版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
1、第四章第四章 药物定量分析与分析方法验证药物定量分析与分析方法验证 第一节第一节 定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点 第三节第三节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证基本内容基本内容定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法 第二节第二节基本要求基本要求 一、熟悉定量分析样品的前处理方法一、熟悉定量分析样品的前处理方法 二、明确二、明确定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点 三、掌握定量分析方法验证的内容三、掌握定量分析方法验证的内容。第一节第一节 定量分析方法的定量分析方法的 特点特点n容量分析法容量分析法n光谱法光谱法n色谱法色谱法 一、容量分析
2、法一、容量分析法(一)容量分析法的特点(一)容量分析法的特点 容量分析法是将已知浓度的滴定液由容量分析法是将已知浓度的滴定液由滴定管滴加到待测药物的溶液中,直到所滴定管滴加到待测药物的溶液中,直到所加滴定液与被测药物按加滴定液与被测药物按化学计量反应完全化学计量反应完全为止,然后根据滴定液的浓度和消耗的体为止,然后根据滴定液的浓度和消耗的体积,就可以计算出被测药物的含量。积,就可以计算出被测药物的含量。 通常用于测定高含量和中含量组通常用于测定高含量和中含量组分,即被测组分的分,即被测组分的 含量在含量在1以上。以上。 容量分析法比较准确,一般相对容量分析法比较准确,一般相对误差可达误差可达0
3、.2以下。以下。 简便、快速、准确简便、快速、准确1.1.滴定度(滴定度(T T)的概念的概念 2. 2. 滴定度的计算滴定度的计算 (二)容量分析法的计算(二)容量分析法的计算3. 百分含量的计算百分含量的计算 (1)直接滴定法)直接滴定法 含量含量% = V F T/W 100% F = 实际标定的浓度实际标定的浓度/理论规定的浓度理论规定的浓度 (2)间接滴定法)间接滴定法 Sb5+ + 2KI Sb3+ + 2K+ + I2 I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6 H+生成物滴定法生成物滴定法例如例如 葡萄糖酸锑钠的含量测定葡萄糖酸锑钠的含量测定H+剩余滴定法剩余滴定
4、法含量含量% = ( TVF )加入加入 (TVF)剩余剩余 /W100% *两个溶液的滴定度相同两个溶液的滴定度相同这种情况下常需要做空白试验进行校正:这种情况下常需要做空白试验进行校正:含量含量% = (V 空白空白 V 剩余剩余) T F /W100%CCCONONC ONaCH2CHCH2CHCH3C3H7H司可巴比妥钠例如:司可巴比妥钠的含量测定例如:司可巴比妥钠的含量测定 间接碘量法间接碘量法 做空白试验做空白试验 求滴定度?求滴定度? 写出含量计算式?写出含量计算式? 二、光谱分析法二、光谱分析法 (一)紫外(一)紫外- -可见分光光度法(可见分光光度法(200200nmnm76
5、0nm)760nm) 灵敏度高,可达灵敏度高,可达10-4g/ml 10-7g/ml 1. 特点特点 准确度高,准确度高,SRD(%)为为2% 5%5% 仪器价格低廉,操作简单,易普及,应用仪器价格低廉,操作简单,易普及,应用 范围广。范围广。 2. 2. 朗伯朗伯- -比耳定律(比耳定律(LambertBeer定律定律 ):): A = ECLA = ECL A = E CL A = E CL E E:吸收系数吸收系数 C:C:浓度(浓度(g/100mlg/100ml) L:L:液层厚度液层厚度要求供试品溶液的要求供试品溶液的A应在应在0.3 0.73、应应 用用 情情 况况定性鉴别:定性鉴
6、别: a.a.maxmax或或E E1%1%1cm 1cm b.b.A Amaxmax /A /Aminmin c.c.与标准品溶液的吸收光谱比与标准品溶液的吸收光谱比较较 纯度检查:纯度检查:在某波长,药物无吸收,而在某波长,药物无吸收,而 在某波长,药物无吸收,而所在某波长,药物无吸收,而所含杂质有吸收,可检查某杂质的限含杂质有吸收,可检查某杂质的限度。度。 如:肾上腺素中肾上腺铜的检查如:肾上腺素中肾上腺铜的检查肾上腺素肾上腺素 2 2mg/mg/mLmL 的的0.050.05mol/L mol/L HClHCl液液, ,310310nmnm处测得的处测得的A0.05,A0.05,肾上腺
7、铜的肾上腺铜的E=435 ,E=435 ,求其限量求其限量 L=肾上腺素的浓 度肾上腺铜的浓 度100%=肾素CElA100%=0.06% 对照品比较法:对照品比较法:C Cx x=(=(A Ax x/ /A Ar r) )C Cr r; ; 含量含量%=%=C Cx xD/WD/W100 %100 % 常用方法常用方法 吸收系数法:吸收系数法: 标准曲线法:如比色法标准曲线法:如比色法 计算分光光度法:数学分离法计算分光光度法:数学分离法 含量测定含量测定(二)荧光分析法(二)荧光分析法1 1、原理:物质在受到激发光(、原理:物质在受到激发光(exex), ,照射后产生照射后产生 了较长波长
