生物材料检验复习资料

1、生物材料检验：分析检验生物材料中化学物质及其代谢物得含量或因化学物质引起得得生物效应指标变化。生物材料：就是人体体液（如血液）、排泄物（如呼吸气、尿液 卜毛发，指甲以及组织脏器等得总称。生物标志物：指生物系统接触外源性物质后出现得一种变化。分为三类：接触性生物标志物、效应性生物标志物，敏感性生物标志物。接触性标志物：生物体内可分析测定得有害物质，代谢产物，以及她们同生物体内分子或细胞相互作用形成得中间物效应性标志物：那些同健康危害或疾病有关得可测定性得生化，生理行为以及其她生物学变化敏感性标志物：生物体内先天固有或后天获得得对外界有害因素所引起得有害效应得反应能力生物车t化：外源性化合物在体内

2、经过一系列化学变化并形成其衍生物以及分解产物得过程生物接触限值（BEL）:大体相当于健康人吸入接触最高允许浓度得毒物时生物材料中被测物得水平。尿液可分为全日尿，晨尿，定时尿与随时尿。生物半减期：指进入生物体内得化学物质得里量通过各种途径消除一半所需要得时间，又代谢半减期。一、检验方法彳#一般要求：1、方法得一般要求1）灵敏度选择符合生物监测得基本要求国情易推行、推广2.选择与建立生物检测方法必须考虑得因素、方法研制准则得基本内容1.取样、运输、保存得原则1）取样：（1）容器工具材质不干扰测定（3）取样时间根据半减期判断决定2）操作简便3）试剂易得、价廉 4）效率高5）符合2）保存时间：一天，三

3、天，一周，两周一般只要求a溶解性，稳定性 含量水平高g/L水平染尿液=50ml 静脉血=5ml末梢血500ul低 ug/L3）运输过程：保证分析物稳定，必要时要冷藏与冷冻运输4）防腐剂（尿）与抗凝剂（血）2、样品预处理原则1）尿液浓度按比重校正尿标准比重1、020,1、030及1、010得尿液应弃去2）样品预处理得目得就是消除干扰（1）测定无机物时用稀释液稀释后测定混合酸消化（2）测定有机物成分：先水解，再分离（3）回收率=75%3、制定分析方法得程序1）分析条件选择、优化2）确定检出限（1）影响检出限得因素：试剂得纯度，仪器得工作状态，电源稳定性光源得温度变化、污染等不可控制得因素。（2）检

4、出限得确定一般用统计法，一般用空白值得3倍标准差计算；色谱法用3倍噪音水平，检出限应小于0、3倍生物接触限值。（3）检出限得表示方法浓度或绝对量表示，用浓度表示时要说明方法取样体积。3）精密度：同一个人用同一方法重复测定同一均匀样品测定结果得符合程度通常在线性范围内取高、中、低三个浓度水平分另1J重复测定35次。用RSD表示或用变异系数表示复杂方法RSD=20简单方法=10、4）准确度（1）分析高低浓度水平与国家级标准物质各一组，测定值应在标准值得不确定范围内。（2）用接触表样品得加标回收率表示回收率=75%若105%表明存在明显得系统误差。（3）用标准方法或权威方法比较：两个方法均值相对误差

5、应小于10% t检验 在确定一个置信水平条件，两方法测定无明显差异5）干扰试验：如果有干扰，要找出消除干扰得方法6）样品得稳定性实验：时间：当天,3天,1周,2周温度:室温,普通冰箱冷藏（4C）,冷冻保存（-8C）,低温冰箱（-20 C）4、方法得验证1）新方法得验证：必须就是另一单位研制方提供方法所有技术材料验证内容：四项 线性范围精密度，准确度，样品得稳定性。2）引进国外标准方法或权威方法，引进方就就是验证方。5、现场应用首先要观察检出率观察检测结果与环境污染得符合程度同时取非接触样品进行对照三、确定生物监测指标得依据（一）化学物质在体内得动力学过程1、吸收1）呼吸道吸收气体物质通过肺泡壁

