饲料中粗蛋白的测定专业课件

1、饲料中粗蛋白的测定1 精品PPT 常用方法 国标法 凯氏定氮仪法 强碱直接蒸馏法 双氧水法2 精品PPT 样品的采集、制备 生产单位有代表性的原料检样：鱼粉、玉米蛋白粉、豆粕 采用四分法将检样缩至500g，粉碎后通过40目筛，装于密闭容器中，防止试样成分变化或变质3 精品PPT 国标法 实验原理 国标法测定试样中含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化为硫酸铵，加入碱进行蒸馏使NH3 逸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定，测出含氮量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白的含量。4 精品PPT 实验试剂 硫酸：化学纯，含量为98%，无氮； 混合催化剂：0.4gCuSO4，6gK2

2、SO4 或 Na2SO4 均为化学纯，磨碎混匀； NaOH：40% 水溶液，化学纯； 硼酸：2% 水溶液，化学纯； 混合指示剂； 0.1mol/LHCl标准溶液； 0.02mol/LHCl标准溶液； 蔗糖：分析纯； 硫酸铵：分析纯，干燥； 硼酸吸收液。5 精品PPT 仪器 实验用样品粉碎机或研钵； 40目分析筛； 分析天平； 电炉； 酸式滴定管； 凯氏蒸馏装置； 凯氏定氮装置6 精品PPT 操作步骤 试样的消化 称取试样 0.5 1g（含氮量5 80mg），准确至0.0002g，小心无损的将样本放入 100mL洗净烘干的凯氏烧瓶中。加入 6.4g 混合催化剂与试样混合均匀，再加入 12mL 硫

3、酸和两粒玻璃珠。将凯氏烧瓶置于通风厨里的电炉上加热，开始加热时，先用小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力，消化时经常转动消化瓶，使全部样本浸入硫酸内，如有黑色油在瓶壁，应待烧瓶冷却后加少量蒸馏水冲洗，再继续加热消化。如有黑炭粒不能全部消化，则待烧瓶冷却后，补加少量硫酸加热，直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热至消化完毕。7 精品PPT 氨的蒸馏 试样消煮液冷却后加入20mL蒸馏水，转入100mL 容量瓶内，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。将蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有 20mL 硼酸吸收液和 2 滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴、硫酸数滴，在蒸馏过程

4、中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液1020mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，以防漏气。蒸馏4min后降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。8 精品PPT 空白测定 称取蔗糖0.5g，代替试样，按照前面的消化蒸馏方法进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过 0.2mL，消耗 0.2mol/L 的盐酸标准溶液不得超过0.3mL。 9 精品PPT 滴定 蒸馏后的吸

5、收液立即用 0.1mol/L 或0.2mol/L标准盐酸溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色。同样滴定试剂空白消化液。 10 精品PPT 9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2022-3-132022-3-13Sunday, March 13, 202210、低头要有勇气，抬头要有低气。2022-3-132022-3-132022-3-133/13/2022 1:47:24 AM11、人总是珍惜为得到。2022-3-132022-3-132022-3-13Mar-2213-Mar-2212、人乱于心，不宽余请。2022-3-132022-3-132022-3-13Sunday, March

6、13, 202213、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2022-3-132022-3-132022-3-132022-3-133/13/202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年3月13日星期日2022-3-132022-3-132022-3-1315、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。2022年3月2022-3-132022-3-132022-3-133/13/202216、业余生活要有意义，不要越轨。2022-3-132022-3-13March 13, 202217、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2022-3-132022-3-132022-3-132022-3-13

7、结果计算粗 蛋 白 质 含 量（%）= （V-V0 ）N 0.0146.25100 M(V 2V 1) 式中： V滴定样品吸收液时所消耗的盐酸标准溶（mL)； V0 空白测定吸收液所消耗的盐酸标准溶液（mL) ； V1 样品消化液总的体积（mL）； V2 从100mL消化分解液中吸取的消化液体积（mL)； 0.014氮的毫克当量数； M样品的质量（g）； N盐酸标准溶液当量浓度 12 精品PPT 9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2022-3-132022-3-13Sunday, March 13, 202210、低头要有勇气，抬头要有低气。2022-3-132022-3-132022

