肿瘤转移之临床检测进展

1、肿瘤转移之临床检测进展_西医学论文,论文集相互作用之结果，最早是Liotta提出之粘附、降解、移动学说，每个步骤也是有多个因素之共同参与，因而其具有复杂性。它是目前肿瘤患者死亡之主要原因。当前确定肿瘤转移主要是依据常规病理切片之结果，但有些患者虽进行了根治手术，且常规病理切片淋巴结无转移，但随后仍出现肿瘤转移。所以单纯根据常规病理切片来进行预后之判断往往欠科学，因此急需发展新之手段来检测肿瘤之转移。近年来随着免疫学与分子生物学之发展，为更敏感地检测到淋巴道、血道中转移之肿瘤细胞提供可能，本文对该领域之研究进展作一综述。 1常规病理学方法淋巴结转移之检测通常是HE染色，但敏感性较低，一般为104

2、105个正常细胞中能检出一个肿瘤细胞，连续切片检测能增加结果之稳定性，最早对淋巴结之微小转移灶之检测方法是连续切片法，有作者对400例乳腺癌常规切片阴性之淋巴结进行连续切片检测，检出率为13%。Wilkinson和Fisher之研究表明连续切片检测可使检出率提高14%24%。但由于该法工作量大且有较高之假阴性，所以难以推广应用。2免疫组织化学方法2.1粘附分子肿瘤要产生转移必须先从原发灶脱落，然后游走至血管、淋巴管，与之产生粘附并进入管腔才能产生转移，而粘附分子在其中起着重要作用。粘附分子有许多种类，与肿瘤之转移有关之研究主要集中在上皮粘附素(Ecadherin)和CD44这两个因子上。cad

3、herin是一种钙依赖性之具有使细胞之间产生粘附功能之糖蛋白，是产生细胞连接之分子基础。有研究表明许多肿瘤如乳腺癌、结肠癌、胃癌、膀胱癌均可出现Ecadherin之减少，Ecadherin之减少使肿瘤细胞之间之粘附力降低，肿瘤细胞容易脱落而出现转移。因此Ecadherin被看作抑制肿瘤转移之因素1。Hunt2之研究表明，对于较小之乳腺肿瘤，Ecadherin之表达与淋巴转移具有相关性，认为Ecadherin之减低是肿瘤转移过程中之早期事件。2.2自分泌运动因子及受体自分泌运动因子(AMF)是一种分子量为55KD66KD之热溶蛋白质，它是一个家族，通过与受体(AMFR)作用而刺激细胞运动，AMF

4、R是一个分子量为78KD之糖蛋白，研究证实AMF受体gp78之表达直接与肿瘤之转移能力有关，人癌标本中之gp78表达与临床病理特征和病人预后有关。Maruyama7之研究表明101例食道癌中有55例gp78表达阳性，它之表达与肿瘤生长方式、肿瘤大小有关，且淋巴结有转移者gp78表达率较高，说明与AMFR相关之肿瘤细胞运动促进了肿瘤之生长与转移。有淋巴转移之大肠癌其gp78表达率明显增高，gp78阳性患者之5年生存率明显低于阴性者8。3多聚酶联反应(PCR)方法近年来，在这方面之研究取得了长足之进展，多采用RTPCR法扩增外周血、骨髓或淋巴结在正常情况下不表达之组织或肿瘤特异性mRNA，其敏感性

5、为1106。因为mRNA在细胞外很不稳定，所以一旦在组织或体液中检测到特异性mRNA就意味着有肿瘤细胞转移，且有些肿瘤尽管有RNA表达但无蛋白表达，因此RTPCR法比蛋白测定具有更高敏感性。3.1前列腺特异性抗原mRNA有研究者对前列腺癌之微转移进行了研究，检测了前列腺癌患者外周血、骨髓或淋巴结中前列腺特异性抗原(PSA)表达，结果表明：在确定有转移之患者外周血中PSA之检出率为40%，显著高于无转移之10%。且具有良好之特异性9，10。3.2细胞角蛋白mRNA细胞角蛋白(CK)是一个多基因家族，主要在上皮细胞表达，CKs有20多个不同亚类构成，主要有CK8、CK19、CK20等，由于CK8、

6、CK19能在正常人外周血中表达，而CK20不在外周血中表达，所以CK20可作为有些肿瘤如乳腺癌、膀胱癌和大肠癌之血道转移指标11。Soeth用巢式RTPCR监测了57例大肠癌患者之骨髓CK20mRNA表达，阳性率为65%12。CK19作为乳腺癌淋巴结之转移指标也取得了较好之结果，10个常规切片阳性之淋巴结CK19mRNA也为阳性，而53个阴性淋巴结中有5个CK19mRNA为阳性，表示有微小转移13。CK是目前检测肿瘤微转移使用较多之一个指标。特别是检测食道癌与头颈鳞癌之淋巴转移方面，得到大家之认可。3.3酪氨酸酶mRNA酪氨酸酶是黑色素细胞合成黑色素之关键酶，在正常情况下黑色素细胞不会出现在外

7、周血，所以一旦在外周血检出酪氨酸酶可提示有血道转移。Wang14对29例黑色素瘤患者之区域淋巴结，其中一半作HE染色，不确定时作HMB45或S100免疫组化染色，另一半作酪氨酸酶mRNA之RTPCR检测。29例临床、期黑色素瘤常规病理检查有11例淋巴结阳性，而检出酪氨酸酶之有19例，18例阴性之淋巴结RTPCR阳性有8例，平均随访1年后，这8例患者全部复发。因此酪氨酸酶mRNA之RTPCR对于判断术后是否需要全身化疗以及化疗效果具有指导意义。有研究者报道，应用RTPCR法能敏感地检出黑色素瘤免疫治疗后患者血与骨髓中之残留细胞，对预示复发及探讨复发机制具有重要意义。3.4肿瘤排斥抗原mRNA肿瘤