6、及周围毛细血管吸收固体物质，溶解时吸收得前提2）皮肤 有些有机物很容易被皮肤吸收F=C/15 *（0、038-0、153p）exp（-0、016MN） F 皮肤吸收量mg/cm 2/hC化学物质在水中得饱与度mg/ml P辛醇-水得分配系数MN相对分子质量 许多农药易被皮肤吸收如有机磷2 、体内分压与贮存1） 起始主要分布于血液中最终分布取决亲与力 2） 血液侧得量就是反映新近吸收量或机体组织得水平3） 血液中毒物或其她被测物并非均匀分布4） 一般脂溶性溶剂及卤代烃会分布在脂肪组织中 , 乳汁就是检测有机氯农药最好得样品 5） 体内储存毒物得形式大多为结合状态, 测定尿液中得代谢物需要先水解3

7、 、 生物转化 1） 概念 : 外源性化合物在体内经过一系列化学变化并形成其衍生物以及分解产物得过程。2） 有关生物转化得讨论就是毒物发生质得变化 生物转化得数量关系 , 个体差异很大就是一种动态过程 , 对时间得了解就是确定采样时间得基础, 生物半衰期。4、 排出 易挥发性有机溶剂从呼吸气中排出较多。 长期蓄积得有机氯农药可从乳汁中排出及耵聍（耳屎 ） 中排出 ,易代谢得有机毒物大多以结合态从尿中排出。（二）、个体差异1、毒物在生物体内得动力学过程有种属家族与个体得差异,其中生物转化过程变异极大;2、生物监测得个体差异可用监测结果得变异系数表示;3、个体差异降低了生物监测得精确性,却可帮助检

8、出特殊敏感人群或耐受人群。（三） 、接触水平（剂量）效应（反应）关系1、 就是确定一次生物监测指标得关键依据;2、 生物监测结果与空气毒物浓度之间得相关资料,可作为选择生物监测指标得替代依据。四、检验指标得选择与分类（一）、选择得基本要求1 、特异性好;2、具有良好得剂量效应关系;3、稳定性好;4、有准确可靠得检验方法。（二）、生物材料检验指标得分类1、化学物质原形：化学物质在生物体内不进行生物转化或转化速度很慢；缺乏毒物代谢动力学资料：代谢产物在体内没有特异性2、化学物质代谢产物 3 、生物效应指标。五、样品得采集与保存一 ）、生物材料样品得选择（一 ）、种类及特点尿液 : 最常用得1）特点

9、 :采集方便、无损伤性、采集量大2）适用性 :水溶性化学物质、代谢产物、金属等3）尿样得种类:（1）全日尿 （24h 尿）收集24h 内得全部尿液,通常只用于住院病人 （2）晨尿 起床后、早餐前第一次排出得尿 （3）定时尿 : 生物半减期 班前尿 :第 2 个工作日上班前以内排出得尿 班中尿 :上班 23h 以后排出得尿 班末尿 : 下班前 1h 内排得尿 班后尿: 下班以后1h 以内排出得尿周末尿 :连续工作第五个工作日得班末尿。血液 1）特点 :成分较恒定个体差异小 取样污染机会小 损伤性采集样品 血样贮存条件要求较高 ;2）种类 :血清 :不抗凝离心分离出得上层清夜血浆:加抗凝剂离心分离

10、得上层清夜全血 红细胞。呼出气1）特点优点:操作方便、干扰物少 ,非损伤性 缺点 :a、 被测物得含量比较低b、 肺泡气中水分对某些测定有影响c、肺部“死腔”中环境空气对肺泡气稀释不稳定，影响测定结果得解释；2）适用性 监测仅限于挥发性物质主要用于测定化学物质原形呼出气监测结果能反映采样期间车间空气得平均浓度;3）呼出气得分类混合呼出气、终末呼出气（肺泡气） 第一阶段呼出得就是空气,第二阶段混合呼出气,第三阶段肺泡气。（二）、生物材料样品得选择1、 同一毒物或代谢产物在不同生物材料其生物学意义不一样,血镉代表近期接触水平、尿镉反映长期接触得浓度;2、 选择生物材料样品种类得要求:被测物有特异性