8、的荧光(了较长波长的荧光(emem), ,当激发光强当激发光强 度、波长或所用溶剂温度等条件固定时,度、波长或所用溶剂温度等条件固定时, 物质在一定浓度范围内,其荧光强度与溶物质在一定浓度范围内,其荧光强度与溶 液中该物质的浓度成正比关系。液中该物质的浓度成正比关系。 灵敏度高,可达灵敏度高,可达10-10g/ml 10-12g/ml ; 在低浓度进行测定,防止荧光强度与在低浓度进行测定,防止荧光强度与C不不 成正比及自熄灭作用成正比及自熄灭作用 ;用基准物溶液校正;用基准物溶液校正 仪器灵敏度,防止样品液荧光衰减;仪器灵敏度,防止样品液荧光衰减; 2、特点、特点: 因灵敏度高,固干扰因素多,
9、必须做空白。因灵敏度高,固干扰因素多,必须做空白。 制备荧光衍生物,可提高其灵敏度和制备荧光衍生物,可提高其灵敏度和 选择性。选择性。 用样品量少,操作简单,方法快速,应用用样品量少,操作简单,方法快速,应用 范围较广。范围较广。 3、含量测定、含量测定 常用的方法对照品比较法常用的方法对照品比较法: Cx = (Rx-Rxb)/(Rr-Rrb) C Cs sC Cx x供试品溶液浓度供试品溶液浓度 ;C CR R对照品溶液浓度对照品溶液浓度;R Rx x供试品溶液荧光强度;供试品溶液荧光强度; R RXbXb供试品溶液试剂空供试品溶液试剂空白荧光强度;白荧光强度;R Rr r对照品溶液荧光强
10、度;对照品溶液荧光强度;R Rrbrb对对照品溶液试剂空白荧光强度。照品溶液试剂空白荧光强度。 Ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片毒苷片。 4 4、应、应 用用 鉴别:鉴别:exex和和emem 荧光激发光谱荧光激发光谱, , 发射光谱发射光谱 含量测定:含量测定:a.a.标准曲线法标准曲线法b.b.比例法(对照法)比例法(对照法) 标 空 白标标空 白样FFFF=标样CC 按分离原理分为:吸附;分配;离子交换;按分离原理分为:吸附;分配;离子交换;排阻色谱排阻色谱 按分离方法分为:按分离方法分为:PC;TLC;柱色谱;柱色谱;GC;HPLC三、色谱分析
11、法三、色谱分析法方法分类方法分类 (一)(一)HPLC法法 色谱柱的理论板数:色谱柱的理论板数: n=5.54(tR/Wh/2)2 2、系统性试验、系统性试验 分离度:分离度: R = 2(tR1 tR2)/(W1 + W2); 要大于要大于1.5 拖尾因子:拖尾因子: T = W0.05h/2d1 应在应在0.951.05 重复性:重复性: 连续进样连续进样5次,次,RSD不大于不大于2.0% 1、一般要求:色谱柱、流动相、一般要求:色谱柱、流动相重复性重复性 取各品种项下的对照溶液取各品种项下的对照溶液, ,连续进样连续进样5 5次次, ,除另有规定外除另有规定外, ,其峰面积测定值的相对
12、标其峰面积测定值的相对标准差应准差应2.0%2.0%SD=1)(nXXi RSD%=XSD100% 内标法加校正因子测定供试品中主成分含量内标法加校正因子测定供试品中主成分含量3. 测定方法测定方法 标准曲线法标准曲线法 外标法测定供试品中主成分含量外标法测定供试品中主成分含量 外标一点法外标一点法 应用示例:应用示例: RP-HPLC法测定盐酸黄酮哌酯片含量,用标法测定盐酸黄酮哌酯片含量,用标准曲线法准曲线法 如头孢拉丁;头孢羟氨苄;头孢唑啉钠用外标如头孢拉丁;头孢羟氨苄;头孢唑啉钠用外标一点法一点法常用反相常用反相 HPLC HPLC 色谱法色谱法 流动相:水、甲醇流动相:水、甲醇- -水
13、、乙腈水、乙腈- -水水固定相:十八烷基硅烷键合硅胶固定相:十八烷基硅烷键合硅胶 (ODSODS或或C18C18)4 4、应用、应用 定性: 根据t tR R 含量测定:a、内标法 b、外标法 杂质检查 1. 峰面积归一化法峰面积归一化法 2. 不加校正因子的主成分自身对照法不加校正因子的主成分自身对照法 (高低浓度对照法)(高低浓度对照法) 3. 加校正因子的内标法加校正因子的内标法 4. 外标法:测定杂质的浓度外标法:测定杂质的浓度 (二)(二)GC法法 1 1、一般要求(、一般要求(ChPChP 2010 2010)载气:载气:N N2 2色谱柱:填充柱色谱柱:填充柱 毛细管柱毛细管柱进
14、样口温度:高于柱温进样口温度:高于柱温30-5030-50进样量:不大于数微升进样量:不大于数微升检测器:常用氢焰离子化检测器(检测器:常用氢焰离子化检测器(FIDFID)检测温度一般高于柱温检测温度一般高于柱温, ,不得低于不得低于1 150,50,以以免水气凝结免水气凝结, ,常用常用250-350.250-350. 内标法加校正因子测定供试品中主成分含量内标法加校正因子测定供试品中主成分含量 2. 测定方法测定方法 标准曲线法标准曲线法 外标法测定供试品中主成分含量外标法测定供试品中主成分含量 外标一点法外标一点法 标准溶液加入法:标准溶液加入法: 供试品两等份,其中一份供试品两等份,其
15、中一份 加入对照品一定量,测定得两张图谱。加入对照品一定量,测定得两张图谱。 Ax加加/Ax=(Cx+Cx)/Cx 在相同背景下测定,误差小在相同背景下测定,误差小3 3、系统适用性试验(、系统适用性试验(ChPChP 2010 2010) 除另有规定,按除另有规定,按HPLCHPLC项下的规定项下的规定色谱柱的理论板数(色谱柱的理论板数(n n)n=5.54(2/1WtR)2=16(WtR)2 分离度(分离度(R R)R=2121)2WWttRR R1.5 拖尾因子拖尾因子T=105. 02dWh (T=0.951.05) 重复性重复性 取各品种项下的对照溶液取各品种项下的对照溶液, ,连续
