教案-高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸钠的含量

1、课题：高效液相色谱仪的应用一一饮料中苯甲酸钠含量的测定教学时间：第8周星期四下午教材分析：高效液相色谱法的应用是选自高等教育出版社?仪器分析?教材第八章第一节.教学目的：1 、激发学生对学习过程的兴趣及未来工作的期待2 、熟悉高效液相色谱仪的根本构造及工作过程3 、学会使用高效液相色谱仪测量简单有机物的含量教学重点：高效液相色谱仪的根本构造教学难点：1、对高效液相色谱仪工作过程的理解2、应用高效液相色谱法测定有机化合物的含量教学方法：1、直观演示法2 、观察法3 、集体讨论法学法指导：1、明确目标,实现做中学2 、运用多媒体激发学习兴趣3 、在讨论中提升分析问题和解决问题的水平,实现学生在教学

2、过程中的主体性.教学过程：I、组织教学、引入新课1、组织教学、检查学生出勤情况.2、导入新课教师提问：炎炎夏日刚刚过去,同学们最喜欢喝的东西是什么？学生答复：啤酒、雪碧、可乐、绿茶、果汁教师提问：那么同学们在喝这些饮料的时候有没有注意过它们的保质期是多长时间呢？为什么加工好的饮料能够放置这么久？学生答复：保质期一般为8-12个月,之所以保质时间这么长是由于添加了防腐剂、进行高温灭菌处理等.教师提问：有哪位同学知道饮料中一般都会添加哪些防腐剂呢？这些防腐剂对人体有没有害处？学生答复：肯定是有害处的,但是到底是什么物质呢？为了延长饮料的保质期,增加口感,饮料中通常含有苯甲酸钠、柠檬酸钠、糖精钠等食

3、品添加剂,这些大多是对人体有害的有机化合物,那么我们应该如何限制添加剂的含量呢？由于其快速、灵敏、高自动化,高效液相色谱法在食品检验中得到了广泛的应用.今天我们就来应用高效液相色谱法检测饮料中苯甲酸钠的含量.n、新课讲授一、实验准备1、苯甲酸钠的性质：白色颗粒,无臭或微带安息香气味,味微甜,有收敛性；常温下易溶于水,化学式如下：2、苯甲酸钠的用途：常用的食品防腐剂,使用时转化为有效形式苯甲酸,酸性条件下对多种微生物酵母、霉菌、细菌有明显抑菌作用,对产酸菌作用较弱.由于其具有毒性,因此用量需要控制在直接饮用的饮料内的最大使用量为0.2克/公斤.二、实验原理1、引导学生回忆高中做过的叶绿素别离试验

4、：(1)研磨植物叶片得到色素提取液；(2)准备滤纸条(3)画绿叶基准线(4)将滤纸条基线以下浸入到层析液中(5)等待一段时间后得到4条色谱带,分别为橙黄色的胡萝卜素,黄色的叶黄素,蓝绿色的叶绿素a,黄绿色的叶绿素bo其实在1900年的时候,俄国化学家次维特也做过同样的事情,他在一个玻璃管中填满吸附剂(碳酸钙),将植物色素提取液倒入管内,然后用石油醍不断的洗脱,观察到了玻璃管中出现了一条条的色谱带(如下图).高效液相色谱法就是基于上述实验开展起来的一种别离分析的方法.2、提出高效液相色谱法通常在高效液相色谱仪上,将浓度不同的苯甲酸标准溶液与未知样品在相同色谱条件下进行别离试验,分别测得它们在色谱

5、图上的保存时间tR和峰面积A,可直接用tR进行定性分析,并以峰面积A作为定量测定的参数,采用工作曲线法(外标法)测定食品中的苯甲酸钠含量.高效液相色谱仪式由以下四大局部组成1、高压输液系统高压输液系统主要包括了溶剂脱气装置、高压泵、梯度洗脱装置,观看课件中高压泵的内部结构及原理图.2、进样系统进样系统一般有隔膜注射器进样、停留进样、阀进样及自动进样器进样,六通阀进样是目前最常用的手动进样方式,如下图,六通阀的工作原理及实物图.由于计算机技术的开展,自动进样使3、别离系统用越来越广泛,它的工作原理和六通阀类似.b迸件状裔主要指色谱柱,为液相色谱的心脏部件,主要包括主管和固定相两局部.如下图,为色

6、谱柱的实物图4、检测系统高效液相色谱中的检测器主要有紫外检测器、示差折光检测器以及荧光检测器.观看flash动画,明确高效液相色谱仪的工作流程.流动相从试剂瓶流出警告过梯度洗脱装置、高压泵,到达进样装置,带着样品一起流入色谱柱,各组分别离后分别进入紫外检测器,检测器将浓度信号转化成电信号,在显示系统以色谱流出峰的形式出现,我们只要记录某种组分的保存时间及峰面积,通过计算便可以得到该物质的浓度.点击“结构按钮可以看到仪器的内部结构,比方进样阀有准备状态和工作状态可以相互切换,当点击“准备状态时流动相从进样阀直接流入色谱柱,点击“工作状态时,流动相将定量环中的待测样带入色谱柱,完成一次进样.请同学

7、们观察讨论我们面前的高效液相色谱仪的高压输液系统、进样系统、别离系统以及检测系统分别在哪里？四、实验步骤1 、设置仪器参数通常需设置泵参数、进样体积、柱温、检测器参数等2、配置溶液(1)苯甲酸钠标准溶液的配置苯甲酸钠标准储藏液(1mg/ml):准确称取100m赤甲酸钠,加NaHCO溶液(20g/L)5ml,力口热溶解,移入100ml容量瓶并定容；苯甲酸钠标准使用液(100ug/ml)的配置：取储藏液10ml,放入100ml容量瓶,加水稀释至刻度摇匀,并经0.45um滤膜过滤,分别精密量取0、5、10、20、40mL的标准使用液至50mL容量瓶中,用超纯水定容(2)饮料样品的处理及配置准确移取15ml饮料样品于烧杯中,加NaHC溶液(20g/L)5ml,加热除去样品中的二氧化碳,加水稀释到50ml,经0.45um滤膜过滤即可.讨论：为什么标准溶液和样品均要用0.45um的滤膜过滤？3、溶液测定(1)调整流速为1.0ml/min,稳定20min(2)测定标准溶液,记录相对保存时间、峰面积(3)测定样品,记录苯甲酸钠的峰位置,峰面积五、结果分析引导学生进行定性定量分析：1、根据_?_确定样品的中的苯甲酸钠的色谱峰2 、以标