11、与外剂量有相关性有足够得稳定测定结果重复性好个体差异在允许范围内 采样能被受试者接受 ;3、尿、血、呼出气就是目前较理想得生物材料样品,美国 BEI55 个尿58%、血27%、呼出气 14%。二 ）、样品采集、运输及保存 （一）、一般要求1、采样时间 :依据生物半减期 ; 2、采样环境:无污染;3、采样容器：测无机成分、塑料、高压聚合玻璃：硬质、石英不锈钢含 Cr、Ni、Mn（不能用于测此三种元素）使用前要求用酸液（稀HNO3）浸泡24h洗涤;测有机物玻璃、塑料（不能用橡胶与添加染料得橡胶）冷冻保存不能用玻璃仪器 ;4、样品得运输与保存;5、采样记录编号检验项目受试者信息采样信息：时间、地点、

12、环境、过程。采样人及记录人信息（二）样品采集与保存1 、尿样1）尿样得校正：（1）比重校正法 标准比重1、020 校正公式 C校正=（1、020-1、000）/（d-1 、000）*c=kc d 得使用范围1、0101、030 （2）肌酊校正法、尿中被测物浓度 （mg/g肌酊尸实测浓度（mg/L）/肌酊浓度（g/L）,肌酊含 量2） 采样、 采集尿液不少于 50ml, 用顶空分析法测定挥发性物质时、收集尿样得容器要充满尿样并知道体积,记录 2 人上次排空膀胱得时间及采集样得终点时间。3） 储存、贮存一般 2 周、 反腐 加酸、氯仿、冷藏 测尿中汞或挥发性有机物要尽快测定 要保存 5 天以上得

13、, 最好冷冻2、血样1）采集 （1） 、全血 ; 要抗凝 （2） 、血清 （血浆 ）或红细胞2） 注意事项 采集过程避免污染、毛细管血 防止溶血、金属针头（ 取下 ） 再挤出针管时不能太快取末梢血要避免挤压采集部位 , 自然流出弃去第一滴血有三种情况不宜采集毛细管血a 血液量超过5ml 、 b 采集环境有外源性化学物质存在 c 测定挥发性成分3） 血样得运输与保存避免振动与温度得改变血样冷冻肯定溶血采集血清或血浆时, 应分离再保存临时存放 4 过夜 , 长时间保存要冷冻测酶活性要采集后尽快分析3、 呼出气 、1） 采集方法 ： 先深呼吸 23 次,再恢复正常呼吸时采集呼出气采集肺泡气只收集末端

14、呼出气2） 注意事项 ： 受检者必须时肺功能正常者要选择对被测物吸附小得容器 要在正常呼吸状态下收集样品呼出过程不能有阻力 采样得时机要依被测物代谢速度决定三、生物材料样品得预处理原则（一） 无机物分析得样品处理1、稀释法、1）、常用得稀释剂；1）稀硝酸液（尿）,2）TntonX 100表面活性剂3）基体改进剂溶液2）、常用机体改进剂：硝酸盐（NH+ Ni2+ Ca2+）磷酸盐（Na+ NH+）3） 、应用实例： 磷酸铵 , 硝酸铵与 TritonX-100 可改善血清中铜锌得测定磷酸氢胺 , 硝酸铵测定血铅可提高灰化温度至1000 c硝酸馍可使测定神与Se得灰化温度到1000 c磷酸镂可使测