16、进样连续进样5 5次次, ,除另有规定外除另有规定外, ,其峰面积测定值的相对标其峰面积测定值的相对标准差应准差应2.0%2.0%SD=1)(nXXi RSD%=XSD100% 4 4、应用、应用 定性:根据定性:根据t tR R含量测定:含量测定:a a内标法内标法 b b外标法外标法 c c标准溶液加入标准溶液加入法法 杂质检查 1. 峰面积归一化法峰面积归一化法 2.内标法加校正因子测定法内标法加校正因子测定法 3. 外标法:测定杂质的浓度外标法:测定杂质的浓度 4. 标准溶液加入法标准溶液加入法: 是对外标法的改进是对外标法的改进 加入杂质的加入杂质的 对照品溶液对照品溶液目的:目的:
17、 是为了满足所选分析方法对试样的要求,是为了满足所选分析方法对试样的要求,使使 之处于可测定状态。之处于可测定状态。 第二节第二节 样品分析的前处理方法样品分析的前处理方法 1、一般情况下,原料药选择适当的溶剂溶解后,、一般情况下,原料药选择适当的溶剂溶解后, 即可以选择相应的分析方法进行分析。即可以选择相应的分析方法进行分析。 2、制剂,需要进行的前处理主要是要除去制剂敷、制剂,需要进行的前处理主要是要除去制剂敷 料以及共存的其他组分;或者使药物溶解出来料以及共存的其他组分;或者使药物溶解出来 (如软膏制剂)(如软膏制剂) 3、含金属、含卤素药物的分析时,如果利用金属、含金属、含卤素药物的分
18、析时,如果利用金属 和卤素的特征进行分析,必须使该元素以无机和卤素的特征进行分析,必须使该元素以无机 结合状态存在,需要在测定前进行处理。本章结合状态存在,需要在测定前进行处理。本章 的测定前处理仅涉及此部分内容。的测定前处理仅涉及此部分内容。 概述:概述:(一)含卤素有机药物(一)含卤素有机药物 系指药物分子结构中所含卤素直接与系指药物分子结构中所含卤素直接与芳环芳环或或脂肪链脂肪链相连者。相连者。* *不包括不包括某些有机药物的某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐卤酸盐或氢卤酸盐 结构特点:结构特点:C CX X(二)(二)含金属有机药物含金属有机药物1、金属原子不与碳原子直接相连,结合、金属原
19、子不与碳原子直接相连,结合弱,通常为弱,通常为有机酸及酚的金属盐或配位有机酸及酚的金属盐或配位化合物化合物 。M-O2、金属原子、金属原子直接与碳原子以共价键相连直接与碳原子以共价键相连,结合比较牢固。结合比较牢固。M-C 以上的结合形式,有的结合力弱,以上的结合形式,有的结合力弱,不需要有机破坏既可以转化为适合于不需要有机破坏既可以转化为适合于分析的形式,有的结合力强,需要有分析的形式,有的结合力强,需要有机破坏才可以转化为机破坏才可以转化为适合于分析的形适合于分析的形式。式。 一)含金属的有机药物的结合形式一)含金属的有机药物的结合形式1、金属离子不直接与、金属离子不直接与C原子相连:原子
20、相连: 通常为有机酸或酚类的金属盐或配位化合通常为有机酸或酚类的金属盐或配位化合 物,常称为物,常称为含金属的有机药物;含金属的有机药物;*若有机结构部分不干扰测定,可若有机结构部分不干扰测定,可不经有机破坏不经有机破坏 直接在溶液中进行定性定量分析。直接在溶液中进行定性定量分析。 2、金属离子直接与、金属离子直接与C原子以共价键相连:原子以共价键相连: 称为称为有机金属药物,需有机金属药物,需经有机破坏经有机破坏使其转使其转 变成为无机盐类后进行分析。变成为无机盐类后进行分析。二)卤原子的结合形式(活泼性)二)卤原子的结合形式(活泼性)n卤原子与碳原子直接相连卤原子与碳原子直接相连n 卤原子
21、的活泼性和它直接相连卤原子的活泼性和它直接相连的烃基的结构有很大关系:的烃基的结构有很大关系:(1)乙烯型卤和芳卤:)乙烯型卤和芳卤: 不活泼不活泼CH2CH XX碱性溶液中加还原剂(如锌粉)回流碱性溶液中加还原剂(如锌粉)回流(2)烯丙型卤和苄卤:)烯丙型卤和苄卤: 活泼活泼CH2XCH2CH CH2X(3)卤代烷型:)卤代烷型: 介于两者之间介于两者之间 碱性溶液直接回流碱性溶液直接回流CH2CH (CH2)nX n22. 分子中所含卤原子的个数分子中所含卤原子的个数 分子中所含卤原子的个数越多,活泼分子中所含卤原子的个数越多,活泼性越强,特别是同一碳上含多个卤原子或性越强,特别是同一碳上
22、含多个卤原子或一个苯环上含多个卤原子时,活泼性增强一个苯环上含多个卤原子时,活泼性增强更加明显。更加明显。 含金属或卤素的有机药物含金属或卤素的有机药物 定量分析前的处理方法定量分析前的处理方法不经有机破坏的分析方法不经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法 一、不经有机破坏的分析方法一、不经有机破坏的分析方法1.1. 直接测定法直接测定法; ;2.2. 经水解后测定法经水解后测定法; ; 3.3. 经还原分解后测定法经还原分解后测定法 (一)直接测定法(一)直接测定法 适合于:适合于:金属原子不直接与碳原子相连的金属原子不直接与碳原子相连的含金属药物或某些含金属药物或某些
23、CM(金属原子直接与(金属原子直接与碳原子相连)键结合不牢固的有机金属药物。碳原子相连)键结合不牢固的有机金属药物。 在水溶液中可以电离,因而不需有机破坏,在水溶液中可以电离,因而不需有机破坏,可直接选用适当的方法进行测定。可直接选用适当的方法进行测定。1、 配位滴定法配位滴定法n本法利用金属离子可与EDTA形成配合物,用EDTA滴定。n如明矾(如明矾(KAl(SO4)212H2O )含量的测定)含量的测定的含量测定测定黄色恰变橙色标液滴加指示剂缓冲溶液加冷至室温分钟沸水浴稀释加水标液准确加入克精称明矾样品mlVZnSOdXOpHNaAcHAcmlmlVEDTAS2412)6(10252、 氧
