检验方法验证、检验方法确认实例(年版GMP)

1、精品检验方法确认报告检验方法确认 - 产品名称确认报告编号人工牛黄甲硝唑胶囊R-TS-VP-4001-00批号： 20151201、 20151202、20151203验证工作组工作组职务姓名部门及职务职责组长黄汉新质量负责人 / 质量受权人负责确认方案及报告的批准副组长曾凤敏质量部 QC 组长负责确认方案起草、 实施、汇总报告及培训工作副组长胡建新质量部 QA 组长审核确认方案、审核验证报告并协调工作组员刘红华质量部 QC参加确认方案实施、汇总报告工作-可编辑 -精品目录1. 概述2. 确认目的和范围3. 组织及职责4. 确认起止日期5. 方法确认所需要的仪器设备及相关文件的确认6. 方法确

2、认所需要的对照品、原辅料、检验样品的确认7. 确认项目和确认方法、确认结果7.1 【鉴别（ 1）】人工牛黄薄层色谱鉴别方法确认7.2 【鉴别（ 2）】甲硝唑紫外光谱鉴别方法确认7.3 【鉴别（ 3）】人工牛黄胆红素液相色谱鉴别方法确认7.4 甲硝唑含量测定方法专属性确认7.5 甲硝唑含量测定方法线性关系与线性范围确认7.6 甲硝唑含量测定方法准确度确认7.7 甲硝唑含量测定方法精密度确认7.8 甲硝唑含量测定方法耐用性确认7.9 胆红素含量测定方法系统适用性确认7.10 胆红素含量测定方法专属性确认7.11 胆红素含量测定方法线性关系与线性范围确认7.12 胆红素含量测定方法准确度确认7.13

3、 胆红素含量测定方法精密度确认7.14 胆红素含量测定方法耐用性确认8. 三批产品按本检验方法检验的结果确认9. 偏差与漏项控制10. 确认报告会审-可编辑 -精品1. 概述我公司生产的品种人工牛黄甲硝唑胶囊，执行国家药监局颁布的法定药品标准，标准号为：WS-10001-(HD-0204)-2002。本公司前身（原广东华卫药业有限公司）按该标准生产、检验人工牛黄甲硝唑胶囊已有多年的历史。根据 GMP （ 2010 版）第二百二十三条规定，对收入药典和其它法定标准的分析方法，应通过检验方法确认来证明该方法在本实验室条件下的适用性。故本公司依照法定标准WS-10001-(HD-0204)-2002

4、以及中国药典2015版四部附录9101 ：药品质量标准分析方法验证指导原则的规定，制定本检验方法确认方案，由质量部按制定的方法进行试验，根据试验结果判断检验方法在本公司是否适用。本产品的微生物限度检查方法验证，另行制定验证方案进行验证，不包括在本次确认。2. 确认目的和范围确认该产品的检验方法在本公司检验室的适用性，保证检验结果的可靠性。本确认方案采用 3 批按 GMP 要求组织生产的人工牛黄甲硝唑胶囊，进行检验方法的确认。确认项目包括【鉴别】 、【甲硝唑含量测定】 、【胆红素含量测定】等。3. 组织及职责3.1 确认方案和确认报告的起草、审核、批准确认方案由质量部 QC 组负责起草，由质量部

5、审核，最终由质量负责人批准。确认方案实施完成后，由 QC 组负责汇总各个项目确认的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量负责人批准报告。3.2 确认方案的培训确认方案在经质量负责人批准后，由 QC 组组长对本次确认实施的相关人员组织培训工作，并将该次的培训记录归档。3.3 确认方案实施过程中的变更和偏差确认方案实施过程中如有变更和偏差，质量负责人应当组织进行评估并采取相应的控制措施。3.4确认工作小组成员表姓名部门及职务职责黄汉新质量负责人 / 质量受权人负责确认方案及报告的批准曾凤敏质量部 QC 组长负责方案制定、实施、报告及培训工作胡建新质量部 QA 组长审核确认方案、审核确认报告并协调