15、定Cd得灰化温度增至800 c2、酸提取法1 、硝酸提取,测定血铅、6mol/L 硝酸离心取上清液。标准物质被测成分得含量就是已知得 2,盐酸提取 3, 三氯乙酸（固体） 。铁 （有效 ）提取 +2 价铁3 、 矿物化法 （无机法处理）（二）有机物分析得样品处理（p11）第五节 铅一、接触途径： 铅矿 ,开采,冶炼二、代谢物与生物监测指标（一）动力学过程、1 、吸收 1）呼吸道 ：铅尘烟蒸汽2）消化道 ：铅尘 3）皮肤,无机物不吸收有机铅化合物可被吸收（四乙基铅 ）2、分析 ：起始分布在血中有95%与红细胞结合最终主要以磷酸盐沉积于血管中 ,其次就是肝肾脑等3、生物效应：抑制血红蛋白得合成1）

16、抑制5氨基乙酰丙酸脱水酶，导致血尿中8 -ALA增加2）抑制粪川啉元氧化酶3）抑制亚铁螯合酶4、排除 ：吸收得铅主要经尿排出 ,尿铅生物半减期较长。（二）铅接触得生物监测指标1、血铅： 直接反映近期接触铅得情况2、尿铅：反应机体中铅得负荷量,就是铅中毒得辅助诊断指标3、生物效应指标：1）尿中（T -ALA2）血中铅原吓咻三、样品得采集与保存 用于尿铅血铅得测定1、 尿样、 采样时间得限定 随即采集一次尿样按 1% 比例加HNO 3,4可保存两周。2、 血样、1）末梢血40 dL2）静脉血四、尿铅与血铅得测定石墨炉原子吸收法（一）尿铅得测定1、原理：尿样用基体改进剂液稀释后直接进行测定，基体改进

17、剂液 NH4H2PO4+抗坏血酸2、石墨炉升温程序一一适用涂铝石墨管干燥70c ,40S灰化450c ,30S原子化2000c 5s（停气）清除2200 3S3、石墨管涂铝处理，向石墨管中加20 dL铝酸镂液，石墨炉升温程序 并重复10次升温，石墨管内壁呈灰白色4、标准系列液配置铅标准系列液基体改进剂液（混合液 ） 正常人混合尿 ： 没有接触铅得健康人得尿,取 2 份 ,一份比重小于1、 020,一份比重大于 1、 020,混合成比重为1、 020 得尿液5、说明 ： 1）基体改进剂液得作用 ：本法选用4%磷酸二氢铵-6%抗坏血酸作为基体改进剂,能有效地克服基体干扰2）背景吸收得扣除背景校正器

18、扣除背景吸收,氘灯背景校正石墨管涂钼可降低背景吸收（二）血铅得测定1、样品处理：全血用TritonX-100液稀释，稀HNO3酸化，进样测定2、石墨炉升温程序： 干燥：75C-100 c ,10S（斜坡升温）灰化 450 C -500 C 30S保才I 10S（斜坡）原子化2400 c7S 清除2500 c 3S3、标准系列液： 铅标准液TritonX-100 液正常人血五、生化指标得测定（一）尿中b ALA 得测定1、原理：b - ALA可与乙酰乙酸乙酯缩合生成口比咯化合物用乙酸乙酯萃取口比咯化合物显色，加对一二甲氨基苯甲酸生成红色化合物入max=554nm2 、操作要点 ： 两份经稀释尿样

19、加 PH=6 缓冲液样品管加乙酰乙酸乙酯尿样空白管补充缓冲液各沸水浴10min 各加4mL乙酸乙酯萃取离心、静置、分层取清夜显色10min后测定（二）全血中游离原卟啉得测定1 、原理 ： 用乙酸-乙酸乙酯破坏红细胞盐酸萃取原卟啉,测定荧光强度2、样品处理：1）样品：20L血+0、1mL生理盐水2）加硅藻土悬浮液，乙酸乙酯一乙酸液、振摇、破坏红细胞3）离心 ,取上清液加盐酸萃取第三节、镉一、接触途径：锌矿得开采及冶炼工业上含镉材料得生产农业上也有镉化合物得应用二、代谢与生物监测指标（一）代谢1、吸收、呼吸道与消化道2、生物效应急性中毒靶器官：肺 慢性中毒靶器官 ：肺、肾、骨3、排出少量由尿排出