24、化还原滴定法n本法利用不同价态的金属离子的氧化还原性,本法利用不同价态的金属离子的氧化还原性,选用适当的滴定剂测定含量。选用适当的滴定剂测定含量。n利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量含量n例例1 富马酸亚铁的含量测定富马酸亚铁的含量测定 溶于热的稀硫酸后释放出亚铁离子,用铈溶于热的稀硫酸后释放出亚铁离子,用铈量法测定量法测定n如如富马酸亚铁的含量测定富马酸亚铁的含量测定 取本品约取本品约0.3g,精密称定,精密称定,加稀硫酸加稀硫酸 15ml,加热溶解后,加热溶解后,放冷,加新沸过的冷水放冷,加新沸过的冷水50ml与邻二氮菲指示液与邻二氮菲指示液2
25、 滴,立即用硫酸铈滴,立即用硫酸铈滴定液滴定液(0.1mol/L)滴定,并将滴定的结果用滴定,并将滴定的结果用空白试验校正。每空白试验校正。每1ml硫酸铈滴定液硫酸铈滴定液(0.1mol/L)相当于相当于16.99mg 。 富马酸亚铁富马酸亚铁 CHCHCCOO0Fe原理原理Fe2+ + Ce4+ Ce3+ + Fe2+ NN3Fe2+ eNN3Fe3+红色红色浅蓝色浅蓝色OCCHOFeHCCOOOOCCHOHCCO+Fe2+例例2 葡萄糖酸锑钠的含量测定葡萄糖酸锑钠的含量测定 在酸性条件下加入碘化钾,用硫代硫酸在酸性条件下加入碘化钾,用硫代硫酸钠滴定,碘量法测定钠滴定,碘量法测定 Sb5+
26、+ 2KI Sb3+ + 2K+ + I2 I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6 H+(二)(二) 经水解后测定法经水解后测定法 1.碱水解后测定法碱水解后测定法 本法是将含卤素有机药物溶于适当溶剂(如本法是将含卤素有机药物溶于适当溶剂(如乙醇)中,加入氢氧化钠溶液(或一定量过量的乙醇)中,加入氢氧化钠溶液(或一定量过量的硝酸银滴定液)后,加热回流使其水解,将有机硝酸银滴定液)后,加热回流使其水解,将有机结合的卤素转变为无机的卤素离子,然后采用银结合的卤素转变为无机的卤素离子,然后采用银量法(量法(Volhard法)测定。法)测定。 本法适用于含卤素有机药物结构本法适用于含
27、卤素有机药物结构中卤素中卤素原子结合不牢固的药物(如卤原子结合不牢固的药物(如卤原子和脂肪碳原子相连者)。原子和脂肪碳原子相连者)。 原理原理 三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流水解,氯元素全部转变成氯化钠,然后用剩余水解,氯元素全部转变成氯化钠,然后用剩余滴定法,即于水解液中加硝酸酸化,再加入定滴定法,即于水解液中加硝酸酸化,再加入定量过量的硝酸银滴定液,使量过量的硝酸银滴定液,使Cl-生成生成AgCl沉淀,沉淀,过量的硝酸银,以过量的硝酸银,以Fe3+为指示剂,用硫氰酸铵为指示剂,用硫氰酸铵液回滴定。液回滴定。 例例:三氯叔丁醇的测定三氯叔丁醇的测定CCl
28、3 C(CH3)2 OH + 4NaOH 回流回流(CH3)2 CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3(淡棕红色)(淡棕红色)(Ksp=1.561010 )(Ksp=1.010 12 )Fe3+ + SCN Fe (SCN) 2+ 2.用酸水解后测定法用酸水解后测定法 某些含金属的有机药物,用某些含金属的有机药物,用适当的酸性水溶液溶解并转化为适当的酸性水溶液溶解并转化为可溶性盐,适合于分析。可溶性盐,适合于分析。 如如硬脂酸镁的测定硬脂酸镁的测定 取本品约取本品约0.1g
29、,精密称定,精密加硫酸滴精密称定,精密加硫酸滴定液定液(0.05mol/L) 50ml,煮沸至油滴澄清,继煮沸至油滴澄清,继续加热续加热10min,放冷至室温,加甲基橙指示液放冷至室温,加甲基橙指示液12滴,用氢氧化钠滴定液滴,用氢氧化钠滴定液 ( 0.1 mol/L ) 滴定。每滴定。每1 ml 硫酸滴定液硫酸滴定液( 0.05mol/L )相当于相当于2.016mg的的MgO。原理:原理:Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2 C17 H35COOH2NaOH + H2SO4 Na2SO4 + 2H2O 1、碱性条件下或、碱性条件下或酸性条件下酸性条件下还原后测
30、定还原后测定(三)经还原分解后测定(三)经还原分解后测定 本法是将含卤素有机药物在碱性条本法是将含卤素有机药物在碱性条件下或酸性条件下,加还原剂(如锌件下或酸性条件下,加还原剂(如锌粉)加热回流,药物产生粉)加热回流,药物产生还原裂解反还原裂解反应应,使有机结合的卤素,使有机结合的卤素转变为无机的转变为无机的卤素离子卤素离子,然后采用银量法(,然后采用银量法(Fajans法)法)测定。测定。 本法适用于有机药物分子结构中本法适用于有机药物分子结构中的碘与苯环或者杂环直接相连,结合的碘与苯环或者杂环直接相连,结合较为牢固。可以用此法较为牢固。可以用此法将有机结合状将有机结合状态的态的卤卤素转化为
31、无机状态,适合于分素转化为无机状态,适合于分析。析。 例如例如 泛影酸的测定泛影酸的测定 取本品约取本品约0.4g,精密称定,精密称定,加氢氧化钠溶加氢氧化钠溶液液30ml与锌粉与锌粉1.0g,加热回流加热回流30min,放冷,放冷,冷凝管用少量水洗涤,滤过,烧瓶与滤器用水冷凝管用少量水洗涤,滤过,烧瓶与滤器用水洗涤洗涤3次,每次次,每次15ml,洗液与滤液合并,加冰洗液与滤液合并,加冰醋酸醋酸5ml与曙红钠指示液与曙红钠指示液5滴,用硝酸银滴定液滴,用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml硝酸银滴定液硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于相当于20.46mg的的C11H9 I
