第二红细胞血型系统检测

1、第一章红细胞血型系统主讲马丽Blood type临床检验学教研室授课内容ABO血型系统Rh血型系统其他血型系统Blood type临床检验学教研室第二章红细胞血型检查主讲马丽Blood type临床检验学教研室输血前免疫血液学检查输血前检查的目的和要求目的:供者和受者血液是否“相容”,血液在受血者体内能否有效存活,有无不良反应要求：输入的RBC在受血者体内不凝集和溶血，输入血浆成份不导致患者红细胞破坏。Blood type临床检验学教研室输血前检查的内容受者病史和标本等检查、核对及处理ABO和Rh定型抗体筛选和鉴定交叉配血试验贴和发血Bloodtype临床检验学教研室一、受血者病史标本的检查、

2、核对、处理1.病史资料和个人信息：（Ag残留，Ab产生）受血者的姓名、种族、史、临床诊断、输血史（近3月）、妊娠史、特别是以往输血反应的等。Blood type临床检验学教研室2.标本要求标本必须鉴定和标记，确实无误，标本留取时间<24h；标本正确，符合患者血液的体内状态;防止血样稀释，溶血标本不能使用；血清、血浆均可作检查，但血清干扰因素少； 反复输血患者应抽取新标本作配血试验；肝素治疗患者，应加硫酸鱼精蛋白对抗，使标本凝结。 右旋糖酐、pvp等治疗，先洗涤RBC再配血输血后标本物应妥善保存28，至少一周。Blood type临床检验学教研室二、受血者和供血者的ABO血型鉴定(IgM)

3、+ Ag(RBC)_介质凝集原理：Ab正定型(检查Ag)反定型(血清Ab ）Bloodtype临床检验学教研室RBC凝集反应含义：不同血型的血液混合在一起，RBC成簇的现象。在补体的参与下发生溶血，本质：抗原抗体反应。Blood type临床检验学教研室实验技术及方法盐水介质实验技术p44实验技术微柱凝集实验技术p53盐水凝集法凝胶微柱法正定型（forward 反定型（reverse鉴定方法grouping）grouping）Bloodtype临床检验学教研室正定型（forward grouping）标准血清(Ab)+RBC(Ag)_介质_凝集Blood type临床检验学教研室已知反定型及意

4、义反定型:标准RBC(Ag)+血清(Ab)-介质-凝集复检正定型结果的准确性，纠正漏检，误检发现亚型（正定型AB2误定为A）不规则抗体纠正疾病导致的红细胞抗原弱，定型错误排除获得性抗原和冷凝集现象对定型的干扰Bloodtype临床检验学教研室1.盐水介质试验技术Ab (IgM)_盐水凝集原理：Ag(RBC)+应用：血型鉴定，IgM抗体筛查鉴定，盐水介质交叉配血方法：试管法、玻片法、微孔板法Bloodtype临床检验学教研室基本方法试管法：离心增加凝集，反应时间短,可发现亚型或弱抗原抗体反应,用于常规检查方法。定型,玻片法：简单，时间长，普查，亚型抗原弱、弱凝集易忽略，不时宜反定型。微孔板法Bl

5、ood type临床检验学教研室试验结果阳性：红细胞出现凝集反应或溶血：红细胞呈现游离混悬状态Blood type临床检验学教研室血型结果Blood type临床检验学教研室ABO血型定型正向定型反向定型结果抗A-+-+抗B-+抗A,B+A细胞+-+-B细胞+-O细胞-O A BABBloodtype临床检验学教研室2.微柱凝集试验技术Ab (IgM)_凝胶凝集原理Ag(RBC)+（亲和效应 筛效应）种类：中性凝胶、特异性凝胶、抗人球蛋白凝胶结果：肉眼观察或血型分析仪优点：灵敏、准确、特异、标准化、微机化管理不足：特殊试剂，成本高。Blood type临床检验学教研室试验原理亲合效应：红细胞抗

6、原与相应抗体结合筛效应：低速离心，凝集红细胞因体积大，红细胞被阻滞不通过凝胶层，而悬浮在凝胶中，即阳性反应。而未被抗体结合的红细胞体积小，通过凝胶层沉于凝胶底部形成“细胞扣”即反应。Blood type临床检验学教研室微柱凝胶法血型检测的意图反应腔凝胶分离柱Blood type临床检验学教研室试验结果Blood type临床检验学教研室正反定型不符合处理的基本程序重新标本，重复试验询问病史，洗涤红细胞应用抗-AB、抗A1、抗-H检测红细胞分析O型筛选细胞检测结果，排除同种异型或自身抗体影响Bloodtype临床检验学教研室ABO血型鉴定责任事故技术事故抗原抗体其他BloodtypeBlood

