芸香苷和槲皮素

1、槐花米中芸香甘提取及棚皮素的分离与检识适用对象药学专业实验学时18学时、实验目的学习黄酮类化合物的提取、分离和检识，通过实验要求：1）通过芸香菩提取与精制，掌握沸水提取黄酮类化合物的原理和操作。2）掌握由芸香背水解制取柳皮素的方法。3）掌握黄酮甘和黄酮甘元的分离。4）掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮甘、甘元和糖部分的检识方法。二、实验原理由槐花中提取芸香甘的方法很多，本实验是根据芸香甘在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行提取和精制，或根据芸香甘分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提取液加酸酸化后则芸香甘游离析出。三、仪器设备单口园底烧瓶，冷凝管，铁架台，

2、烧杯，电炉，烘箱、水浴锅、三角烧瓶，微量抽滤器，布氏漏斗，滤纸，试管，层析槽，石棉网，毛细管等。四、相关知识点槐花为豆科植物槐SophorajaponicaL.的干燥花及花蕾，主要含芸香甘（芦丁），含量高达12-20%，水解生成棚皮素、葡萄糖及鼠李糖。芸香甘（rutoside），分子式C27出。分子量610.51，淡黄色针状结晶，mp.177178C。难溶于冷水（1：8000），略溶于热水（1：200），溶于热甲醇（1：7），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：30）,冷乙醇（1:650），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醛、石油酸等，易溶于毗口定及稀碱液中。棚皮素（quercetin）

3、,分子式务已。7,分子量302.23潢色针状结晶，mp.314c（分解）。溶于热乙聘（1:23）,冷乙醇（1：300）,可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、毗口定等，不溶于石油醛、苯、氯仿、乙醛中,几不溶于水。0H0芸香苗R:葡萄糖-鼠李糖棚皮素R=H五、实验步骤（一）芸香甘的提取（水提取法）称取槐花米50克，置1000ml烧杯中，加沸水800ml,加热保持微沸1小时，趁热用棉花过滤，滤渣再加600ml水煮沸1小时，趁热过滤，合并2次滤液，放置夜，析出大量淡黄色沉淀，抽滤，沉淀用水洗34次，抽干置于空气中干燥即得粗芸香甘,称重计算得率。（二）芸香甘的水解称取芸香甘粗品2克，尽量研细，投入500

4、ml圆底烧瓶中，加2%H2s04溶液150ml,接上冷凝管，直火加热煮沸1.5小时，滤取沉淀物（即首元棚皮素），滤液保留以鉴定糖部分，椭皮素沉淀经水洗涤抽干，自然干燥，称重并计算水解得率。三）芸香甘、柳皮素重结晶称取芸香甘粗品2克，加甲醇50ml，加热溶解，趁热过滤，滤液浓缩一半，放置析晶，过滤。滤液适当浓缩后放置，复析出结晶，滤取结晶。必要时结晶再用甲醇重结晶一次。取棚皮素全部，加适量95%乙翳，同上法重结晶一次。四）芸香甘、挪皮素和糖的纸色谱鉴定1、点样：取新华一号色谱滤纸，规格20cmx20cm,在滤纸下端约2cm处用铅笔画一直线，间隔2cm分别点上下列样品或标准溶液：糖样品溶液标准葡萄

5、糖溶液标准鼠李糖溶液芸香甘样品甲聘溶液芸香甘标准品溶液棚皮素样品甲醇溶液棚皮素标准品溶液2、展开剂：正丁醇醋酸水（4：15）上层上行展开。3、显色：展开完毕，将滤纸取出，记录溶剂前沿位置。待溶剂挥尽后，在（3）与（4）点之间剪开，分别显色。（1）糖的显色：喷苯胺邻苯二甲酸试剂，在105c烘10分钟，显棕色斑点。计算并比较样品和标准品的Rf值。2）黄酮化合物的显色：可见光下观察色斑，紫外灯下观察荧光斑点。经氨气薰后再观察。 待氨气挥尽后，喷1%AlCh甲醇溶液，再观察。 计算并比较样品与标准品的Rf值。五）芸香甘和棚皮素性质试验1、酸性试验：取小试管8支，每4支一组，第一组每管中加入芸香甘1mg

6、、第二组每管中加入梅皮素1mg,每组四管中分别加入稀氨水、5%碳酸氢钠水溶液、5%碳酸钠水溶液、1%氢氧化钠水溶液各2ml，振摇后观察各管溶解情况。溶解的溶液应呈黄色。再加浓盐酸数滴酸化，黄色褪去或变浅，并有沉淀析出或产生混浊。2、Molish反应：取试样1mg置小试管中，加乙醇0.5ml溶解，加a蔡酚试剂12滴，摇匀。倾斜试管，沿管壁徐徐注入浓硫酸约0.5ml静置。观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性，表示样品分子中含有糖的结构（糖和甘类均呈阳性反应），比较芸香甘和柳皮素的不同。3、Fehling试验：取试样数mg,溶于0.5ml热水中，加斐林氏试剂甲、乙等量混合液2ml，沸水浴上加热

7、，如产生氧化亚铜的暗红色或黄色沉淀表示有还原糖或其它还原性物质。充分加热作用后滤去沉淀，滤液滴加浓盐酸酸化，在水浴上加热水解，水解液以10%NaOH中和，再进行斐林氏试验，此时显阳性反应者表示样品为糖甘化合物。比较芸香甘和棚皮素的不同。4、盐酸镁粉反应：取芸香甘1mg,加乙聘2ml，在水浴上加热溶解，加镁粉约50mg，滴加数滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物。以同法试验棚皮素。如用锌粉代替镁粉，则芸香甘（3羟基与糖结合成甘）仍有作用，而棚皮素（黄酮醇类）不呈还原显色反应。因此可区别两者。5、格柠檬酸反应：取样品1mg,加甲聘2ml，在水浴上加热溶解，再加2%二氯氧错甲醇溶液34滴

8、，凡有3羟基或5羟基的黄酮即呈鲜黄色。然后加2%柠檬酸甲酉享溶液34滴，有3羟基的黄酮黄色不褪。比较芸香甘和棚皮素的不同。6、三氯化铝反应：取样品1mg溶于甲醇中，加1%三氯化铝甲翳溶液23滴，黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。（六）实验流程槐花米50g沸水提取2次（第一次800ml，第二次600ml），每次1h，趁热棉花过滤1水提取液（2次合并）药渣（弃去）放置过夜，抽滤，沉淀水洗3次芸香背粗品各取2gI2g芸香昔粗品2g芸香昔粗品I甲醇重结晶研细于500ml园底烧瓶中加2%硫酸150ml，直火加热1.5h，放冷抽滤精制芸香首（首元）95%乙醇重结晶鉴定反应梆皮索精制品六、实验报告要求应包括原理描述、实验流程、数据记录、解决问题的能力、实验结果、实验效果及建议等。七、思考题1、黄酮类化合物还有哪些提取方法？芸香甘的提取还可用什么方法？2、酸水解常用什么酸？为什么用硫酸比用盐酸水解后处理更方便？3、本实验中各种色谱的原理是什么？解释化合物结构与Rf值的关系。4、试讨论首类成分的检识程序。八、实验成绩评定方法本门实验课程考