8、排斥抗原MAGE也被列为肿瘤转移指标，有研究表明，94%之食道癌，81%之大肠癌，80%之乳腺癌，83%之胃癌在12种MAGE基因亚型中至少有一种阳性。在14例常规病理检查为阴性之淋巴结中，有7例MAGE阳性，其中有5例出现血管侵袭。该方法之特异性高，假阳性率很低，但由于有12种基因亚型给实验操作带来困难。3.5癌胚抗原mRNA癌胚抗原CEA曾被广泛用于恶性肿瘤之诊断，近来有研究表明检测外周血中CEAmRNA之表达可以作为是否存在血道转移之指标，31例结直肠癌肝转移患者中有26例外周血CEAmRNA之表达阳性15。从102例消化道肿瘤、乳腺癌之606个淋巴结中进行CEA检测发现，常规组织切片淋

9、巴结阳性率为16%，而CEA诊断阳性率为56%。从预后结果来看，CEA与组织学诊断之阳性率在根治切除患者中分别为64%与4%，在相对治愈切除患者中分别为85%与37%，在姑息切除患者中分别为100%与86%，在复发患者中分别为100%与85%。由此可见CEAmRNA可作为一个重要之检测指标。Mori16对13例大肠癌患者之117个淋巴结进行了CEAmRNA检测，发现88个常规检测阴性之患者淋巴结有47个淋巴结CEAmRNA阳性。该作者还对65例消化道肿瘤及乳腺癌患者之406个淋巴结进行CEAmRNA之RTPCR检测并进行了随访，微转移率为40.1%，有淋巴转移之15例患者6例复发，29例有微转

10、移之患者4例复发。21例无微转移患者无复发，这进一步说明了CEAmRNA之重要性17。3.6蛋白溶解酶类mRNA癌细胞合成和释放溶解酶是促进癌细胞从瘤体分离继而引起转移之一个重要因素。肿瘤部位细胞外液中许多酶活性增高，如肽酶和组织蛋白酶，这些酶多来自于癌细胞之溶酶体，也可来自肿瘤坏死区之巨噬细胞，这些酶在癌细胞分解细胞外基质与松解细胞粘附中起重要作用。3.7血管内皮生长因子C及受体mRNA血管内皮生长因子(VEGFC)是血管内皮生长因子家族中之一员，是近年来才被发现之一种生长因子。Jeltsch22发现转血管内皮生长因子C基因鼠皮下出现大量扩张淋巴管，这才确立了血管内皮生长因子C在淋巴管生成中

11、之重要地位。它可由肿瘤细胞或基质细胞产生，作用于淋巴管内皮细胞上之酪氨酸激酶受体(flt4)而后出现淋巴内皮细胞增殖。这样，对肿瘤淋巴转移之分子机制有了新之、更进一步之认识。有研究者运用原位杂交技术对前列腺癌之血管内皮生长因子C(VEGFC)及受体之表达进行了研究，发现血管内皮生长因子C及受体mRNA表达在淋巴结转移阳性组明显高于阴性组23。Kurebayashi24对乳腺癌之VEGFA、B、C、D之mRNA进行PCR检测，发现淋巴结转移阳性组只表达VEGFC，这进一步说明了VEGFC在淋巴转移中之重要作用。但也有作者发现在恶性间皮瘤中VEGFC之表达与淋巴转移无关25。在这一方面还存在较大之

12、争论。我们认为从理论上说既然肿瘤淋巴转移是肿瘤细胞脱离原发部位，通过肿瘤周围淋巴管游走至淋巴结，且有充分证据证明VEGFC是与淋巴管增生有关，那么VEGFC很可能参与肿瘤转移之过程，这当然需要研究之更进一步证实。4基因水平分析方法肿瘤基础研究表明，肿瘤细胞转移须通过多个步骤才能完成，且每个步骤多由多个基因共同控制，只有在转移相关基因与转移抑制基因平衡失调才最终决定是否导致转移。近年来有关该领域之研究一直是肿瘤基础研究之热点。由于肿瘤之发生发展与癌基因之激活有关，所以部分癌基因之表达可能与肿瘤之转移有关。1984年Vousden等发现小鼠淋巴瘤有了活化之cKras基因表达时，同时也就获得了转移性

13、。1987年Collard以人之cHras癌基因转染非侵袭性、无转移能力之小鼠BW5147T淋巴瘤细胞，发现转染后之细胞侵袭力增高，将这种细胞经尾静脉注射，可发生肝、肾等器官之转移，且这种转移与细胞之ras基因之表达水平有关。有研究者用fos基因转染大鼠3Y1细胞，可使其获得较高之肺转移能力。随着近年来对癌基因之临床意义之阐明，一些癌基因不仅可作为肿瘤之常规诊断指标，而且可被列为转移之指标。原癌基因RET可作为转移性髓样甲状腺癌之诊断指标26；Zhang27之研究表明P53基因突变可作为结直肠癌淋巴结转移之前兆，而在头颈部鳞癌中P53基因之过表达也有明确之诊断意义：P16往往表达在转移之淋巴结中28；cerbB2已被列为膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌之恶性指标；最近有研究发现口腔与肺鳞癌中有cerbB2之过表达29。有研究者30从鼠高转移乳腺癌细胞中筛选出转移相关基因mtal，它在高转移乳腺癌细胞株中之表达比低转移株高4位，且与转移潜能有关。还有研究者31发现cMyc与Bcl2基因在乳腺癌中之共