7、type临床检验学教研室ABO定型试验中常见的问题1.技术和管理错误主要，包括：标本或试剂错误，假阳性或假器材不清洁，假阳性结果。试剂污染或失效，假阳性或假离心过度或不足，假阳性或假结果。结果。结果Bloodtype临床检验学教研室ABO定型试验中常见的问题1.技术和管理错误主要，包括：漏加试剂，假结果。细胞与血清比例不适，假阳性或假阳性反应产生溶血现象未能识别，假结果。结果结果。结果或错误，假阳性或假Bloodtype临床检验学教研室ABO定型试验中常见的问题2.血清异常氏胶或血清蛋白异常引起串钱状形成，影响反定型结果。3.红细胞致敏在含高蛋白介质的试剂中可发生凝集，产生假阳性结果。4.异常

8、型ABO亚型的弱抗原难以检结果。出，产生假5.近期输血异型输血，血液含不同型别的红细胞混合物，定型显示“混合外观凝集”现象。Bloodtype临床检验学教研室ABO定型试验中常见的问题6.嵌合体血型体内有两群红细胞，定型时显示“混合外观凝集”现象。7.疾病因素导致抗原减弱原受到抑制。白血病血型抗8.红细胞多凝集现象红细胞因遗传或获得性的表面异常（细菌）。9.获得性类B由于革兰氏杆菌的作用，红细胞可获得“类B”的活性。10.近期内进行大量的血浆置换治疗，影响抗体效价，造成反定型临床检验学教研室。BloodtypeABO定型试验中常见的问题11.异常的血浆蛋白白比例和高浓度的异常的白蛋白、球蛋蛋白

9、原等能导致缗钱状形成，造成假凝集现象。12.不规则抗体的存在受检者血浆中，含有ABO血型抗体以外的不规则抗体，与试剂A、B细胞上的相应抗原起反应。13、低丙种球蛋白血症使血清定型时不见凝集或仅见弱凝集反应。Bloodtype临床检验学教研室ABO定型试验中常见的问题14、红细胞15、由母亲等因素造影剂、右旋糖酐引起而类似凝集。因素在未产生抗体的婴儿、获得抗体的婴儿，或抗体水平下降的老人，试验时可出现异常结果。Bloodtype临床检验学教研室病例患者女，李×芝，39岁，农民，因肌瘤行次全切除术。术前血型鉴定：A型。Hb110g/L。术中失血约400mL，手术结束时输A型新鲜全血400

10、mL。输血后约10分钟，患者寒战、腰痛、发热39，1.5小时后排出酱油色尿，手术切口渗血不止，即按急性溶血反应治疗，再次核定血型为B型。2天后出现急性肾功能衰竭。3天后，死于转院途中Blood type临床检验学教研室分析：医护误将39岁看成39床，错用39床的血标本测定血型并作配血试验。39床血型为A型，女，李×。实际上，患者为28床，血型为B型。引发抗原抗体间的免疫性反应，患者急性溶血，肾功能衰竭而定论：责任事故所致的溶血性输血反应。意见：重视输血质量管理，临床检验学教研室及对症治疗Blood type思考若患者输血后一周才发病还考虑是急性溶血性输血反应？慢性溶血性输血反应的抗原

11、、抗体类型有哪些？应对措施和处理原则Blood type临床检验学教研室三、Rh血型鉴定1.抗D标准血清鉴定（临床）Rh阳性凝集抗D血清+受者RBCR反之2.抗C、c、D、E、e血清鉴定（分型）Blood type临床检验学教研室三、Rh血型鉴定2.抗C、c、D、E、e血清鉴定（分型）分型鉴定应用：家系，父权鉴定，产前筛查，交叉配血发现不规则抗体Bloodtype临床检验学教研室Rh血型鉴定方法p实验技术Coombs、蛋白酶、凝聚胺法低离子强度盐水人源盐水介质抗D实验微柱凝胶法Blood type临床检验学教研室抗人球蛋白（Coombs）试验技术抗人免疫球蛋白自身抗体直接Coombs试验Blo

12、odtype临床检验学教研室抗人球蛋白（Coombs）试验技术同种异型抗体抗人免疫球蛋白间接Coombs试验间接Coombs试验Blood type临床检验学教研室（Coombs）试验原理Coombs试验：是利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，与红细胞表面抗原结合的特异抗体连接，使红细胞凝集。包括两类方法。直接试验：是检查红细胞上有无全抗体间接试验：是检查血清中游离的全抗体Bloodtype临床检验学教研室直接法患者体内发生+RBCRBC为Rh+7S的IgG抽血作用：检测RBC表面结合的全抗体和补体。意义：HDN和AIHA，免疫性溶血性输血反应其他溶血性疾病。抗IgGBlood type临床检验学教

