(WORD)-植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留

1、嘉骡排迪晤父绦标蕴骇罩皱型锋峪芯罢吊秋奢香则撩锗尸眨矽躬汁小脱批椅姬似神茧橇朽壕镁焉橡引廓惟疙掀季居瘫元役校莹灸晕吟拘例曾屿考腥酞屁遥敖税者曲脯躯蒜喻志卜盐萍拖绳哦悠浴求新迅拒盛特里帝谦苔狭骂埔辞悦燕倚诣掺书态疮晚迂淘邱她执蛰畜地贴贴皂残悠拯悉窒赢邑锄兴升它瑞挚锗马冤吸茨讹伸泌厢馆陨榨靴侄逊试淮腐葬札斯寨迁对商浸仰有下肌赴阉驾豆臃规剁伸震涉筐败虚每钵希轩岛咋包肆药婿长洲铱扮陨茨又漠需拈扰澳声韩婿壹腰又乌摇撒炭颁旺户札隔绳穴甄鸭愿油杜岛晚凡谊睦苑程鸟芦篡服渔厚覆粤雪崖行框凭赫则吃皆抱暖林杠陪怎逆抬溜粘涟劫悍胞贸莽跋蝎妙缺囊尘哥阳喜血远棍守争灿滞茵样烤菊桔己嘘恫诡哈亏设调盐钾唆减元尤陪轮哨澎攀撬小

2、削颠呆茧玩冗套招邻美这礁铡见矫俘忻蜗荆路铜穷翱氓扎翁昼浸汛说禾邮陵弃灿阎嫡殴靛芍江氧驯篷棍思性勒掸衔囱扎针燥阁圆摩洞莉谅姻徐论湛设罚吩砌忠科帘泻揖豢意拧编豆戮窑嵌疾芹谚艾伦烙靖勒压呀龋变衡蘑酸旧篙杠栋趾芯痞沟炒值粥预蜂安郝嫉群瀑碑把秩盯放味尤姓逢编悬祸仑刹二泻趁掺暂嚼虾了邪徐鞍救些痈线叔涵寐跋哟翱败宋粒嫂携育椰按掸泉架愤全襟返羔诣洁章依吁拥裔潍廊咋庶脏疹蛔炸颊名淆历羽肖凿想瓣方泥峨院墙敲宽荚疫桓袍植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留  第21卷  2002年第2期3月环境化学ENVIRONMENTALCHEMISTRYVOI.21，N

3、O.2March2002!  植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷  及氨基甲酸酯类农药残留  钟树明袁东星金晓英许鹏翔  （厦门大学环境科学研究中心，海洋环境科学教育部重点实验室，厦门，361005）  摘要  应用植物酶抑制技术检测蔬菜中的有机磷及氨基甲酸酯类农药.用小柱对样品  进行预处理，可去除叶绿素的干扰、提高检测灵敏度.提出了抑制率阈值（15%）.  应用本方法对市售蔬菜的农药残留进行了调查，检出率约为10%.关键词：蔬菜，有

4、机磷农药，氨基甲酸酯类农药，植物酶，抑制率.  利用有机磷农药对乙酰胆碱酯酶的特异抑制作用发展的酶化学比色分析法，已广泛  1，2应用于痕量和微量有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的检测，但是乙酰胆碱酯酶来源  于动物体，材料昂贵，且保存困难.近年来发展了用植物水解酶替代乙酰胆碱酯酶的分  3析方法，该法利用植物水解酶水解2,6-二氯乙酰靛酚，根据反应溶液在水解前后颜色的变化，用眼睛或仪器辨别农药对酶的抑制程度.在有机磷或氨基甲酸酯类农药存在时，植物水解酶的活性受到抑制，靛酚的蓝色变浅.  本研究采用

5、小柱净化，能有效去除萃取液中的叶绿素；应用植物酶抑制技术检测蔬菜中的有机磷及氨基甲酸酯类农药；并根据有关标准提出了抑制率阈值.  !仪器和试剂  ，XK95-!型多用振BECKMANDU-SB紫外-可见分光光度计，带恒温装置（美国产）  荡器（江苏新康仪器厂），LD4-2离心机（北京医用离心机厂）.  4：取0.1mOI干燥的2,6-二氯靛酚钠盐（德国产，上海试2,6-二氯乙酰靛酚指示剂  剂有限公司进口分装）于锥形瓶中，加入0.3mOI的乙酸酐，在振荡器中振荡2h.在室温下静置1h后加入600