6、工作刘红华质量部 QC参加确认方案实施、汇总报告工作-可编辑 -精品4. 确认起止日期用于本次检验方法确认的三批产品是人工牛黄甲硝唑胶囊批号：、实施确认工作的起止时间是：5. 方法确认所需要的仪器设备及相关文件的确认5.1. 主要检验仪器设备确认表序仪器设备名称型 号编号校准单位校准日期有效期至号1电子天平BSA124SJY-102数显鼓风干燥箱GZX-9076MBEJY-193紫外可见分光光度计UV-2401-PCJY-034高效液相色谱仪LC-10ATJY-015液相色谱仪LC-20ADJY-02检查人 / 日期：复核人 / 日期：5.2. 确认所需文件的确认表文件名称文件编码是否有效版本

7、文件保存处人工牛黄甲硝唑胶囊内控质量标准TS-QS-4002-00是 否质量部人工牛黄甲硝唑胶囊检验操作规程SOP-QC-4002-00是 否质量部取样操作规程SOP-QA-0001-00是 否质量部 紫外可 见分光光 度法检 验操作 规SOP-QC-0008-00程 是 否质量部高效液相色谱法检验操作规程SOP-QC-0009-00是 否质量部薄层色谱法操作规程SOP-QC-0030-00是 否质量部 UV-2401-PC紫外可见分光光度计SOP-QC-5006-00是 否质量部-可编辑 -精品操作规程 LC-10AT高效液相色谱仪操作规程SOP-QC-5005-00是 否质量部 LC-20

8、AD高效液相色谱仪操作规SOP-QC-5007-00是 否质量部程 BSA124S电子天平操作规程SOP-QC-5017-00是 否质量部检查人 / 日期：复核人 / 日期：6. 方法确认所需要的对照品、原辅料、检验样品的确认6.1.对照品、原辅料检查表序号品名来源批号备注1胆酸对照品中国药品生物制品检定所2猪去氧胆酸对照品中国药品生物制品检定所3胆红素对照品中国药品生物制品检定所含量 98.5%标定含量为4甲硝唑原料药湖北省宏源药业科技股份有限公司100.0%5人工牛黄原料药武汉百草园生化药业有限公司6淀粉辅料东莞市东岳葡萄糖厂有限公司7二氧化硅辅料湖州展望药业有限公司检查人 / 日期：复核

9、人 / 日期：6.2.检验样品确认表-可编辑 -精品批号是否按 GMP序号品名生产厂家规格要求生产1人工牛黄甲硝唑佛山市华普生药业有限公司甲硝唑 0.2g是 否胶囊人工牛黄 5mg2人工牛黄甲硝唑佛山市华普生药业有限公司甲硝唑 0.2g是 否胶囊人工牛黄 5mg3人工牛黄甲硝唑佛山市华普生药业有限公司甲硝唑 0.2g是 否人工牛黄 5mg胶囊检查人 / 日期：复核人 / 日期：7. 确认项目及确认方法7.1 【鉴别（ 1）】人工牛黄薄层色谱鉴别方法确认7.1.1 鉴别方法的专属性确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【鉴别（ 1 ）】项下规定，分

10、别制备以下溶液，进行鉴别方法专属性的确认：（ 1）胆酸、猪去氧胆酸对照品溶液：取胆酸、猪去氧胆酸对照品， 加乙醇制成每1ml 各含 0.5mg的溶液，作为对照品溶液；（ 2）3 批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：分别取本品3 批的内容物约0.95g （约相当于人工牛黄 20mg ），研细，加氯仿15ml ，超声处理20 分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；（ 3）人工牛黄阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除人工牛黄不称取外，称取甲硝唑原料0.80g ，淀粉0.08g ，二氧化硅0.04g共置量瓶中，加氯仿15ml ，超声处理20 分钟，滤过，滤液