32、 3N2O4。COOHINHCOCH3IIH3COCHN+ 11NaOH + Zn回流回流COONaN H2 H2N+ 3NaI + 2CH3COONa+ 2Na2ZnO2 + H2O二、经有机破坏的分析方法二、经有机破坏的分析方法 适用于适用于金属原子与碳原子结合牢固的有机金属原子与碳原子结合牢固的有机金属药物金属药物,即采用上述方法难以将有机结合的待即采用上述方法难以将有机结合的待测原子转变为可测定的无机离子(或氧化物、测原子转变为可测定的无机离子(或氧化物、无氧酸等)的无氧酸等)的有机金属药物有机金属药物。包括:湿法破坏和干法破坏两种。包括:湿法破坏和干法破坏两种。(一一) 湿法破坏湿法
33、破坏即即酸破坏法。酸破坏法。依据所用试剂的不同依据所用试剂的不同(1)硝酸高氯酸法:)硝酸高氯酸法: 经破坏后得到的无机金属离子一般成高价态。经破坏后得到的无机金属离子一般成高价态。*此法破坏能力强,反应较剧烈,所以破坏时此法破坏能力强,反应较剧烈,所以破坏时 不能将溶液蒸干,以免发生爆炸。不能将溶液蒸干,以免发生爆炸。*本法不适合含氮杂环类有机物,破坏不完全。本法不适合含氮杂环类有机物,破坏不完全。*适合:生物样品和含动植物药制剂的破坏。适合:生物样品和含动植物药制剂的破坏。 (2 2)硝酸硫酸法:)硝酸硫酸法: 适合大多有机物质的破坏,无机离子均氧化成适合大多有机物质的破坏,无机离子均氧化
34、成高高价态。价态。 不适合能与硫酸形成不溶性盐的金属离子。不适合能与硫酸形成不溶性盐的金属离子。(3 3)硫酸硫酸盐法:)硫酸硫酸盐法: 常用的硫酸盐:硫酸钾或无水硫酸钠。常用的硫酸盐:硫酸钾或无水硫酸钠。加硫酸盐的目的:提高硫酸的沸点,加硫酸盐的目的:提高硫酸的沸点,增强硫酸的氧化增强硫酸的氧化 破坏能力破坏能力以使样品破坏完全;以使样品破坏完全; 防止硫酸在加热过程中过早分解成防止硫酸在加热过程中过早分解成SOSO2 2而损失。而损失。 *金属离子以金属离子以低低价态存在;价态存在; 常用于:含砷或锑的有机药物的破坏常用于:含砷或锑的有机药物的破坏As3+Sb 3+; 凯氏定氮法凯氏定氮法
35、氮测定法。氮测定法。 (4)其它湿法:其它湿法: 硝酸硝酸硫酸硫酸高氯酸法;高氯酸法; 硫酸硫酸氧化剂法(过氧化氢法、高锰氧化剂法(过氧化氢法、高锰 酸钾)破坏后,金属呈酸钾)破坏后,金属呈高高价态价态。 HNO3-H2SO4-HClO4法、法、 H2SO4-H2O2法、法、 H2SO4-KMnO4法。法。 分解剂分解剂 和和 氧化剂氧化剂 - 破坏共价键破坏共价键 应用实例:凯氏定氮法应用实例:凯氏定氮法用于蛋白质、氨基酸、含有氨基的药物、含用于蛋白质、氨基酸、含有氨基的药物、含有酰胺结构的药物的含量测定有酰胺结构的药物的含量测定常量法和半微量法常量法和半微量法1、消化、消化: 药物置凯氏烧
36、瓶中,加入药物置凯氏烧瓶中,加入硫酸、硫酸钾,硫酸、硫酸钾,有时还可以加入合适的催化剂如硫酸铜,有时还可以加入合适的催化剂如硫酸铜,加热,加热,是药物中的有机结构氧化分解为二氧化碳和水,是药物中的有机结构氧化分解为二氧化碳和水,有机结合的氮转化为无机氨,并与过量的硫酸有机结合的氮转化为无机氨,并与过量的硫酸结合为硫酸铵或硫酸氢铵。结合为硫酸铵或硫酸氢铵。操作过程:操作过程: 本法是往样品中加入浓硫酸作氧化剂,本法是往样品中加入浓硫酸作氧化剂,加入硫酸盐提高硫酸的沸点,增强硫酸的加入硫酸盐提高硫酸的沸点,增强硫酸的氧化破坏能力,且防止硫酸的分解损失。氧化破坏能力,且防止硫酸的分解损失。 采用了湿
37、法破坏中的硫酸采用了湿法破坏中的硫酸-硫酸盐法:硫酸盐法:2、测定法、测定法 将消化后的溶液转入将消化后的溶液转入C瓶中,加入过瓶中,加入过量的量的40%氢氧化钠溶液,前面连接水蒸氢氧化钠溶液,前面连接水蒸气装置,后边连接冷凝管,接受瓶中加气装置,后边连接冷凝管,接受瓶中加入硼酸,接受液用标准酸溶液进行酸碱入硼酸,接受液用标准酸溶液进行酸碱中和滴定。计算含量。中和滴定。计算含量。凯氏定氮蒸馏装置凯氏定氮蒸馏装置扑米酮的含量测定:扑米酮的含量测定: 含有两个含有两个N原子(原子(2个酰胺氮)个酰胺氮)(二二) 干法破坏干法破坏 适用于湿法不易破坏完全的有机物适用于湿法不易破坏完全的有机物以及某些
38、不能用硫酸进行破坏的有机以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。药物。 不适用于含易挥发性金属(如汞、不适用于含易挥发性金属(如汞、砷等)有机药物的破坏。砷等)有机药物的破坏。1、高温炽灼法、高温炽灼法 将药物高温灰化,无机物转化将药物高温灰化,无机物转化为无机元素或无机盐的形式,可供为无机元素或无机盐的形式,可供分析。分析。也称碱破坏法也称碱破坏法 有机物有机物Ca(OH)2或或Na2CO3或或MgNO3(MgO)小火灼烧,炭化,高温炽灼,完全灰化以达分小火灼烧,炭化,高温炽灼,完全灰化以达分解。解。*加碱加碱Ca(OH)2或或Na2CO3或或MgNO3(MgO)的的目的帮助灰化完全。目的帮助
39、灰化完全。 *中国药典有机药物中砷盐检查碱破坏法。中国药典有机药物中砷盐检查碱破坏法。*1)加热灼烧时温度在)加热灼烧时温度在420以下,以免某以下,以免某些被测金属化合物挥发;些被测金属化合物挥发; 2)灰化是否完全影响测定结果的准确度;)灰化是否完全影响测定结果的准确度; 如需检查灰化放冷稍过量的稀盐酸水如需检查灰化放冷稍过量的稀盐酸水 (1:3)或硝酸水()或硝酸水(1:3),振),振 摇,若呈色或有不溶有机物,可摇,若呈色或有不溶有机物,可 在水浴上将溶液蒸干,小火炭化在水浴上将溶液蒸干,小火炭化 后,再行灼烧。后,再行灼烧。 3)本法破坏后,所得灰分往往不易溶解,但)本法破坏后,所得