8、-3-133/13/2022 1:47:24 AM11、人总是珍惜为得到。2022-3-132022-3-132022-3-13Mar-2213-Mar-2212、人乱于心，不宽余请。2022-3-132022-3-132022-3-13Sunday, March 13, 202213、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2022-3-132022-3-132022-3-132022-3-133/13/202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年3月13日星期日2022-3-132022-3-132022-3-1315、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。2022年3月2022-3-132

9、022-3-132022-3-133/13/202216、业余生活要有意义，不要越轨。2022-3-132022-3-13March 13, 202217、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2022-3-132022-3-132022-3-132022-3-13凯氏定氮仪法 试剂 同凯氏定氮测粗蛋白法仪器 自动或半自动定氮仪14 精品PPT 操作步骤 试样的消化 称取试样 0.5 1g（含氮量5 80mg），准确至0.0002g，放入消化管中，加两片消化片（仪器自备）或6.4g混合指示剂、12mL硫酸，于420在消煮炉上消化1h，取出放凉后加入30mL蒸馏水。15 精品PPT 氮的蒸馏 采

10、用定氮仪，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以 25mL 硼酸为吸收液，加入两滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化管中加入 50mL 氢氧化钠溶液进行蒸馏。蒸馏时间以流出的液体呈中性为宜，可用pH试纸测试。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。16 精品PPT 滴定空白测定计算 （同国标法）17 精品PPT 强碱直接蒸馏法 强碱直接蒸馏法 (Direct Distillation，俗称DD法)是间接测定饲料中粗蛋白质的一种简便的方法。18 精品PPT 实验原理 其原理是将粉碎的饲料样品在强碱中消煮，使饲料中的 - 氨基、酰氨基以及某些特殊基

11、团上的氮素在强碱的作用下以氨的形式释放出来，直接蒸馏到硼酸中，再用盐酸溶液来滴定，根据盐酸消耗量来计算 DD 法所测得的表观含氮量。但是，由于 DD 法测定过程中的氨量的释放是不定量进行的，因此必须根据经典的凯氏定氮法所标定的校正数值，用一定的回归方程来计算样品中的粗蛋白质的含量。19 精品PPT 试验步骤 消化 称量5.000g样品，粉碎经40目筛后放500mL 凯氏烧瓶中，加 50mL 蒸馏水（边加边摇），使充分混合。 20 精品PPT 蒸馏 向凯氏烧瓶中加入 25mL 10% 氯化钡溶液，振荡摇匀，再加120mL 40% 的氢氧化钠溶液，立即连接蒸馏装置进行蒸馏。把蒸馏装置冷凝管的末端浸

12、入盛有 50mL 2% 的硼酸溶液和 2 滴混合指示剂的锥形瓶中，轻轻摇动凯氏烧瓶使溶液混匀，然后加热进行蒸馏，待蒸馏出的液体体积达到100mL（总体积达到150mL）时停止蒸馏。21 精品PPT 滴定用0.1mol/L的盐酸标准溶液进行滴定。22 精品PPT 结果计算 粗蛋白质含量（%）= （V 2V 1）C 0.0146.25 100 M式中：V2 滴定试样时所需标准酸溶液的体积（mL）； V 1滴定空白时所需标准酸溶液体积（mL）； C盐酸标准溶液浓度（mol/L）； M试样质量（g）； 0.014C(HCl)=1.000mol/L与1.00mL盐酸标准溶液 相当的、以g表示氮的质量；