11、置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml 使溶解，作为人工牛黄阴性样品溶液。试验方法：照薄层色谱法 （中国药典2015 年版四部0502 ）试验，吸取上述溶液各4 l,分别点于同一硅胶G 薄层板上，以正己烷- 醋酸乙酯 - 醋酸 -甲醇（ 20 ：25 ：2 ：3 ）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10% 硫酸乙醇溶液， 在 105 加热数分钟至斑点显色清晰，日光下或置紫外光灯 （ 365nm ）下检视。7.1.2 方法确认接受标准：（1 ）胆酸、猪去氧胆酸对照品溶液：显2 个主斑点；-可编辑 -精品（ 2 ）3 批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：在与对照品色谱相应位置上，显同颜色斑点；（ 3

12、）人工牛黄阴性样品溶液：在与对照品色谱相应位置上，不显斑点。7.1.3 方法确认记录与确认结果（1 ）电子天平 型号编号，数显鼓风干燥箱型号编号硅胶 G 薄层板批号，来源（2 ）胆酸对照品称样量，稀释倍数猪去氧胆酸对照品称样量，稀释倍数（3 ）人工牛黄甲硝唑胶囊内容物称样量：批号，称样量；批号，称样量；批号，称样量；（4 ）项目确认结果【鉴别（ 1 ）】人工牛黄薄层色谱鉴别 - 方法专属性确认结果胆酸、猪去氧胆酸人工牛黄甲硝唑胶囊人工牛黄阴性测试样品201512012015120220151203对照品溶液批批批样品与对照品色谱与对照品色谱与对照品色谱与对照品色谱薄层色谱显 2 个主斑点相应位

13、置显同相应位置显同相应位置显同相应位置不显颜色斑点颜色斑点颜色斑点斑点项目确认结果 :通过不通过检查人 / 日期：复核人 / 日期：7.2 【鉴别（ 2）】甲硝唑紫外光谱鉴别方法确认7.2.1 鉴别方法的专属性确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【鉴别（ 2 ）】项下规定，分别制备以下溶液，进行鉴别方法专属性的确认：（ 1）甲硝唑对照品溶液：取甲硝唑对照品约 20.0mg ，精密称定，置 100ml 量瓶中，加盐酸溶液（ 9 1000 ）溶解，稀释至刻度， 摇匀；精密量取 5ml 置 100ml 量瓶中，加盐酸溶液 （ 9 1000 ）稀释至刻

14、度，摇匀即得。（ 2） 3 批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：分别精密取本品3 批的内容物约59mg （约相当于甲硝唑50mg ），置 100ml量瓶中，加盐酸溶液（9 1000 ）约 80ml ，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液（ 9 1000 ）稀释至刻度， 摇匀，用干燥滤纸滤过， 精密量取续滤液 5ml ，置 200ml 量瓶中，加盐酸溶液（ 9 1000 ）稀释至刻度，摇匀即得。（ 3）甲硝唑阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除甲硝唑不称取外，-可编辑 -精品称取淀粉 10mg ，二氧化硅5mg 、人工牛黄3mg置 200ml量瓶中，加盐酸溶液 （ 9 1000 ）160ml

15、微温，放冷后稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml ，置 200ml量瓶中，加盐酸溶液（ 9 1000 ）稀释至刻度，摇匀即得。试验方法：照分光光度法，取上述各种溶液扫描紫外吸收光谱7.2.2 方法确认接受标准： （1 ）甲硝唑对照品溶液：在 277 ±2 nm 的波长处有最大吸收；在 241±2nm的波长处有最小吸收；（2 ）3 批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：在277 ±2 nm 的波长处有最大吸收 ；在 241 ±2nm的波长处有最小吸收；（3 ）甲硝唑阴性样品溶液：在277 ±2 nm 的波长处无最大吸收 ；在 241 &