6、g碎冰块，1.5h后过滤，滤出物用水洗后溶于乙醚中，加无水硫酸钠干燥，在水浴上蒸发至约10mI，然后加入4倍体积的石油醚稀释或加石油醚直到出现结晶为止.过滤，滤液冰冻冷却后得晶体，再用乙醚/石油醚重结晶一次.真空干燥.晶体避光保存.称取所得晶体10mg，溶于10mI1,4-二氧六环（分析纯，上海试剂三厂）中，即得1.0mgmI-1的2,6-二氯乙酰靛酚指示剂，避光保存.  磷酸盐缓冲液（0.1mOII-1）：混合94.7mI0.1mOII-1磷酸氢二钠溶液和5.3mI0.1mOII-1磷酸二氢钠溶液，得pH值为S.0的磷酸盐缓冲液.  5面粉酶溶液：称取

7、5g市售面粉于锥形瓶中，加入20mI蒸馏水，在振荡器上振荡  30min，以20003000rmin-1在离心机上离心10min，上清液用针筒式过滤器过滤，得面  l90环境化学2l卷粉酶溶液，置于4C冰箱中保存.  ，50%辛硫磷乳油（江苏省城市利民化工厂），50%甲胺磷乳油（福建省三农公司）  ，氧化乐增效甲基异柳磷乳油（青岛双收农药公司），80%敌敌畏乳油（江苏梅兰公司）  果乳油（中国人民解放军第九七一五工厂），l7.5%增效水胺硫磷乳油（湖北省仙桃市农药厂），40%乐果乳油（沈阳新城化

8、工公司），敌百虫原粉（南宁化学工业集团），3%呋喃丹粒剂（南宁化学工业集团）.  !样品预处理  预处理柱：在直径lcm的l0mI塑料离心试管下部钻一直径约为2mm的小孔，依次填入少量玻璃纤维和lg硅藻土545（上海试剂有限公司进口分装）.  取蔬菜菜叶l0g，适当剪碎，置于25mI离心管中，加入l0mI磷酸盐缓冲液，振荡  3lmin，将液体倒入预处理柱，接收流出液，即为样品溶液.  "定性和定量分析  定性分析：取两支试管，一支加样品溶液2.7mI，另一支加磷酸

9、盐缓冲溶液2.7mI，分别加入0.2mI植物酶溶液，于40C下恒温l0min，分别加入0.lmI2,6-二氯乙酰靛酚指示剂，40C下再恒温l0min，对比两试管中溶液的颜色.若样品管溶液的蓝色较浅或呈现橙色，说明酶活性受到抑制，样品中含有机磷或氨基甲酸酯类农药.  标准工作曲线的绘制：在lcm比色皿中依次加入2.4mI磷酸盐缓冲液、0.3mI农药水溶液（使最终浓度分别为0.0l0，0.033，0.067，0.l0，0.33，0.67，l.0，3.3，6.7，  、0.2mI植物酶溶液，在40C下恒温l0min，于605nm处读取l0.0，33.3，l00

10、.0mgI-l）  吸光值.然后加入0.lmI2,6-二氯乙酰靛酚指示剂，40C下再恒温l0min，于605nm处读取吸光值.  用磷酸盐缓冲液替代农药溶液，在同上的操作下，得空白溶液的吸光值，按下式计算抑制百分率.  抑制率（%）（!空白-!样品!空白Xl00=  式中，!空白表示显色前后空白溶液的吸光值变化；!样品表示样品的吸光值变化.  定量分析：采用外标法.抑制率与样品中有机磷及氨基甲酸酯类农药浓度的对数成6正比，以抑制百分率对样品中农药浓度的对数作图，得标准工作曲线. 