20、,属于蓄积性元素（二）生物监测指标1、尿镉：只反映长期接触情况2 血镉 ：只反映近期接触情况三、镉接触指标得测定石墨炉原子吸收法（一）尿镉得测定1 、原理 ：用磷乙氢二铵液稀释,直接标准曲线法定量2、石墨炉升温顺序1）干燥0700c30S（斜坡）2）灰化100200c20S（斜坡）400c10S（阶梯）3）原子化1800 5s 4）清除20003s3、标准系列液：镉标准液空白尿液基体改进剂液1%NH3（二）血镉测定1 、原理 ：血样加稀 HNO 3离心 ,取上清液测定,标准曲线法定量2、标准系列液镉血标准液：抗凝小牛全血+镉标准液4%HNO3第七节 ：汞一、接触机会 矿得开采与冶炼电器与仪表制

21、造化学工业二、代谢与生物监测指标（1） 动力学过程1、吸收主要就是呼吸道2、分布无机汞主要就是肾、其次肝、脑有机汞主要就是脑其次肝、胃 3 、排出 尿汞 生物半减期 23 个月（2） 生物监测指标1、血汞：反映近期接触无机汞得量2、尿汞：用于诊断汞中毒观察驱汞疗效三、样品采集、保存 1、尿样：随机取一次尿样加碱NaOH使浓度达到40g/L,4 c可保存2周 2、血样周末血 抗凝 4 可以保存数天四、尿汞得测定冷原子吸收法（一 ）碱性氯化亚锡还原法1、原理：在碱性条件及有 Cd+存在条件下，高浓度得SnCl2将有机汞及无机汞还原成元素，用测汞仪测定2、标准系列液得配置汞标准液 基体尿液 正常人混

22、合尿 NaOH液DL-半胱氨酸3、测定 将上述标准系列液加 1滴磷酸三丁酯，加SnCl2-CdSO4液立即通入空气测定（载气）4、说明：磷酸三酯 消泡Cd2+催化作用DL-半胱氨酸起稳定剂得作用，防止无机汞吸附挥发；还可使有机汞不分解测定读数：读取最大吸光度值（二）酸性SnCl2 还原法1、原理：用KMnO4与浓H2SO4分解尿样，使汞都车t化成 Hg2+,用SnCl2还原成Hg,吹空气导入测汞仪2、测定：尿液与标准系列液同样用KMnO4与浓H2SO4分解3、说明：1）KMnO 4与浓H2SO4加入得顺序：先加KMnO4液再加浓H2SO4 2）测定前先对气路系统进行净化加SnCl2（酸性 ）测

23、定空白水、吹气观察到仪器得响应值为零为止每次测定都使响应值为 0 再测第二份第三章：非金属化合物及其代谢产物第一节：CO一、代谢及生物监测指标1、吸收： 呼吸道2、生物效应：进入机体与血红蛋白结合形成碳氧血红蛋白（HbCO） 形式导致机体组织缺O23、分布： 血液中HbCO 形式4、排出呼出气 约有1%被氧化成CO25、生物监测指标1）血中碳氧血红蛋白 2） 呼出气中 CO三、样品得采集与保存1. 呼出气 ：1）采集班中 （3h 后）或班末呼出气2）收集终末呼出气2. 血液 ：1）采集班中 （3h 后）或接触最高浓度时得血2）抗凝3）密闭保存4 11 周 4）最好取静脉血5）受试者不抽烟四、血

24、中碳氧血红蛋白得测定分光光度法1、原理 ：1）血中血红蛋白得四种成分 ：Hb 、 HbO 2、 HbCO、 MetHb2）HbCO,HbMetHb3）测定Hb 与 HbCO 吸光度,最大吸收波长分别为432nm 与 420nm 注 ：上面应该就是Na2s204（连二亚硫酸钠）不就是Na2s203（硫代硫酸钠）2、测定方法：1）摩尔吸光系数得测定：用吸光系数代替（1）过饱与 Hb02 液得制备,血样用水与Tris 液适量稀释通入02 30min（2）饱与HbO2液得制备：取（1）中2份通入N2（3）饱与 HbC0 液制备 取 （1）中 2 份,通入 C0 10min（4）HbC0 与 Hb 液制