16、#177;2nm 的波长处无最小吸收。7.2.3 方法确认记录与确认结果（1）电子天平 型号编号，紫外分光光度计型号编号（2）甲硝唑对照品称样量20.1 mg（3）人工牛黄甲硝唑胶囊内容物称样量：批号，称样量；批号，称样量；批号，称样量；（4）项目确认结果【鉴别（ 2 ）】甲硝唑紫外光谱鉴别- 方法专属性确认结果人工牛黄甲硝唑胶囊测试样品甲硝唑对照品201512012015120220151203甲硝唑阴性样品批批批最大吸收277±2 nm277±2nm277±2 nm277±2 nm277 ±2nm无最大吸收最小吸收241±2nm2

17、41±2nm241±2nm241±2nm241 ±2nm无最小吸收项目确认结果 :通过不通过检查人 / 日期：复核人 / 日期7.3 【鉴别（ 3）】人工牛黄胆红素液相色谱鉴别方法确认7.3.1 鉴别方法的专属性确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准 WS-10001-(HD-0204)-2002 【鉴别（ 3 ）】项下规定，分别制备以下溶液，进行鉴别方法专属性的确认：-可编辑 -精品（ 1）胆红素对照品溶液：取胆红素对照品约10.0mg ，精密称定，置 100ml 量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，摇匀，精密量取1.0ml 置 25ml 棕色量瓶中 ,

18、 加氯仿 - 甲醇 - 水 - 盐酸 (90 ：10 ：0.3 ： 0.03) 混合液稀释至刻度，制成每1ml 中含胆红素约4 g 的溶液，即得。（ 2）样品提取溶剂：氯仿 -甲醇 - 水 - 盐酸（ 90 ： 10:0.3:0.03 ）的混合液（ 3）人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：取20151201 批本品的内容物约 1.7g （约相当于胆红素0.2mg ），精密称定，置 50ml棕色量瓶中， 加氯仿 - 甲醇 - 水 - 盐酸（90 ：10:0.3:0.03 ）混合液约40ml ，超声提取 15 分钟，取出，迅速冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。（ 4）人工牛黄阴性样品溶液

19、：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除人工牛黄不称取外，称取甲硝唑 1.45g ，淀粉 0.145g ，二氧化硅 0.072g 共置 50ml 棕色量瓶中， 加氯仿 - 甲醇 -10%盐酸（ 50 ：50:0.3 ）混合液约40ml ，超声提取15 分钟，取出，冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。试验方法：精密吸取上述溶液各20 l，注入液相色谱仪，记录色谱图。7.3.2方法确认接受标准： （ 1 ）人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液主峰保留时间与胆红素对照品溶液主峰保留时间一致（相对偏差不超过0.5% ）；（2 ）人工牛黄阴性样品溶液、样品提取溶剂在胆红素峰保留时间处均应为平直基

20、线，无吸收峰。7.3.3 方法确认记录与确认结果（1 ）电子天平型号编号，高效液相色谱仪型号编号（ 2 ）胆红素对照品称样量： 9.90mg（ 3 ）人工牛黄甲硝唑胶囊内容物称样量：批号20151201，称样量（4 ）项目确认结果【鉴别（ 3 ）】人工牛黄胆红素液相色谱鉴别- 方法专属性确认结果测试样品胆红素对照品成品样品提取溶剂人工牛黄阴性样品胆红素峰保留7.183min7.170min在胆红素峰保留时间处为在胆红素峰保留时间处时间平直基线，无色谱峰。为平直基线， 无色谱峰。项目确认结果 :通过不通过检查人 / 日期：复核人 / 日期7.4 甲硝唑含量测定方法专属性确认-可编辑 -精品7.4

