。又

4、称：又称：植物离体培养植物离体培养脱分化（或去分化）脱分化（或去分化）：由高度分化的植物组由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。织或细胞产生愈伤组织的过程。再分化再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官的过程。养，又可以重新分化成根或芽等器官的过程。外植体外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段用于离体培养的植物器官或组织片段。愈伤组织愈伤组织：细胞排列疏松、无规则、高度液：细胞排列疏松、无规则、高度液泡化的无定形的薄壁细胞。泡化的无定形的薄壁细胞。切取切取形成层形成层无菌无菌接种接种诱导愈伤组织诱导愈伤组织的形成的形成试管

5、苗的形成试管苗的形成培养室培养室移栽移栽脱分化脱分化再分化再分化（二）植物组织培养的基本过程（二）植物组织培养的基本过程（三）植物组织培养的理论基础-细胞全能性n概念概念：高度分化的植物细胞，仍然具有发育：高度分化的植物细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。成完整个体的潜能。n基础基础：生物体的每一个细胞都包含有该物种：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质。所特有的全套遗传物质。n表达条件表达条件：离体条件：离体条件 无菌操作无菌操作 适宜物质的诱导和调节（植物激素）适宜物质的诱导和调节（植物激素） 适宜的营养物质适宜的营养物质 温度、酸碱度、光照等条件的控制温度、酸碱度、光照等

6、条件的控制思考思考这个试验说明了已经分化的细胞核这个试验说明了已经分化的细胞核具有什么特性？具有什么特性？高度分化的动物体细胞的细胞高度分化的动物体细胞的细胞核有发育成完整个体的潜能核有发育成完整个体的潜能对比：多利羊的诞生对比：多利羊的诞生动物细胞有没动物细胞有没有这种能力？有这种能力？已经分化的细胞，仍然具有发育成已经分化的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。完整个体的潜能。细胞全能性细胞全能性思考思考为什么已经分化的细胞具有全能性呢？为什么已经分化的细胞具有全能性呢？高度分化的细胞含有保持物种发育高度分化的细胞含有保持物种发育所需要的所需要的全套基因全套基因植物组织培养技术植物组织培养技

7、术动物的克隆技术动物的克隆技术三、影响植物组织培养的因素n1、材料的种类、年龄及保存时间长短等、材料的种类、年龄及保存时间长短等n2、营养、营养n3、植物激素、植物激素n4、PH、温度、光照等条件、温度、光照等条件不同植物的组织培养难度不同不同植物的组织培养难度不同同一种植物材料，同一种植物材料，C C、H H、O O、N N、P P、K K、CaCa、MgMg、S S无机盐无机盐萧县郝集中学MSMS固体培养基成分及比例固体培养基成分及比例讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同答：答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需微量元

8、素和大量元素提供植物细胞生活所必需的的无机盐无机盐；蔗糖提供；蔗糖提供碳源碳源，同时能够维持细胞的，同时能够维持细胞的渗渗透压透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求特殊营养需求。 微生物培养基以微生物培养基以有机营养有机营养为主。与微生物的培为主。与微生物的培养不同，养不同，MSMS培养基则需提供大量培养基则需提供大量无机营养无机营养，无机盐，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。大类。作

9、用：2，4D有利于愈伤组织的生长； IAA、NAA、IBA有利于器官分化。作用：促进细胞的分裂与分化，其中KT能 明显促进芽的分化而抑制根的形成。作用：促进不定芽和幼株伸长。供参考的配方供参考的配方n 1 1、诱导菊花愈伤组织：、诱导菊花愈伤组织：n 在在MSMS培养基中加入培养基中加入BABA和和NAANAA，质量浓度均为，质量浓度均为0.5mg0.5mgn 、诱导菊花从芽、诱导菊花从芽：n 在在MSMS培养基中加入培养基中加入BABA和和NAANAA，质量浓度分别为，质量浓度分别为2-2-3mg3mg和和0.020.03mg0.020.03mgn 3 3、诱导菊花生根：、诱导菊花生根：n

10、在在MSMS培养基各成分用量减半，并添加入培养基各成分用量减半，并添加入NAANAA或或IAAIAA，质量浓度均为，质量浓度均为0.1mg0.1mg制备制备MS固固体培养基体培养基外植体消毒外植体消毒 接种接种 培培 养养栽栽 培培四、实验操作四、实验操作 移移 栽栽冲洗冲洗酒精酒精无菌水冲洗无菌水冲洗氯化汞氯化汞无菌水冲洗至少三无菌水冲洗至少三次之上次之上配制各种母液配制各种母液配制培养基配制培养基灭菌灭菌正常苗正常苗污染苗污染苗1、外植体带菌、外植体带菌2、培养基及接种、培养基及接种器具灭菌不彻底器具灭菌不彻底3、接种操作时带入、接种操作时带入4、环境不清洁、环境不清洁污染途径污染途径珍珠

11、岩珍珠岩 ,珍珠岩是一种火山喷发珍珠岩是一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧冷却而成的酸性熔岩，经急剧冷却而成的玻璃质岩石，有弧形或圆形的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，如珍珠的结构，所以被裂隙，如珍珠的结构，所以被命名为珍珠岩命名为珍珠岩 。蛭石蛭石是一种天然、无毒的矿物质，是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。它在高温作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。酸盐。 1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精

12、、酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现在整个操作过程中，是如何来实现无菌无菌环境的？环境的？结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析（一）对接种操作中污染情况的分析（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（三）是否进行了统计、对照与记录（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽是否合格（四）生根苗的移栽是否合格营养繁殖营养繁殖扦插扦插嫁接嫁接压条压条 扦插扦插嫁接嫁接压条压条 练习练习1.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况的重要条件之一。生