40、灰分往往不易溶解,但 此时切勿弃去。此时切勿弃去。a.石灰法:石灰法: 氢氧化钙小火灼烧炭化后,氢氧化钙小火灼烧炭化后,500600炽炽灼完全灰化,待砷转化为非挥发性的亚砷酸钙灼完全灰化,待砷转化为非挥发性的亚砷酸钙Ca3(AsO3)2,再依法检查。,再依法检查。*本法操作简单,但应注意完全灰化,否则可使本法操作简单,但应注意完全灰化,否则可使 砷斑较浅且重现性差。砷斑较浅且重现性差。b.无水碳酸钠碱融法无水碳酸钠碱融法: 环状结构的有机酸碱金属盐苯甲酸钠、对环状结构的有机酸碱金属盐苯甲酸钠、对氨基水杨酸钠,采用石灰法不能破坏完全,可采氨基水杨酸钠,采用石灰法不能破坏完全,可采用此法。用此法。
41、c.硝酸镁乙醇溶液法:硝酸镁乙醇溶液法: 炽灼破坏分解有机物,使砷转化为非挥发性炽灼破坏分解有机物,使砷转化为非挥发性的砷酸镁的砷酸镁Mg(AsO4)2,残渣质轻,残渣质轻,HCl易溶。易溶。*本法操作简单,易于灰化,并且砷能定量回收。本法操作简单,易于灰化,并且砷能定量回收。但应注意灰化完全,使硝酸镁完全分解为氧化镁。但应注意灰化完全,使硝酸镁完全分解为氧化镁。*如有硝酸盐或亚硝酸盐残留,则在酸性溶液中如有硝酸盐或亚硝酸盐残留,则在酸性溶液中生成硝酸和亚硝酸,影响砷化氢气体的生成。生成硝酸和亚硝酸,影响砷化氢气体的生成。 注意事项:注意事项:(1)加热或灼烧时,应控制温度在)加热或灼烧时,应
42、控制温度在 以下;以下;(2)一定要灰化完全。)一定要灰化完全。2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法(1)原理)原理 将有机药物放入将有机药物放入充满氧气充满氧气的的密闭密闭燃烧瓶燃烧瓶中进行中进行燃烧燃烧,并将燃烧所产生的欲测物质,并将燃烧所产生的欲测物质吸收吸收于适当的于适当的吸收液吸收液中,然后根据欲测物中,然后根据欲测物质的性质,采用适宜的分析方法进行鉴别、质的性质,采用适宜的分析方法进行鉴别、检查或含量测定检查或含量测定NaClHClOClCNaOH2 溶液点燃 适用于含卤素、硫、氮、硒等有机适用于含卤素、硫、氮、硒等有机 药物的分析药物的分析 本法特点是简便、快速、本法特点是简便、快速、破坏
43、完全,尤其适用于微量破坏完全,尤其适用于微量样品的分析。样品的分析。 ( 2) 仪器与材料仪器与材料 仪器装置仪器装置 燃烧瓶为燃烧瓶为500、1000或或2000ml无无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶;色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶;瓶塞瓶塞空心,底部熔封铂丝一根,下端空心,底部熔封铂丝一根,下端呈螺旋状或网状呈螺旋状或网状 称样用材料及称样称样用材料及称样 A. A. 固体样品固体样品 无灰滤纸无灰滤纸 B. B. 液体样品液体样品 纸袋纸袋 吸收液吸收液 A. 作用:作用:吸收液的作用是将样品经吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、
44、硒等,硫、氮、硒等,定量地吸收并转变为定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态一定的便于测定的价态氧气氧气B. 吸收液的选择吸收液的选择 氟氟 水水 氯氯 NaOH溶液溶液溴溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液碘碘 NaOH硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液硫硫 NaOH或或H2O2 硒硒 硝酸溶液硝酸溶液(3)操作方法)操作方法燃烧瓶燃烧前的准备燃烧瓶燃烧前的准备用洗液洗净后,按各药品项下的规定加入用洗液洗净后,按各药品项下的规定加入吸收液,将瓶口用水湿润,小心急速地通吸收液,将瓶口用水湿润,小心急速地通入氧气入氧气1min。 样品的准备样品的准备 取样品适量,精密称定后按
45、规取样品适量,精密称定后按规定方法包裹,固定于铂丝下端的网内定方法包裹,固定于铂丝下端的网内或螺旋处。或螺旋处。样品的燃烧样品的燃烧 点燃包有供试品的滤纸尾部,迅速放点燃包有供试品的滤纸尾部,迅速放入燃烧瓶中,按紧瓶塞,加水少量封闭瓶入燃烧瓶中,按紧瓶塞,加水少量封闭瓶口,俟燃烧完毕(应无黑色碎片),充分口,俟燃烧完毕(应无黑色碎片),充分振摇,使生成的烟雾完全吸入吸收液中,振摇,使生成的烟雾完全吸入吸收液中,放置放置15min,用水少量冲洗瓶塞及铂丝,用水少量冲洗瓶塞及铂丝,合并洗液及吸收液,同法另做空白试验。合并洗液及吸收液,同法另做空白试验。然后按各药品项下规定的方法进行然后按各药品项下
46、规定的方法进行鉴别、鉴别、检查或含量测定。检查或含量测定。 待分解样品量待分解样品量 燃烧瓶的体积燃烧瓶的体积 35mg(微量分析)微量分析) 150250ml 2030mg(半微量分析)半微量分析) 300500ml 5060mg 1000ml 0.60.7g或更多或更多 2000ml或特殊结或特殊结 构的燃烧瓶构的燃烧瓶例例 碘苯酯的含量测定碘苯酯的含量测定 ChP(2000)原理原理 碘苯酯系有机碘化物,用氧瓶燃烧分碘苯酯系有机碘化物,用氧瓶燃烧分解,转变为碘化物,继而氧化为游离的碘,解,转变为碘化物,继而氧化为游离的碘,并被定量地吸收于吸收液中,和氢氧化钠反并被定量地吸收于吸收液中,和