21、.1 甲硝唑含量测定方法的专属性确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准 WS-10001-(HD-0204)-2002 【含量测定 甲硝唑】项下规定，分别制备以下溶液，进行方法专属性的确认：（ 1）甲硝唑对照品溶液：取甲硝唑对照品约 20.0mg ，精密称定，置 100ml 量瓶中，加盐酸溶液（ 9 1000 ）溶解，稀释至刻度， 摇匀；精密量取 5ml 置 100ml 量瓶中，加盐酸溶液 （ 9 1000 ）稀释至刻度，摇匀即得。（ 2） 3 批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：分别精密取本品3 批的内容物约59mg （约相当于甲硝唑50mg ），置 100ml量瓶中，加盐酸溶液（9 1000

22、）约 80ml ，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液（ 9 1000 ）稀释至刻度， 摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml ，置 200ml量瓶中，加盐酸溶液（ 9 1000 ）稀释至刻度，摇匀即得。（ 3）甲硝唑阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除甲硝唑不称取外，称取淀粉 10mg ，二氧化硅5mg 、人工牛黄3mg置 200ml量瓶中，加盐酸溶液 （ 9 1000 ）160ml微温，放冷后稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml ，置 200ml量瓶中，加盐酸溶液（ 9 1000 ）稀释至刻度，摇匀即得。试验方法：照分光光度法，取上述各种溶液扫描紫外吸收光谱

23、，并读取吸收峰处的吸收度。7.4.2方法确认接受标准： （ 1 ）甲硝唑对照品溶液：在277 ±2 nm 的波长处有最大吸收 ；（2 ）3 批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：在277 ±2 nm 的波长处有最大吸收；（3 ）甲硝唑阴性样品溶液：在277 ±2 nm 的波长处基本无吸收 ，吸收度 A 值接近 0。7.4.3方法确认记录与确认结果（1）电子天平 型号编号，紫外分光光度计型号编号（2）甲硝唑对照品称样量 20.1 mg（3）人工牛黄甲硝唑胶囊内容物称样量：批号，称样量；批号，称样量；批号，称样量；（4）项目确认结果甲硝唑含量测定- 方法专属性确认结果人工牛黄

24、甲硝唑胶囊测试样品甲硝唑对照品201512012015120220151203甲硝唑阴性样品批批批-可编辑 -精品在 277±在 277±在 277±在 277 ±2nm在 277±2nm 基本无吸最大吸收有最大吸收2nm 有 最2 nm有 最2 nm有 最收，吸收度 A=0大吸收大吸收大吸收项目确认结果 :通过不通过检查人 / 日期：复核人 / 日期7.5 甲硝唑含量测定方法的线性关系与线性范围确认7.5.1 甲硝唑含量测定方法的线性关系与线性范围确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定

25、甲硝唑】项下规定，分别制备以下溶液，进行线性关系与线性范围的确认：（ 1）甲硝唑对照品贮备液：取甲硝唑对照品约20.0mg，精密称定，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（ 9 1000）溶解，稀释至刻度，摇匀。精密量取6ml置 100ml 量瓶中，加盐酸溶液（ 91000 ）稀释至刻度，摇匀即得。（ 2）线性关系测试溶液：分别精密量取甲硝唑对照品贮备液4ml 、 5ml 、 6ml 、 7ml 、 10ml置 100ml量瓶中，加盐酸溶液（ 9 1000 ）稀释至刻度，摇匀得系列浓度的测试溶液。试验方法：照紫外 - 可见分光光度法，在277nm的波长处测定上述系列溶液的吸收度。计算出各个测试溶液的

26、甲硝唑浓度，以浓度为横坐标， 吸收度为纵坐标， 计算线性回归方程、 回归系数 R2、线性范围。7.5.2 方法确认接受标准： （1 ）测试溶液的甲硝唑浓度与吸收度之间呈良好线性关系，回归系数 R2：0.995 R21 ；（2 ）甲硝唑浓度线性范围： 应涵盖人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定甲硝唑】项下样品溶液中甲硝唑浓度12.5 g/ml 的 80% 120%，即结果的线性范围应涵盖 10.0g/ml 15.0 g/ml 。7.5.3 方法确认记录与确认结果（1 ）电子天平 型号编号，紫外分光光度计型号编号（2 ）甲硝唑对照品称样量20.1 mg