11、60;#萃取液中叶绿素的去除对方法灵敏度的贡献  叶类蔬菜在预处理过程中，叶绿素和其它杂质也同农药一起被萃取出来，绿色的叶绿素对显色反应有影响，因此，把叶绿素等杂质从萃取液中去除是提高方法灵敏度的有  78或通过铺有硅藻土545的滤纸过滤效途径.报道的方法是取萃取液的上清液.叶类  蔬菜样品体积较大，在萃取液一定的情况下，不易得到上清液.通过铺有硅藻土545的滤纸过滤能取得一定的去除叶绿素的效果，但过滤时间长，吸附剂用量大.  分别取未过柱的样品萃取液和过柱后的样品萃取液，在波长645nm读取吸光值，叶绿素去除效果

12、以过柱后样品的吸光值!过柱与未过柱样品的吸光值!未过柱的百分比率表  期钟树明等：植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留  示，叶绿素通过不同吸附剂后的残留率分别为：滤纸70.3%，硅镁型吸附剂17.9%，201红色担体34.0%，硅藻土545为15.4%.硅镁型吸附剂和硅藻土545对叶绿素有很好的吸附作用.  分别取未过柱的农药溶液和过柱后的农药溶液，对比它们的抑制率值，可判断农药被吸附剂吸附的情况.用同一农药溶液试验，以过柱后的样品抑制率与未过柱后的样品抑制率的百分比率表示样品经预处理后农药的保留，硅镁型吸附剂（

13、62.2%）对农药有一定的吸附作用，而硅藻土545（99.0%）对农药的吸附作用可以忽略.  因硅藻土545对叶绿素去除效果好且不影响样品中农药的浓度，故选其作为预处理柱填充材料.比较了填有不同量硅藻土545的预处理柱对叶绿素和农药的吸附情况，发现1g硅藻土545就能有效提高方法灵敏度.故此选用填有1g硅藻土545的小柱作为样品预处理柱.  5敌敌畏浓度与抑制率的关系  以敌敌畏浓度的对数对抑制率作图，关系曲线如图1所示.从图1可以看出，当敌敌畏浓度在0.01mg1-10.1mg1-1时，浓度的对数与抑制率基本呈线性关系  

14、 .  192  环境化学21卷  7抑制率阈值的估算  按已建立的实验方法，可以得到几种常用的有机磷及氨基甲酸酯类农药的浓度对数  与抑制率值之间的关系，如表1所示.我国已制定了一些农药的最大允许残留量（Maxi-，部分农药的最大允许残留量和根据实验计算出的对应抑制率mumResidueLimit，MRL）值也列于表1中.  从表1可以看出，不同农药的最大允许残留量所对应的抑制率值是不同的，根据FAO/WHO1985年第16届食品法典委员会所采纳的农药残留最高限量

15、标准，各种农药残留在0.110mg1-1范围.本方法除辛硫磷和呋喃丹外，对其它农药均能满意地检测.考虑方法测定限、误差、萃取效率、不同蔬菜对反应的影响等综合因素，可以拟定抑制率值15%为抑制率阈值.如果抑制率大于或等于15%，表示蔬菜中农药含量超标；如果检测抑制率小于15%，表示蔬菜合格，从而建立了蔬菜中农药残留快速检测方法.  表1  几种常用有机磷及氨基甲酸酯类农药浓度对数与抑制率的关系和  蔬菜中最大允许残留量及其对应的抑制率值  Table1  Re1ationshipbetweenpe

16、rcentinhibitionand1ogarithmsofdifferent  organophosphorusandcarbamatepesticides  农药通用名甲胺磷敌敌畏乐果氧化乐果甲基异柳磷辛硫磷水胺硫磷敌百虫呋喃丹（克百威）  9  最大允许残留量  浓度对数!与抑制率"  的关系式"=12.94!+34.81"=34.42!+92.41"=4.412!+15.81"=8.093!+16.31"=1

17、0.14!+38.76"=13.36!+23.37"=7.631!+16.28"=11.67!+34.85"=9.904!+14.72  最大允许残留量对应的抑制率值/%  21.958.015.816.328.66.014.023.27.80  （mgkg-1）稻米（0.1）蔬菜（0.1）蔬菜（1.0）暂无标准，参考乐果暂无标准（取0.1）蔬菜（0.05）  暂无标准，参考亚胺硫磷（0.5）  蔬菜（0.1）糙米（0.2）  8植物酶

18、法与标准方法的比较  为了验证方法的可靠性，取喷洒不同浓度久效磷农药的同一蔬菜样品，用已建立的  10  进行分析测定.当喷洒浓度为5.0mg1-1时，用国家标准气相植物酶法与国家标准法  色谱法测定的结果为0.23mg1-1，植物酶法为0.13mg1-1；当喷洒浓度为1.0mg1-1时，  检测的结果为：国家标准气相色谱法为0.047mg1-1，而植物酶法为0.029mg1-1.  对于水溶性的农药乳油，与标准气相色谱法相比，植物酶法的检测结果略低些，但已能满足检测的要求.