25、备在（2）与（3）得溶液中加Na2s204 固体（5）分别测定420nm 与 430nm 吸光度作为吸光常数（有四个值）2）血样测定分别测420nm 与 430nm 得吸光度3.计算：A 420：血样在420nm 吸光度;A430 血样在430nm 吸光度K 1、 K2 就是HbC0 在 420nm 、 430nm 得吸光常数K 3、 K4 就是Hb 在 420nm、 430nm 得吸光常数4、注意事项：（1）所用氮气与氧气应为高Z度氮与高纯度氧，不纯氮与氧气中含微量得CO,能干扰测定结果（2）连二亚硫酸钠遇水易分解,在空气中容易被氧化失效,应以小瓶分装使用,避免接触空气与水分（3） 测定吸光

26、系数必须采用新鲜血液,一次测定值在仪器波长稳定得情况下可以使用一段时间 ,但还应定期核检。（4）测试液应尽量避免接触空气,及时测定,否则会造成结果偏低第二节 Cs2二、代谢及生物监测指标（一）代谢1 、吸收 ： 呼吸道、皮肤2 、生物转化1）吸收后约7090%转化为多种代谢产物2）目前，接触者中尿中已确认得有3种:TTCA、2-疏基-2-醺坐咻酮-5,硫月尿（其中TTCA研究较少，生物半减期为2h）3）排出:a、代谢产物随尿排出b、约2030%以原形从呼吸道排出c、约1%以原形从尿中排出（二）生物监测指标1、尿中 TTCA: 班末尿2、呼出气中CS2, 目前研究较少三、样品采集与保存四、尿中T

27、TCA 得测定HPLC 法1、样品得处理：A、取离心后得尿样B、稀HCL酸化：乙醛提取C、离心分层，去上层醛液于试管中D、40c用N2 吹干加20ul 甲醇定容2、说明：A、尿样经离心后取上层尿液，易于分离B、此法从国外引进，将原来得梯度洗脱改为等度洗脱。国外得梯度洗脱就是用两种配比得流动相切换洗脱C 、 TTCA 纯品需自己纯化五、呼出气中CS2 测定（一）GC 法1、样品处理：（1）、呼出气中CS2浓度在测定范围内不需要处理，直接进样（2）、呼出气中CS2低于测定浓度范围需富集 ,用 Tenron GC 管富集2、色谱条件：固定相：OV-17；检测器：火焰光度检测器3、说明：（1）采集终末

28、呼出气,最后呼出得100ml （2）TenronGC 管：2,6-二苯基对苯醚得多孔聚合物,用于捕集/热解吸（3）富集测定要求做富集空白测定：用 180ml 气体 （冲洗气）注入空白Tenron GC 管中 ,热解吸后测定（二）检气管法：快速检测法1、根据检气管中形成色带长度,粗略估计浓度2、特点 ：操作简单、快速、成本低、精度差,相对偏差达20%-30% 以上第四章芳香烃及其代谢产物第一节苯一、代谢及生物监测指标1 、吸收 ： 主要就是呼吸道,其次就是皮肤2、代谢与排泄1）吸入得苯约50%以上以原形从肺中排出,约10%以原形储存在有机组织中2）约 40%进入血液循环,在肝中代谢 ,代谢产物