27、（3 ）项目确认结果甲硝唑含量测定方法- 线性关系与线性范围确认-可编辑 -精品对照品浓度8.0410.0512.0614.0720.10（ug/ml）277nm的 A0.3130.3890.4640.5440.783值线性回归方程y=0.039x-0.0037回归系数 R2R2 =0.9998甲硝唑浓度线性范围8.04 ug/ml20.10 ug/ml项目确认结果 :通过不通过检查人 / 日期：复核人 / 日期7.6 甲硝唑含量测定方法准确度确认（回收率试验）7.6.1 甲硝唑含量测定方法的准确度确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定

28、甲硝唑】项下规定，分别制备以下溶液，进行方法准确度的确认：-可编辑 -精品（ 1 ）甲硝唑阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，精密称取人工牛黄25.0mg ，淀粉 100.0mg，二氧化硅50.0mg共置 100ml量瓶中，加盐酸溶液（9 1000 ）稀释至刻度，摇匀即得。（ 2）回收率测试溶液：精密称取甲硝唑工作对照品约50mg ，置 100ml量瓶中，精密加入甲硝唑阴性样品溶液5ml ，再加盐酸溶液（9 1000 ）约 75ml ，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液（91000 ）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml ，置 200ml量瓶中，加盐酸溶液（ 9 1

29、000 ）稀释至刻度， 摇匀，照分光光度法， 在 277nm的波长处测定吸收度，按 C6H 9 N 3O 3的吸收系数为377 计算甲硝唑加入量，计算加样回收率。（ 3）甲硝唑工作对照品：采用依照中国药典2015 年版“甲硝唑”项下进行全检合格，标定纯度的甲硝唑原料药。7.6.2 方法确认接受标准：A ×40（1 ）计算公式：工作对照品回收率%= ×100%377 ×W R式中： A 为回收率测试溶液的吸收度；W R 为工作对照品加入量（g ）（2 ）工作对照品回收率限度为99.0% 101.0% ，回收率的相对标准偏差（RSD ）限度为2.0%7.6.3 方法确

30、认记录与确认结果（1 ）电子天平 型号编号，紫外分光光度计型号编号（2 ）甲硝唑工作对照品（湖北省宏源药业科技股份有限公司，批号：01120151028，标定结果纯度为 100.0%）。（3 ）项目确认结果甲硝唑含量测定方法- 准确度确认结果试 验 编工作对照品测得吸收测得甲硝工作对照品回平均回收回收率的号加入量度 A 值唑量收率 %率%RSD（ mg ）（ mg ）148.90.46249.02100.24250.30.47250.0899.56349.30.46849.66100.73100.140.47%450.60.47950.82100.43550.50.47450.2999.586

31、49.60.46949.76100.32项目确认结果 :通过不通过-可编辑 -精品检查人 / 日期：复核人 / 日期7.7 甲硝唑含量测定方法精密度确认7.7.1 甲硝唑含量测定方法的精密度确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定甲硝唑】项下方法，进行方法精密度的确认：（ 1）人工牛黄甲硝唑胶囊成品甲硝唑含量测定溶液：精密取本品20151201批成品的内容物约 59mg （约相当于甲硝唑50mg ），置 100ml量瓶中，加盐酸溶液（9 1000 ）约 80ml ，微温使甲硝唑溶解， 加盐酸溶液 （ 9 1000 ）稀释至刻度， 摇匀，用

