酵母双杂交原理和应用

1、蛋白质相互作用研究蛋白质相互作用研究 酵母双杂交系统酵母双杂交系统 专业专业: : XXXXXX 学生学生：XXXXXXn 研究背景研究背景n 系统分类系统分类n 系统原理系统原理n 操作过程操作过程研究背景研究背景蛋白质蛋白质-蛋白质的相互作用是细胞生命活动的基础和特蛋白质的相互作用是细胞生命活动的基础和特征。例如细胞与细胞、细胞与基质的连接；细胞信号转导；征。例如细胞与细胞、细胞与基质的连接；细胞信号转导；代谢网络；以及转录、翻译调节等代谢网络；以及转录、翻译调节等. .通过酵母系统进行基因水平的检测，是采用体内实验来研通过酵母系统进行基因水平的检测，是采用体内实验来研究蛋白间的相互作用。

2、究蛋白间的相互作用。所有操作均是在核酸水平上进行，无需纯化大量的蛋白，所有操作均是在核酸水平上进行，无需纯化大量的蛋白，并可精确地测定蛋白质间弱相互作用。并可精确地测定蛋白质间弱相互作用。研究背景研究背景酵母双杂交系统分类酵母双杂交系统分类核内蛋白质相互作用的研究核内蛋白质相互作用的研究膜蛋白、膜相关蛋白和可溶性蛋白间相互膜蛋白、膜相关蛋白和可溶性蛋白间相互作用的研究作用的研究核内蛋白质间相互作用的研究核内蛋白质间相互作用的研究原理：原理：转录激活因子通常有两个可分割的、功能相互独立的结构转录激活因子通常有两个可分割的、功能相互独立的结构域，即域，即DNA特异性结合结构域（特异性结合结构域（D

3、NA-binding domain， DBD）与转录激活结构域（与转录激活结构域（transcriptional activation domain, AD）。）。DBD-Bait 和和 prey-AD 这两个融合蛋白是如何构建的？这两个融合蛋白是如何构建的？又是如何进入同一个酵母细胞的呢？又是如何进入同一个酵母细胞的呢？因此完整的酵母双杂交由三个部分组成：因此完整的酵母双杂交由三个部分组成：bait 载体，载体，prey 载体，和带有报告基因的酵母菌株。载体，和带有报告基因的酵母菌株。根据目前通用的系统中根据目前通用的系统中DBD来源的不同，主要分为来源的不同，主要分为GAL4系统和系统和L

4、exA系统。系统。GAL4系统来源于酵母；系统来源于酵母；LexA系统的系统的BD来源于原核生物，来源于原核生物，在真核生物内缺少同源性，因此可以减少假阳性的出现。在真核生物内缺少同源性，因此可以减少假阳性的出现。应用应用定义两个已知蛋白质间的相互作用；定义两个已知蛋白质间的相互作用；筛选新的蛋白质间相互作用（即筛选新的蛋白质间相互作用（即cDNA文库筛选）；文库筛选）；绘制蛋白质相互作用图谱；绘制蛋白质相互作用图谱；寻找具有药物治疗作用的小分子多肽。寻找具有药物治疗作用的小分子多肽。膜蛋白、膜相关蛋白和可溶性膜蛋白、膜相关蛋白和可溶性蛋白间相互作用的研究蛋白间相互作用的研究原理：原理：泛素（泛素（ubiquitin）N-terminusLysine 63Lysine 48C-terminus分离的泛素系统分离的泛素系统分离泛素（分离泛素（split-ubiquitin）系统）系统应用应用确