29、50%-70%得苯酚,6%为间苯二酚,2%为对苯二酚,还有极少量得粘糖酸等都以结合态从尿中排出3）有极少量得苯以原形从尿中排出3 、生物检测指标：1）尿酚 A、因正常人尿中很有酚且个体差异大B、尿酚不就是特异性指标C、仅用于群检2）呼出气中得苯：在测定尿酚以后,测定呼出气中苯作为确认试验3）尿苯 ：1993 年有人提出用尿苯作苯接触得生物接触指标,目前,还没纳入生物监测指标二、呼出气中苯得测定 GC 法（一）原理：用塑料袋或采样管收集呼出气，呼出气用 N2吹入活性炭管吸附（-78C）280c热解吸，用载气（N2）导入色谱仪 ,FID 检验 , 通过六通阀切换完成（二 ）苯标准气得配制 ：注入

30、20ul 苯于 100ml 玻璃配气瓶中,临用时从中抽取一定体积注入另一配气瓶中稀释成20ng/ml得苯标准气（三）测定：1）取苯标准气（0、5、1、0、2、0ml）与样品分别注入呼吸气得采样管中2）将采集管37摄氏度恒温2h3）一端与六通阀连接,一端接N24）吹入冷阱（-78）中得活性炭管5）热解吸导入色谱仪三、尿酚得测定 GC 法1、原理：尿样加盐酸加热（90 水浴 ）水解 ,再用乙醚萃取苯酚2、尿样采集与保存：班末尿 50ml 42周3、样品处理与测定： 1）5、 0ml 尿样 ,1ml 浓盐酸于具塞试管中,90水浴1h 2）、用 3、 0ml 乙醚振摇萃取3）取上层醚液注入 GC 仪4

31、、标准曲线：苯酚标准系列液用3ml 乙醚提取4、色谱条件（1）液晶柱分离分离苯酚与邻间对甲酚。（2）FFAP 柱 ,分离苯酚与对甲酚5、说明：3ml乙醴萃取要避免乙醴挥发，分层后不就是3ml,加乙醴补至3ml(2)可用内标志法定量四、甲苯、二甲苯(一) 代谢及生物监测指标1)代谢(1)甲苯约15%25%以原型呼出约1%从尿中排出约80%代谢甲苯-O苯甲酸-马尿酸 马尿酸排出得半减期为 23 人。(2)二甲苯 约5%原形从肺中呼出60%80%生物转化主要终产物就是甲基马尿酸2)生物监测指标(1) 甲苯尿中马尿酸非特异性对群体判断有一定得定义呼出气体中甲苯作为确认(2)二甲苯:尿中马尿酸正常人尿中

32、无甲基马尿酸特异性指标(二)、尿中马尿酸得测定比色法( 喹啉 苯磺酰氯比色法)(1)原理(2)样品采集两天后班末尿,按 100+1 体积比加氯仿(3)样品处理与测定(4)注意事项: 1、试剂加入顺序不能颠倒2、日光对显色有破坏作用要避光放置(加入苯磺酰氯后 )第四节 乙苯一、代谢及生物监测指标(一)代谢与排泄1 、只有少部分以原形从呼吸道排出。2、 70%以上代谢后随尿排出,主要代谢产物为扁桃酸60%苯酰甲酸 25%(二)监测指标:1、呼出气体中乙苯2、尿中扁桃酸(非特异性)二、生物监测方法:1、呼出气体中乙苯得测定 GC 法与呼出气中笨得测定类似2、尿中扁桃酸得测定HPLC 法 内标法定量

33、内标物 4-羟基苯甲酸第五章 芳香族硝基与氨基化合物第一节 苯胺一、代谢与生物监测指标1、吸收:主要通过呼吸道吸收,很容易经皮肤吸收2、代谢主要代谢途径:苯胺苯基羟胺对氨基酚接触24h后，有1560%转化为对氨基酚、以结合态随尿排出3、生物监测指标:尿中对氨基酚 正常人尿中含微量对氨基酚平均3、 7mg/L二、尿中对氨基酚得测定(一)盐酸萘乙二胺分光光度法1、原理:尿中对氨基酚经水解。萃取分离重氮化偶合显色。重氮化试剂：亚硝酸盐偶与显色剂：盐酸蔡乙二胺2、操作要点(1)样品处理:盐酸酸化沸水浴水解约1 人 萃取先用 NaOH 调中性 ,用乙酸乙酯萃取,再用盐酸溶液反萃取。(2)重氮化偶合反映重