32、干燥滤纸滤过， 精密量取续滤液5ml ，置 200ml量瓶中，加盐酸溶液（9 1000 ）稀释至刻度，摇匀, 照分光光度法，在277nm的波长处测定吸收度，按C6H 9 N 3 O3 的吸收系数为377 计算甲硝唑含量。（ 2）仪器吸收度读数重复性：取同一份含量测定溶液,在紫外分光光度上连续测定吸收度。（ 3）甲硝唑含量测定的重复性：取20151201批成品，由同一人分别称取6 份样品，进行含量测定。（ 4 ）甲硝唑含量测定的中间精密度：取20151201批成品，由甲实验人员称取6 份样品，进行测定（即上述甲硝唑含量测定的重复性）；再由乙实验人员在不同的日期称取6 份样品，进行测定。7.7.2

33、 方法确认接受标准：A ×40（1 ）计算公式：甲硝唑的绝对百分含量%= ×100%377 ×W式中： A 为溶液的吸收度；W 为样品称样量（ g ）（2）仪器吸收度读数重复性：读数的相对标准偏差（RSD ）限度为 0.3%（3）甲硝唑含量测定的重复性：结果的相对标准偏差（RSD）限度为 1.5%（4）甲硝唑含量测定的中间精密度：结果的相对标准偏差（RSD）限度为 2.0%7.7.3 方法确认记录与确认结果（1）电子天平型号编号，紫外分光光度计型号编号（2）仪器吸收度读数重复性：同一份溶液读数6 次，结果如下：测定次数1#2#3#4#5#6#RSD吸收度 A0.4

34、700.4720.4720.4720.4720.4710.2%确认结果 :通过不通过检查人 / 日期：复核人 / 日期-可编辑 -精品（3 ）甲硝唑含量测定的重复性：成品批号20151201含量均含量测定测定次数1#2#3#4#5#6#的 RSD值称 样 量0.05950.05920.05890.05960.05930.0592W(g)84.68%1.2%吸收度 A0.4710.4650.4680.4780.4760.481百分含量83.99%83.34%84.30%85.09%85.17%86.21%确认结果 :通过不通过检查人 / 日期：复核人 / 日期：-可编辑 -精品（4 ）甲硝唑含量

35、测定的中间精密度成品批号20151201甲 1甲 2甲 3甲 4甲 5甲 6乙 1乙 2乙 3乙 4乙 5乙 6含量测定试验次数平均值的 RSD称 样 量0.05950.05920.05890.05960.05930.05920.06170.06130.06160.05740.05700.0581W(g)吸收度 A0.4710.4650.4680.4780.4760.4810.4910.4930.4900.4560.4560.457百分含量83.99%83.34%84.30%85.09%85.17%86.21%84.43%85.33%84.40%84.29%84.8883.46%84.57%0

36、.96%确认结果 :通过不通过检查人 / 日期：复核人 / 日期：-可编辑-精品7.8 甲硝唑含量测定方法耐用性确认将 7.2项下成品溶液、对照品溶液放置于室温，每隔一段时间测定吸收度，吸收度至少应在8小时内稳定。甲硝唑含量测定 - 方法耐用性确认溶液吸收度 A成品溶液对照品溶液时间0hr0.4700.39124hr0.4720.39148hr0.4690.39096hr0.4640.385确认结果 :通过不通过检查人 / 日期：复核人 / 日期：7.9 胆红素含量测定方法系统适用性确认7.9.1 胆红素含量测定方法系统适用性确认方法参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-02

37、04)-2002【含量测定胆红素】项下方法，进行高效液相色谱系统适用性确认：（ 1）人工牛黄甲硝唑胶囊成品胆红素含量测定溶液：精密称取批号20151201的人工牛黄甲硝唑胶囊内容物约1.7g（约相当于胆红素0.2mg ），置 50ml棕色量瓶中，加氯仿 - 甲醇 - 水 - 盐酸（90 ：10:0.3:0.03 ）混合液约40ml ，超声提取15 分钟，取出，迅速冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。（ 2）色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为甲醇- 氯仿 -1% 磷酸溶液（ 81:13:6 ），检测波长 449nm 。（ 3 ）取上述同一份含量测定溶液,连续 6 次进