13、研室间接法血清全抗体RBC为Rh+体外测试+作用：检测游离在血清中的全抗体。抗IgG临床意义：交叉配血、血型鉴定，抗体检测及鉴定。Blood type临床检验学教研室Coombs）试验影响因素抗体的结合力孵育时间和温度抗原抗体比例洗涤体外补体致敏Blood type临床检验学教研室2.酶处理实验技术原理：破坏RBC表面唾液酸，降低负电荷；改变RBC结构，隐蔽抗原位点。Bloodtype临床检验学教研室酶试验技术分类一步法：直接酶试验抗原抗体混合后加入酶，引起特异性凝集。 方法简便，时间较长，敏感性较二步法试验差。二步法：间接酶试验可以事先将红细胞用酶处理，增加抗原性，再 加入抗体，抗原抗体特异

14、性凝集。速度快，灵敏 度。Blood type临床检验学教研室酶试验注意事项酶处理可以增强一些抗原抗体系统的反应活性（Rh和Kidd系统较为显著）唾液酸是有些抗原的结构基础，因此用酶处理也会破坏红细胞的一些表面抗原(MNSFya、Fyb)，所以酶试验不适于检查它们相应当抗体。Blood type临床检验学教研室酶试验注意事项n 酶处理还可以改变红细胞悬液的物理性质，且引起红细胞自发凝集，造成假阳性。n 有些酶（木瓜酶）处理过度，酶就降解IgG，从而得到假结果。Bloodtype临床检验学教研室3.聚凝胺介质试验技术试剂-聚凝胺试剂盒低离子介质（LIM）聚凝胺液（polybrene soluti

15、on）解聚液（Resuspending solution）中和液Blood type临床检验学教研室原理：1.RBC非特异性凝集LIM:降低介质离子强度>降低RBC的Zeta电位，促进RBC与相应Ab结合Polybrene：（多价阳离子氨基聚合物）溶解产生大量正电荷，中和RBC表面的负电荷，促RBC凝集Blood type临床检验学教研室2.RBC特异性凝集血清IgM(IgG)+RBC >RBC特异凝集解聚液中和聚凝胺正电荷，如果是抗体介导的特异性凝集，加入解聚液后，凝集不消散；如是聚凝胺引起的非特异性凝集加入解聚液后，凝集解散。Blood type临床检验学教研室聚凝胺介质试验技

16、术适用范围：血型鉴定，抗体筛查，交叉配血注意事项：ü 不能使用枸橼酸和肝素抗凝标本；ü 对冷凝集有加强作用，冷凝集配血不用此法；ü 聚凝胺使正常红细胞凝集，缺乏唾液酸细胞无作用；ü 聚凝胺配血不符，用Coombs试验重复，以Coombs试验结 果为准；若受血者血清(血浆)含肝素，如洗肾患者，须 加46滴Po1ybrene溶液以中和肝素。Blood type临床检验学教研室4.低离子强度盐水试验技术低离子强度盐水（0.03mmol/LNaCl）-IgG原理：降低RBC表面的Zeta电位，增加抗原抗体间的引力。Bloodtype临床检验学教研室5.人源盐水介

17、质抗D试验二硫苏糖醇（IgG的变性剂）处理人的IgG（抗D血清）IgM转变成（盐水凝集）Blood type临床检验学教研室Rh血型鉴定常见问题-假阳性受检细胞已被免疫球蛋白致敏受检细胞与抗血清孵育时间过长，含高蛋白的定型试剂会引起串钱状形成。标本抗凝不当，蛋白凝块，误判阳性。定型血清中含有事先未被检测特异性抗体多凝集，器材或抗血清被污染，假阳性。Blood type临床检验学教研室Rh血型鉴定常见问题-假n 受检RBC浓度高与抗血清比例失调，n 漏加和错加试剂，血清失效。n 重悬细胞沉淀摇动用力过度，摇散微弱的凝集。n 弱D抗原或D变异型与某些抗-D不反应n DAT阳性，HDN患儿红细胞被抗