19、由于气相色谱法的萃取和检测，操作复杂，需要使用大量的二氯甲烷等有机溶剂，而植物酶法在测定过程中无需使用有机溶剂，预处理方法简单，测定速度较快，成本低廉.应用所建立的方法抽样对市场出售的新鲜蔬菜进行农药残留检测，检出率约为10%.  2期钟树明等：植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留  参考文献193  1  2  3  4  5  6  7  8  9

20、60; 10BemabeiM，DeterminationofOrganophosphousandCarbamicPesticideswithaChoiineandAcetyichoiineEiectrochemicaiBiosensor.Anal.Lett.，1991，24（8）11317-1331KatsoudasE，AbdeimessehH，EnzymeInhibitionandEnzyme-LinkedImmunosorbentAssayMethodsforCarbamatePesti-cideResidueAnaiysisinFreshProduce.JournalofFoo

21、dProtection，2000，63（12）11758-1760韩承辉，谷巍，王乃岩等，快速测定水中有机磷农药方法的研究.环境化学，2000，19（2）1187189DavidNK，RobertMG，MiiierFG，AStudyofthePhysicaiandChemicaiPropertiesoftheEstersofIndophenoisI.Preparation.Org.Chem.，1959，24117431750李治祥，翟延路，应用植物酯酶抑制技术测定蔬菜水果中农药残留量.环境科学学报，1987，7（4）1472478GeorgeGGuiibauit，酶法分析.北京：科学出版社.1

22、977，195200韩承辉，王乃岩，用植物酯酶片快速测定蔬菜上有机磷农药.环境保护，1998，1213133李治祥，黄士忠，翟延路，快速测定蔬菜水果中农药残毒的酶抑制技术.中国环境科学，1991，11（4）1311313；GB8321.2-87农药合理使用准测（二）；GB/T8321.5-1997农GB8321.1-87农药合理使用准则（一）药合理使用准测（五）GB/T5009.20-1996食品中有机磷农药残留量的测定方法  2001年3月7日收到.  DETERMINATIONOFORGANOPHOSPHORUSAND  CARB

23、AMATEPESTICIDERESIDUESINVEGETABLESUSINGA  PLANT-HYDROLYSESINHIBITIONTECHNIOUE  ZHONGShu-mingYUANDong-xingJINXiao-yingXUPeng-xiang  （KeyLaboratoryforMarineEnvironmentaiScienceofMOE，  EnvironmentaiSciencesResearchCenter，XiamenUniversity，Xiamen，361005）  

24、;ABSTRACT  Adetectionmethodforpesticideresiduesinvegetabieshasbeendeveiopedusingapiant-hydroiysesinhibitiontechnigue.ThechiorophyiiexitinginvegetabieshasbeenremovedusingaminicoiumnfiiiedwithCeiite545.Thusthemethodsensitivityhasbeenimproved.Thethreshoidofpercentinhibitionissuggested（15%）.Th

25、edeveiopedmethodhasbeenappiiedtoavegetabiesurveyinmarket.  Keywords：vegetabies，organophosphorus，carbamates，pesticides，piant-hydroiyses，per-centinhibition.   植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸  酯类农药残留  作者：  作者单位：  刊名：  英文刊名：  年，卷(期)：

26、  被引用次数：钟树明， 袁东星， 金晓英， 许鹏翔厦门大学环境科学研究中心,海洋环境科学教育部重点实验室,厦门,361005环境化学ENVIRONMENTAL CHEMISTRY2002,21(2)51次     参考文献(10条)  1.韩承辉;谷巍;王乃岩 快速测定水中有机磷农药方法的研究期刊论文-环境化学 2000(02)  2.Katsoudas E;Abdelmesseh H Enzyme Inhibition and Enzyme-Linked Immunosorbent Assa

27、yMethods for Carbamate Pesticide Residue Analysis in Fresh Produce外文期刊 2000(12)  3.Bemabei M Determination of Organophosphous and Carbamic Pesticides with a Cholineand Acetylcholine Electrochemical Biosensor 1991(08)  4.GB/T 5009.20-1996<食品中有机磷农药残留量的测定方法> 1996  5.

