白花丹参叶水提物对糖尿病大鼠脑组织损伤的影响

1、白花丹参叶水提物对糖尿病大鼠脑组织损伤的影响              作者：李大伟 张玲 赵晓民 王欣农 夏青 夏作理【摘要】  目的研究白花丹参叶水提物对糖尿病大鼠脑组织损伤的影响。方法高脂饲料诱导后尾静脉注射链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）建立Wistar大鼠糖尿病模型。给药治疗后测定脑组织内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase， SOD）的活性及丙二醛（malondialdehyde，MDA）、一氧化氮（nitric o

2、xide ，NO）的含量。结果白花丹参叶制剂能明显降低糖尿病大鼠血糖，同时大鼠体重稳定增加。模型组大鼠脑内SOD活性显着降低，MDA，NO含量明显升高；白花丹参叶水提物治疗后大鼠脑内SOD活性明显增高，MDA，NO含量显着下降。结论白花丹参叶水提物能增加糖尿病大鼠脑内抗氧化酶活性，抑制脂质过氧化反应，调节NO生成，减轻过氧化损伤起到脑保护作用。 【关键词】  白花丹参 水提物 糖尿病1  器材与方法1.1  仪器与试剂冷冻干燥机（FD-190北京博医康技术公司），755B紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）， Sigma（3K30）高速冷冻离心机，血糖仪，电

3、子天平，STZ(Sigma 015K1279),盐酸二甲双胍（北京市京丰制药有限公司），胆固醇（上海伯奥生物科技有限公司），丙基硫氧嘧啶（上海复星朝晖药业有限公司），SOD，MDA，NO，双缩脲检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）。1.2  动物及分组清洁级成年健康雄性Wistar大鼠（山东鲁抗医药公司实验动物中心提供，质量合格证：SCXK 鲁 20050017号）70只，体重210220 g，分笼饲养，标准饲料，自由饮水。动物房适应1周后，随机分为正常对照组和模型组，模型组60只大鼠喂饲高脂饲料，高脂饲料配方：1胆固醇，10猪油，0.2丙基硫氧嘧啶，89基础饲料3。由山东泰安米歇尔

4、生物制品研究所提供。4周后，大鼠尾静脉注射pH 4.2柠檬酸柠檬酸钠缓冲液溶解的STZ（40 mg/kg·bw），72 h后检测随机血糖13 mmol/L，即确定为糖尿病大鼠。经检测确立模型成立大鼠53只，将其中50只大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组、白花丹参治疗低、中、高剂量组，每组各10只大鼠。1.3  白花丹参叶水提物的制备及给药白花丹参由山东莱芜苗山中药产业化科技示范基地提供，白花丹参叶晾干粉碎，过30目的网眼筛，将10 g白花丹参叶粉末在100水中浸泡5 min然后过滤，所得滤液进行冷冻干燥，冻干粉置于干燥器中避光4保存待用4。白花丹参叶水提物冻干粉制备成浓度为

5、0.16，0.32，0.53 g/ml的双蒸水溶液，每天新配制后以1 ml/100 g  bw的量给大鼠灌胃，对照组给予等量的容剂灌胃5。盐酸二甲双胍双蒸水溶解按照浓度为0.83 mmol/kg6灌胃给药。各治疗组大鼠连续给药4周。1.4  指标检测及方法实验过程中检测大鼠血糖及体重，给药4周后，心脏灌注冰PBS将血液冲净后迅速在冰盘上断头取脑，滤纸吸干水分，精确称重后与冰PBS混合制备成10匀浆，按照试剂盒要求紫外分光光度计检测各项指标。双缩脲法检测脑组织蛋白含量，硝酸还原酶法检测NO，TBA法检测MDA，黄嘌呤氧化酶法检测脑组织总SOD。  

6、0;      1.5  统计方法实验数据以±s表示，采用SPSS12.0软件包进行统计学分析，Levene方差齐性检验各组方差齐性（P0.05），应用单因素方差分析， t检验进行均数两两比较。检验标准0.05（阳性对照组大鼠实验过程中死亡2只，将其数据舍弃不用）。2  结果2.1  实验过程中各组大鼠体重、血糖的变化情况见表12。与正常对照组相比较，模型组大鼠血糖显着升高（P0.01）。丹参治疗组（DS）与模型对照组(MC)相比体重显着增加（P0.01），阳性对照药二甲双胍组(MET)体重与模型对照组没

7、有显着性差异。各治疗组均能显着降低血糖，丹参高剂量组（DS-H）、二甲双胍组与模型组相比均有显着性差异（P0.01）。白花丹参叶制剂能明显降低糖尿病大鼠血糖，同时大鼠体重稳定增加。表1  实验过程中体重变化情况（略）表2  实验过程中血糖变化情况(略)2.2  实验过程中各组大鼠脑组织内SOD活性及MDA，NO的含量见表3。与正常对照组（NC）相比，各模型组大鼠脑组织内SOD活性显着降低(P0.01)，MDA、NO的含量则明显升高(P0.010.05)。与模型对照组（MC）相比，阳性对照二甲双胍组（MET）、丹参叶水提物各浓度组（DS）SOD活性显着增高，MDA、

8、NO的含量则明显降低(P0.010.05)。由此可见白花丹参叶水提物可以增加机体抗氧化酶的活性，减轻脂质过氧化及减少NO产生。表3  大鼠脑组织中SOD，MDA，NO含量(略)3  讨论   糖尿病对中枢神经系统的损害表现为增加中风的危险性并加重其损害，加重脑缺血缺氧所致的脑血管损害及神经元坏死等7。糖尿病时由于糖代谢紊乱导致机体葡萄糖自身氧化，蛋白非酶糖化，代谢应激等使机体产生大量活性氧8，氧自由基通过生物膜中不饱和脂肪酸过氧化，脂质过氧化物及其分解产物引起细胞损伤。正常时机体内抗氧化酶可以清除过剩的氧自由基，抑制脂质过氧化反应对机体起到保护作用。糖尿病时机体抗氧化酶发生糖化或氧化，导致机体抗氧化酶如SOD活性下降。而反映氧化应激水平的物质如脂质过氧化终末产物MDA含量则明显升高9。NO可作为自由基而损伤神经元，NO与超氧阴离子自由基（O2·）形成过氧化亚硝基阴离子（ONOO）是其主要毒性作用途径10。通过实验观察发现，白花丹参叶水提物治疗组大鼠与模型对照组大鼠相比脑组织内SOD活性明显增高，MDA，NO的含量则明显降低。提示白花丹参叶水提物能增加糖尿病大鼠脑内抗氧化酶活性，抑制脂质过氧化反应，减少NO生成，从而减轻糖尿病脑组织过氧化损伤起到保护脑组织的作用。   糖尿病及代谢综合征日益威胁着人