18、-D附着。Bloodtype临床检验学教研室四、抗体筛选和鉴定不规则抗体：即意外抗体，是指血清中抗-A、抗-B以外的其他血型抗体。不规则抗体包括：同种抗体或异种抗体IgG或IgM方法：盐水介质ISS、酶白介质法、聚凝胺法、Coombs、微柱凝胶法确认实验：CoombsBloodtype临床检验学教研室不规则抗体筛查和鉴定技术条件：患者有输血史或妊娠史，输血前应常规进行抗体筛查。抗体筛查阳性，做特异性鉴定。防止输血反应抗体筛查：血清中是否存在自生抗体、同种抗体。Blood type临床检验学教研室（四）红细胞抗体检测（筛查鉴定）n 试剂：2或3人份的非混合O型红细胞，包括抗原：Rh系统D、C、c

19、、E、e抗原；MNS系统M、N、S、s 抗原；P系统P1抗原；Kell系统K、k抗原；Kidd 系统Jka、Jkb抗原；Duffy系统Fya、Fyb抗原；Lewis系统Lea、Leb抗原。n 方法：盐水介质法、聚凝胺法、酶法、抗球蛋白介质法、低离子强度介质法等。Blood type临床检验学教研室（四）红细胞抗体检测抗体鉴定：抗体筛查阳性，确认抗体特异性。试剂：普细胞，由816人份O型红细胞组成，具有不同血型系统的各种抗原成分，根据反应格局，鉴定常见抗体。保证抗体鉴定的准确性。要求：每个抗原应有足够的和阳性红细胞。Blood type临床检验学教研室Blood type临床检验学教研室注意事项

20、n 试验设立自生对照防止冷自生抗体凝集反应；n 聚凝胺法：需要Coombs试验对照；n 酶法：对MNS、 Fya、Fyb抗原有破坏作用；n 当抗体强度弱，或有两种以上抗体，结合吸收放散等试验，对抗体特异性进行分析；n 抗体筛查不意味血清中没抗体，防止低亲和力和低效价抗体漏检，增加血清与红细胞比例Blood type临床检验学教研室五、交叉配血n 目的：受者和供者是否存在血型抗原和抗体不符合的情况n 意义:验证血型是否相符，发现ABO不规则抗体和亚型Bloodtype临床检验学教研室交叉配血的方法及评价缺点方法优点不能检测IgG盐水配血实验ABO简单、快速、准确性较差酶介质配血法Rh简单、快速、

21、复杂、昂贵抗球蛋白实验全抗体灵敏、准确所有抗体灵敏、准确特殊试剂聚凝胺实验试剂昂贵所有抗体灵敏、准确，上机微柱凝胶配血Blood type临床检验学教研室原则盐水法IgM无输血和妊娠史Coombs蛋白酶胶体介质聚凝胺法IgG有输血和妊娠史微柱凝胶配血临床检验学教研室所有（IgG、IgM）Blood type配血试验的内容主侧：受血者血清+献血者RBC(受血者血清中有无破坏献血者RBC的抗体）次侧：受血者RBC+献血者血清自生对照：受血者RBC+受血者血清（自身抗体，DAT阳性及红细胞串钱状假阳性存在）Blood type临床检验学教研室Blood type临床检验学教研室交叉配血微柱凝胶免疫技

22、术Blood type临床检验学教研室交叉配血试验的影响因素缗钱状（串钱状）的形成（37或室温）常见于多发性骨髓瘤，巨球蛋白血，以及其它表现为血沉的一些病例中。交叉配血试验结果不相容，显示有未检明的同种抗体存在。室温反应结果阳性，可能有自身抗体IgM抗体抗球蛋白试验阳性，显示有自身抗体。临床检验学教研室Bloodtype交叉配血试验的影响因素抗体筛选试验和交叉配血结果阳性现象，提示可能有未检明的抗体存在。交叉配血试验离心力不当，假或假阳性。水浴箱温度不正确，造成错误结果。红细胞洗涤和悬浮不正确，Coombs出现假。血清中如含有溶血性抗体，交叉配血结果应视为阳性反应。血清中存在补体应灭活后再试验

23、Blood type临床检验学教研室六、已配合血液的与发出配血试验显示供、受者血液配合，黏贴配血在配血单上，姓名，床号，ABO及Rh血型，医院，血袋编号，交叉配血试验结果，发液名称，日期和时间，以及的姓名。反复核对输血申请单，配血报告单和血液的，血液外观正确无误后，将血液血液制品及时发出。Blood type临床检验学教研室Blood type临床检验学教研室Blood type临床检验学教研室Blood type临床检验学教研室配血样例本血液与以下患者配合患者姓名： 患者住院号： 患者标识码： 患者床号： 血型：效期：配血日期： 签名：如不使用请交还血库Blood type临床检验学教研室其他试验技术吸收放散试验Blood type临床检验学教研室吸收放散试验抗体与抗原可在一定条件下发生凝集及致敏，这种结合是可逆的，改变试验条件，抗体可以从抗原抗体复合物上游离下来