47、氢氧化钠反应,生成碘化物与碘酸盐,加入溴应,生成碘化物与碘酸盐,加入溴- -醋酸溶醋酸溶液,使全部转变为碘酸盐,过量的溴以甲酸液,使全部转变为碘酸盐,过量的溴以甲酸及通空气去除。加入碘化钾,使与碘酸盐反及通空气去除。加入碘化钾,使与碘酸盐反应析出应析出游离碘,用硫代硫酸钠液滴定,碘与游离碘,用硫代硫酸钠液滴定,碘与淀粉结合所显的蓝色消失即为终点淀粉结合所显的蓝色消失即为终点 。 取本品约取本品约20mg,精密称定,照氧瓶燃烧法精密称定,照氧瓶燃烧法进行有机破坏,用氢氧化钠试液进行有机破坏,用氢氧化钠试液2ml与水与水l0ml为为吸收液,待吸收完全后,加溴醋酸溶液吸收液,待吸收完全后,加溴醋酸溶
48、液(取醋酸钾取醋酸钾10g,加冰醋酸适量使溶解,加溴加冰醋酸适量使溶解,加溴0.4ml,再加冰再加冰醋酸使成醋酸使成1000m1)l0ml,密塞,振摇,放置数分密塞,振摇,放置数分钟,加甲酸约钟,加甲酸约lml,用水洗涤瓶口,并通入空气流用水洗涤瓶口,并通入空气流约约35min以除去剩余的溴蒸气,加碘化钾以除去剩余的溴蒸气,加碘化钾2g,密塞,摇匀,用硫代硫酸钠滴定液密塞,摇匀,用硫代硫酸钠滴定液(0.02Mol/L)滴定,至近终点时,加淀粉指示液,继续滴定,至近终点时,加淀粉指示液,继续滴定至蓝色消失,并将滴定的结果用空白试验校滴定至蓝色消失,并将滴定的结果用空白试验校正。正。每每lml的硫
49、代硫酸钠滴定液的硫代硫酸钠滴定液(0.02mol/L)相当于相当于1.388mg的的C19H29IO2。 滴定度的计算滴定度的计算 放大反应放大反应2mol碘苯酯碘苯酯1molI21molI21molNaIO+1molNaI1molNaIO1/3molNaIO3+2/3molNaI321molNaI+Br2321molNaIO3即即2mol碘苯酯碘苯酯2molNaIO32mol NaIO3+10I 6molI2即即2mol碘苯酯碘苯酯1molI2 6molI212molI12molNa2S2O3反应摩尔比为反应摩尔比为1 6mlmgncMT/388. 1634.41602. 098:140.
50、氧瓶燃烧法中的装置有A. 磨口硬质玻璃锥形瓶B. 磨口软质玻璃锥形瓶C. 铂丝D. 铁丝E. 铝丝96:133(99x:138)选择氧瓶燃烧法所必备的实验物品A. 磨口硬质玻璃锥形瓶B. 铂丝C. 普通滤纸D. 氢气 E. 无灰滤纸99:76氧瓶燃烧法测定含氯有机药物时所用的吸收液多数为A. H2O2溶液B. H2O2NaOH溶液C. NaOH溶液D硫酸肼饱和液E. NaOH硫酸肼饱和液99:134. 氧瓶燃烧法可用于A. 含卤素有机药物的含量测定B. 醚类药物的含量测定C. 检查甾体激素类药物中的氟D. 检查甾体激素类药物中的硒E. 芳酸类药物的含量测定第三节第三节 药品分析方法的验证药品分
51、析方法的验证 一、一、目的目的 证明所采用的分析方法适合于相应的检测证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求,要求,能够真实地反映药品内在的质量能够真实地反映药品内在的质量。方法方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草和修验证过程和结果均应记载在药品标准起草和修订说明中。订说明中。 二、用途二、用途(一)药品质量标准起草时,分析方(一)药品质量标准起草时,分析方 法需经验证。法需经验证。(二)药物原分析方法进行修订或变更(二)药物原分析方法进行修订或变更 时,分析方法需经验证。时,分析方法需经验证。三、需验证的分析项目三、需验证的分析项目1. 1. 鉴别试验;鉴别试验;2. 2. 杂质定量或限
52、度检查;杂质定量或限度检查;3. 3. 原料或制剂中有效成分含量测定;原料或制剂中有效成分含量测定;4. 4. 制剂中其它成分(降解产物、防腐剂等)制剂中其它成分(降解产物、防腐剂等) 的测定;的测定;5. 5. 溶出度、释放度等检查中,其溶出量溶出度、释放度等检查中,其溶出量 等的测试方法。等的测试方法。 验证内容有:准确度、精密度验证内容有:准确度、精密度(重复性、中间精密度和重现性)、(重复性、中间精密度和重现性)、专属性、检测限、定量限、线性、范专属性、检测限、定量限、线性、范围、耐用性,共八项内容。围、耐用性,共八项内容。四、验证内容四、验证内容 一、准确度一、准确度 是指用该方法测
53、定结果与真实值或参考值接是指用该方法测定结果与真实值或参考值接 近的程度,一般用回收率表示。准确度应在近的程度,一般用回收率表示。准确度应在 规定的范围内测试。规定的范围内测试。 测定回收率测定回收率R(recovery)的具体方法可采用的具体方法可采用 “回收试验法回收试验法”和和“加样回收试验法加样回收试验法”。 n1、 原料药原料药 用对照品做回收率用对照品做回收率n 2、 制剂制剂 要考察辅料对回收率的影响要考察辅料对回收率的影响 回收试验回收试验 空白(敷料组成)空白(敷料组成)+ +已知量已知量A A的的对照品,测定,测定值的均值为对照品,测定,测定值的均值为 M M%100AMR
54、 模拟了被测定物的环境,从而真实反映模拟了被测定物的环境,从而真实反映 测定方法的准确程度测定方法的准确程度3、如果被测定物的背景是不能够模拟的,、如果被测定物的背景是不能够模拟的,该如何考虑背景的影响?该如何考虑背景的影响? 前提:具有已知含量的供试品前提:具有已知含量的供试品 比如中药的有效成分的测定?比如中药的有效成分的测定? 加样回收试验加样回收试验 已准确测定药物含量已准确测定药物含量P P的真实样品的真实样品+ +已知量已知量A A的的对照品,测定值为对照品,测定值为M M%100APMR回收率回收率% = (测定平均值(测定平均值 空白值)空白值)/加入量加入量100% 含量测定