34、氮化,酸性条件下加过量得亚硝酸盐、反应10min除过量得NaNO2 液加氨基磺酸胺溶液至无色气泡产生止放10min偶合反应显色:加盐酸萘乙二胺生成紫红色(3) 比色定量580nm 尿空白管作参比 ,标准曲线法定量3、说明 :(1)尿样应采集班末或班后尿,采样前要询问受检者就是否服用药物(2)重氮化反应，NaNO2过量才能完全重氮化但NaNO2对偶与显色有干扰(3)重氮化反应应在尽量低温条件下进行,而偶合反应在60为宜,水浴加热前 ,偶合剂加入后充分混合(二)HPLC 法1 样品处理 :(1)水解 ,同上法(2)萃取先在酸性条件下用乙酸乙酯萃取再在中性条件下用乙酸乙酯萃取对氨基酚(两次萃取除杂质

35、)2 、说明:P96 用磷酸氢二钾 (弱碱 )调节PH 值第二节：硝基苯一、代谢产物与生物监测指标1、吸收：很容易从皮肤吸收，主要从呼吸道吸收。2、代谢：代谢产物有硝基酚与氨基酚还有少量苯胺，对硝基酚1316%,对氨基酚10%。3、排出：代谢产物与葡萄糖醛酸与硫酸结合，随尿排出。少量以原形级微量本案随呼出气排出。4、生物监测指标尿中对硝基酚（特异性）二、尿中对硝基苯酚得测定P98（一）、邻甲酚分光光度法1、原理：尿样经酸水解。苯取先用混合有机溶剂取，再用氢氧化钱溶液反萃取。还原用三氯化钛将其还原成对氨基酚。邻甲酚显色蓝色600nm比色定量。2、样品处理：1）水解盐酸酸化沸水浴1h。2）萃取先用

36、异戊醇一石油醛一乙醛萃取，再用3mol/L氯水反萃取。3、显色测定 先加邻甲酚，再加三氯化钛溶液。立即振摇至黄色沉淀变成淡黄色沉淀，过滤30min后600nm测定吸光度。（二）HPLC 法1、样品处理1）水解同上法。2）萃取 二氯甲烷萃取3次定容至20ml。2、说明1）尿液采集后，尽快加盐酸，10o c以下运输。2）流动相配比与流速可根据仪器性能调整。第三节：三硝基甲苯TNT 2,4,6一三硝基甲苯一、代谢1）经氧化还原化合等途径代谢。2）以还原代谢途径为主，主要代谢物4 氨基一2,6一二硝基甲苯。3）各种代谢产物以结合态随尿排出。二、生物监测指标（4A）三、GC法测定尿中4-A1、样品处理:

37、1）盐酸酸化沸水浴1h。2）萃取代谢 加固体碳酸氢钠调 PH78用甲苯萃取（尿小 1ml,甲苯1ml）2、色谱条件：1）检测器 ECD 2）固定相：OV 17（固定液）3）柱温220c 程序升温效果更好200c （0、4min）10 C/min 220 c 5 C /min 240 c第六章：卤代煌化合物及其代谢产物得测定第一节：氯乙烯一、代谢1）经呼吸道吸入大部分以原形从呼吸道中排出2）少部分在肝脏转化先转化成一种致癌活性物环氧氯乙烷在谷光甘肽或半胱氨酸参与下最终代谢物为亚硫基二乙酸（硫代二乙酸）3）少量得氯乙烯以原形随尿液排出二、生物监测指标：尿中硫代氯乙酸，呼出气中氯乙烯很少作为检测指标三.GC法测定尿中硫代氯乙酸（一）原理 尿样经酯化后水蒸气蒸至近干甲醇一乙醛溶解其中得硫代二乙酸酯化 重氮甲烷酯化火焰光度计监测（二）样品处理：1）1ml尿液加0、1