13、样品中含氮量用以下的回归方程计算： y=9.2918x-0.2852 式中： x为DD法测定所得到的含氮量； y为样品的实际含氮量。23 精品PPT 双氧水法测定试剂 硫酸：化学纯，含量为98%，无氮； 双氧水：分析纯，含量为30%； 氢氧化钠：双氧水：分析纯，含量为40%（m/v）； 硼酸：化学纯， 2% 水溶液（m/v）； 混合指示剂；盐酸标准溶液； 邻苯二甲酸氢钾法标定液； C（HCl）=0.1mol/L、 8.3mL 盐酸（分析纯）注入 1000mL蒸馏水中； 蔗糖：分析纯； 硫酸铵（GB1396）：分析纯，干燥。24 精品PPT 仪器 实验室用样品粉碎机或研钵; 分样筛孔径 0.45

14、mm（40 目）; 分析天平（感量0.0001g）; 消煮炉或电炉; 10mL、25mL 酸式滴定管；250mL 消化管；150mL ；250mL 锥形瓶 ；定氮仪（以凯氏原理制造的各类型半自动蛋白质测定仪）。25 精品PPT 原理 浓硫酸和 30% 浓度的双氧水都是强氧化剂。饲料中的有机物接触到浓硫酸便被脱水炭化。但是在高温条件下，向未被硫酸完全氧化的饲料中滴加 30% 的双氧水，会使饲料中的有机物彻底氧化、分解，放出 CO2 、SO2 ，而释放出的氨气则和硫酸结合生成硫酸铵。然后用半微量凯氏定氮装置对接收液进行蒸馏，再用盐酸标准溶液对接收 定氮装置对接收液进行蒸馏，再用盐酸标准溶液对接收的

15、含量。 26 精品PPT 试验步骤 样品消化 样品粉碎后全部通过40目。称取试样 0.2 2.0g（含氮量 5 80mg），准确至0.0002g，放入消化管中，加 10mL 浓硫酸摇匀，管口上放一只小漏斗（在消化过程中起回流作用，以减少硫酸的损失），放在电炉上消煮20min，当硫酸大量冒烟、消化液呈酱油色时，将消化管取下稍冷却（手摸不烫手），向管内加双氧水 10 15 滴，加热消化。如此反复 2 3 次，直至管内溶液澄清透明为止。取下消化管，冷却后注入30mL蒸馏水备用。 27 精品PPT 氨的蒸馏 采用定氮仪，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以 25mL 硼酸为吸收液，加入两滴混合指示剂，蒸

16、馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化管中加入 50mL 氢氧化钠溶液进行蒸馏。蒸馏时间以流出的液体呈中性为宜，可用pH试纸测试。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。28 精品PPT 滴定 用0.1mol/L的标准盐酸滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。记录好盐酸的用量，然后计算出饲料中的粗蛋白质的含量。29 精品PPT 空白测定 同国标法30 精品PPT 结果计算 计算方法同国标法31 精品PPT 9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。22.3.1322.3.13Sunday, March 13, 202210、低头要有勇气，抬头要有低气。*

17、3/13/2022 1:47:24 AM11、人总是珍惜为得到。22.3.13*Mar-2213-Mar-2212、人乱于心，不宽余请。*Sunday, March 13, 202213、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。22.3.1322.3.13*March 13, 202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年3月13日星期日*22.3.1315、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。2022年3月*22.3.13*March 13, 202216、业余生活要有意义，不要越轨。*3/13/202217、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。*22.3.13谢谢大家谢谢大家32 精品PPT 9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2022-3-132022-3-13Sunday, March 13, 202210、低头要有勇气，抬头要有低气。2022-3-132022-3-132022-3-133/13/2022 1:47:24 AM11、人总是珍惜为得到。2022-3-132022-3-132022-3-13Mar-2213-Mar-2212、人乱于心，不宽余请。2022-3-132022-3-132022-3-13Sunday, March 13, 202213、生气是拿别人做错的事来惩罚自己