55、方法的回收率测定总结:含量测定方法的回收率测定总结: 原料药:用对照品进行测定原料药:用对照品进行测定 制剂:采用在空白辅料中加入对照制剂:采用在空白辅料中加入对照品品 的方法。的方法。如不能得到制剂的全部组分,即如不能得到制剂的全部组分,即空白空白辅料,辅料,可向制剂中加入已知量的被测物可向制剂中加入已知量的被测物进行测定,前提是进行测定,前提是制剂中被测定物的含制剂中被测定物的含量是已知的。加样回收试验量是已知的。加样回收试验 中药分析的准确度用加样回收试验中药分析的准确度用加样回收试验衡量。衡量。 二、精密度二、精密度 是指在规定的测试条件下,同一个均匀是指在规定的测试条件下,同一个均匀
56、样品,经多次测定结果样品,经多次测定结果 之间的接近程度。之间的接近程度。 (一)精密度表示方法(一)精密度表示方法 相对标准偏差相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)也称变异系数也称变异系数 (coefficient of variation, CV) RSD=标准偏差标准偏差/平均值平均值100%=SD/X 100%1 1、 重复性重复性 在相同条件下,由同一个分析人员测定在相同条件下,由同一个分析人员测定所得结果的精密度。在规定的范围内,至所得结果的精密度。在规定的范围内,至少用少用9 9次测定结果评价,即制备三个不同次测定结果评价,即制备三个不
57、同浓度样品各测三次的结果进行评价。浓度样品各测三次的结果进行评价。 2. 中间精密度中间精密度 同一同一实验室,实验室,不同不同时间由时间由不同不同分析人员,分析人员,用用不同不同设备所得结果的精密度。设备所得结果的精密度。 在实验地点没有变化的情况下在实验地点没有变化的情况下考察随机考察随机变动因素的影响,变动因素的影响,如如不同日期、不同分析不同日期、不同分析人员、不同设备,只是人员、不同设备,只是地点地点没有变化。没有变化。 3. 重现性重现性 不同不同实验室,实验室,不同不同分析人员测定结果的精分析人员测定结果的精密度。所有的因素都发生了变化。当分析方密度。所有的因素都发生了变化。当分
58、析方法将被法定标准采用时,应进行重现性试验。法将被法定标准采用时,应进行重现性试验。 三、专属性三、专属性 是指在其他成分是指在其他成分(如杂质、降解产物、如杂质、降解产物、辅料等辅料等) 存在下,采用的方法能准确测定存在下,采用的方法能准确测定出被测物的特性。出被测物的特性。 鉴别反应、杂质检查、含量测定方鉴别反应、杂质检查、含量测定方法,均应考察其专属性。法,均应考察其专属性。 四、检测限(四、检测限(limit of detection, LOD) 是指试样中被测物能被检测出的是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量最低浓度或量。它反映方法是否具有灵敏的检测能力,即是否具它反映方法是否具
59、有灵敏的检测能力,即是否具备备足够的灵敏度。足够的灵敏度。 (一)(一)常用的方法常用的方法 1. 1. 目视法目视法 用已知浓度被测物,试验出能被可用已知浓度被测物,试验出能被可 靠地检测出的最低浓度或量。靠地检测出的最低浓度或量。SeeSee图图4-54-5 2. 2.仪器分析方法(信噪比法)仪器分析方法(信噪比法) GCGC和和HPLCHPLC法:进样已知低浓度的样品法:进样已知低浓度的样品一般以一般以S S/ /N N = 2 = 2或或3 3时的相应浓度或注入仪器的量时的相应浓度或注入仪器的量确确定定LODLOD,此时的溶液浓度即为此时的溶液浓度即为LOD 。 seesee图图4-6
60、 4-6 五、定量限(五、定量限(limit of quantitation, LOQ) 是指样品中是指样品中被测物能被被测物能被定量测定定量测定的最低量的最低量,其其 测定结果应具一定测定结果应具一定准确度和精密度准确度和精密度。 一般以一般以S/N=10 S/N=10 时的溶液浓度进行实验,确定时的溶液浓度进行实验,确定 具有一定具有一定准确度和精密度准确度和精密度的的最低量最低量。 六、线性六、线性 是指在设定的范围内,测定结果(响应值)与试是指在设定的范围内,测定结果(响应值)与试样中被测物浓度呈样中被测物浓度呈正比正比关系的关系的程度程度。 UVUV法:首先制备一个标准系列,浓度点法
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 密闭容器中光合作用
- 人教部编版四年级语文上册第18课《牛和鹅》精美课件
- 福建省福安一中2024年高考高三数学试题3月模拟考试题
- 2024年太原客运从业资格证实操考试内容
- 2024年云南客运资格证场景模拟
- 2024年榆林客运资格证仿真考试题
- 人教版五年级数学上册《应用题天天练》第六单元多边形的面积3梯形的面积(有答案)2
- 2024年(3篇文)个人述职述廉报告
- 吉首大学《教师职业道德与专业发展》2021-2022学年第一学期期末试卷
- 吉首大学《城乡园林绿地规划设计》2021-2022学年第一学期期末试卷
- 上海市普陀区2024-2025学年六年级(五四学制)上学期期中语文试题
- 封条模板A4直接打印版
- 中国水利水电第三工程局有限公司国内工程分包管理办法
- 煤炭实验室建设要求
- 倪志钦:年轻有遗憾没伤感
- 干辣椒收购合同协议书范本通用版
- 印度英文介绍 india(课堂PPT)
- 水稻栽培技术指导方案
- 旅游线路设计实务 理论知识篇
- 工程地质学—地貌
- 应聘登记表(CMHR
评论
0/150
提交评论