38、样测定，每次进样量均为20 l，记录色谱图。7.9.2 胆红素含量测定方法系统适用性确认接受标准（ 1 ）主峰（胆红素峰）保留时间的相对标准偏差（RSD ）限度为 1.0%（ 3 ）主峰（胆红素峰）面积的相对标准偏差（RSD）限度为 2.0%（ 4 ）主峰（胆红素峰）的理论板数应大于1500（ 5 ）主峰（胆红素峰）的分离度应大于1.5-可编辑 -精品（6）主峰（胆红素峰）的拖尾因子应在0.9 1.1 之间7.9.3 方法确认记录与确认结果（1）电子天平 型号编号，高效液相色谱仪型号编号（2）系统适用性确认结果如下：试验次数1#2#3#4#5#6#RSD保留时间7.1707.1657.1657

39、.1597.1507.1690.1%峰面积5325405318385279005298225271455267710.46%理论板数205020352043203720412042胆红素峰单峰（溶剂单峰（溶剂单峰（溶剂单峰（溶剂单峰（溶剂单峰（溶剂分离度峰除外）峰除外）峰除外）峰除外）峰除外）峰除外）胆红素峰1.081.081.081.081.081.08拖尾因子确认结果 :通过不通过检查人 / 日期：复核人 / 日期7.10 胆红素含量测定方法专属性确认7.10.1 胆红素含量测定方法的专属性确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定胆红

40、素】项下规定，分别制备以下溶液，进行含量测定方法专属性的确认：（ 1）胆红素对照品溶液：取胆红素对照品约10.0mg ，精密称定，置100ml量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，摇匀，精密量取1.0ml置 25ml棕色量瓶中 , 加氯仿 - 甲醇 - 水 - 盐酸 (90 ：10 ：0.3 ： 0.03) 混合液稀释至刻度，制成每1ml 中含胆红素约4 g 的溶液，即得。（ 2）样品提取溶剂：氯仿 -甲醇 - 水 - 盐酸（ 90 ： 10:0.3:0.03 ）的混合液（ 3）人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：取20151201 批本品的内容物约 1.7g （约相当于胆红素0.2mg ），精密称定，置

41、50ml棕色量瓶中， 加氯仿 - 甲醇 - 水 - 盐酸（90 ：10:0.3:0.03 ）混合液约40ml ，-可编辑 -精品超声提取 15 分钟，取出，迅速冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。（ 4）人工牛黄阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除人工牛黄不称取外，称取甲硝唑 1.45g ，淀粉 0.145g ，二氧化硅 0.072g 共置 50ml 棕色量瓶中， 加氯仿 - 甲醇 -10%盐酸（ 50 ：50:0.3 ）混合液约40ml ，超声提取15 分钟，取出，冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。试验方法：精密吸取上述溶液各20 l，注入

42、液相色谱仪，记录色谱图。7.10.2 方法确认接受标准： （ 1）人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液主峰保留时间与胆红素对照品溶液主峰保留时间一致（相对偏差不超过0.5% ）；（2 ）人工牛黄阴性样品溶液、样品提取溶剂在胆红素峰保留时间处均应为平直基线，无吸收峰。7.10.3 方法确认记录与确认结果（1 ）电子天平型号编号，高效液相色谱仪型号编号（ 2 ）胆红素对照品称样量： 9.90mg（ 3 ）人工牛黄甲硝唑胶囊内容物称样量：批号20151201，称样量（4 ）项目确认结果胆红素含量测定 - 方法专属性确认结果测试样品胆红素对照品成品样品提取溶剂人工牛黄阴性样品胆红素峰保留7.183min7.170min在胆红素峰保留时间处为在胆红素峰保留时间处时间平直基线，无色谱峰。为平直基线， 无色谱峰。项目确认结果 :通过不通过检