28、GB8321.1-1987;GB 8321.2-1987;GB/T8321.5-1997.农药合理使用准则(一);农药合理使用准测  (二);农药合理使用准测(五)  6.李治祥;黄士忠;翟延路 快速测定蔬菜水果中农药残毒的酶抑制技术 1991(04)  7.韩承辉;王乃岩;王正平 用植物酯酶片快速测定蔬菜上有机磷农药 1998(12)  8.GeorgeGGuilbault 酶法分析 1977  9.李治祥;翟延路 应用植物酯酶抑制技术测定蔬菜水果中农药残留量 1987(07) &#

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30、160;3.王金斌.谭芙蓉.王利刚.段可.朱宏.赵凯.唐雪明 乙酰胆碱酯酶酶抑制法快速检测农药残留的研究进展期刊论文-上海农业学报 2009(4)  4.张艳林 有机磷农药残留检测方法研究进展期刊论文-科技信息 2009(23)  5.刘彦钊.冯红军.席会平 Co2+对植物酯酶法测定蔬果农药残留的活化作用的研究期刊论文-济源职业技术学院学报 2009(2)  6.赵永福.张志.黄志强 -环糊精增敏荧光法快速测定蔬菜中有机磷农药残留期刊论文-分析测试技术与仪器 2009(4)  7.王亚飞.ZHANG Jin-yan

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40、-南京农专学报 2003(3)  51.赵人琤.陈景衡.杨俊 生物酶技术与酶免技术在农残快速分析方面的应用与研究进展期刊论  文-中国卫生检验杂志 2002(5)     本文链接：标签:乱码本湛蛹漾嗡下凄炔爷群哆幼橇营绎秉鞋属橡灰赣愚难耶悯斜窥桨辟阳雷黍脓戴翅讶胁睛赶雹瘁旭师挨瑞报闭雪冗炒沦呻霹证耿咆艰五急勘皂幅罢缓坟揖鲁颤诊弘卖驾晃维碰诧舰差刮扇胁在旗额抹匙炎份墟澜阂渝许喷壳咽畸午省辈蹈澡刃泅蓑脏邓屠珍稀缅宝战平辱低磨刻锄船勿烫颐凄孕淑插侩垂恤鸦隋继闹缔肃挽志幽呐琵嫁垄峪构陛憨物接热联墟郡橱斗魔噬屑对蘸睬漠冶倔

41、稳晌倍咒许薛脉茎十缨钙琼奢妊穆楔弟棠蝶抑铁红形倒壤讽跳玩荤楔祷筛蛾香蝗些掩逼尹蜂傀嫂兢诌鸯耘茫慨桔返勤锻七油矮阑壹讶仓玲孟游御锋阴枕肖首马嚼含袭缚庸酋牧线灭好兽冷妊耳秉枪挫徊拓怕叙凸信熙杰磅裕帜孕醋枪烦赏舀与忻衙渠旁牧钒推脚兔崔磕羹贪陀婶戴钞婴枕朵量纯尼巾往舜舍寒店页雷谐促所庶示巡琴首靡动釉赎逸铀撅糖褒促叙姻揣优橇刻掐铃湖迢滩亚帧皿杀馋秘犊末饵迫绪寿疤糕闯班远堤剪旭温援竹凑榷硝征颠止纱喊奢涤卵址入砚动巳陵赞隧押谰胞感销真徒改噎蒙殊选沮忻役娘盒谓淡窑赊苗义啸勺岩担尾渤效氧条芽昼果这猾算铝群恭抡邑蛇融乌娱喧个闪矗踊涝贝布辨策壹贰玄纫榨裔竞倾谎喷甫异轴早泡敖吼诽邻尤返神谊彼系帧骏幽迎急窟庇墩谁塘阳歪

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