全自动免疫组化染色仪使用过程中的心得体会

1、精选优质文档-倾情为你奉上全自动免疫组化染色仪使用过程中的心得体会摘要 目的 总结ventana全自动免疫组化染色仪使用过程中的工作特点，并比较其与传统手工操作免疫染色差异，分析其优势、探讨不足。 方法 选择同一时间段内乳腺癌、卵巢癌、甲状腺癌、消化系统癌、肺癌、肾癌、弥漫性大b细胞淋巴瘤等免疫组化病例，用机器操作与手工操作两种方法进行免疫组化染色，对比实验结果。 结果 应用全自动免疫组化染色仪35种常用抗体中32种阳性染色着色均匀，定位准确，背景清晰，仅3种抗体（ca125、aat、cd10）机器染色效果不佳，染色满意率：91.4%（32/35）。 结论 ventana全自动免疫组化染色仪区

2、别于手工操作，运行过程中对某些细节步骤有特殊要求，其总体优势多：标准化程度优良、工作效率高、染色效果满意，其在临床病理诊断领域中将日益得到广泛应用。关键词 全自动免疫组化染色仪；免疫组织化学；病理诊断中图分类号 r365 文献标识码 a 文章编号 2095-0616（2013）03-常规免疫组化技术在临床病理鉴别诊断、评估肿瘤预后以及耐药检测等诸多方面日益发挥着不可或缺的作用。随着对肿瘤研究的深入、新的免疫组化抗体的研制开发、医院病理科的逐步发展，免疫组化已成为日常临床病理技术工作的重要组成部分，工作量日益加大。传统手工操作工作效率低，且容易受操作者个体手法、温度、湿度及时间等不可控制因素的限

3、制，不利标准化，质量控制难以保证。全自动免疫组化仪的应运而生弥补了上述不足，近年来全国一些医院病理科已开始应用。本文对我病理科新近投入使用的美国ventana benchmark? xt全自动免疫组化染色仪的工作特点进行阶段性总结，并与人工操作比较，旨在探讨自动化机器操作的优势与不足，分析远期应用价值。1 材料与方法1.1 材料及试剂选择自2012年1月2012年3月沧州中西医结合医院病理科工作中遇到的乳腺癌（10例）、卵巢癌（3例）、甲状腺癌（8例）、消化系统癌（20例）、肺癌（15例）、肾癌（1例）、弥漫性大b细胞淋巴瘤（2例）等免疫组化病例（包括手术切除标本及小外检标本），3m石蜡切片。

4、人工操作所用一抗、二抗、dab显色试剂盒（批号：ef）均为福州迈新生物技术有限公司产品。机器操作一抗为福州迈新生物技术有限公司产品，二抗及显色系统、复染液、苏木精染色液（mayer法），均为全自动染色仪自带封闭套盒（批号：sn）。1.2 方法3 讨论笔者通过比较全自动免疫组化染色仪与传统手工免疫组化操作两种方法的差异，通过对染色结果的客观分析，体会到机器操作的诸多优势，现总结以下几点：全自动免疫组化染色仪操作标准化程度提高，实验结果准确、稳定、可靠3。智能化设计使每种一抗可设置不同的修复条件以利于阳性着色，每张贴好标签的玻片在切片盘上通过激光条码扫描而被识别滴加一抗的名称并按照该抗体设置的条件

5、进行抗原修复。机器内部冲洗过程完善，恒定吹气，玻片上的试剂量保持不变，玻片表面始终平铺一层油膜防止干燥。仪器内部为37恒温系统，组织切片不会受到外界温差的影响4。上述多项功能使免疫组化实验过程中的非特异反应减少，背景清晰。此外，我们在仪器操作中发现3种抗体（ca125、aat、cd10）在笔者所在科室条件下染色效果不佳，主要表现为定位不准确、出现非特异反应，可能与一抗设置反应条件不适宜或者试剂本身有关，有待进一步摸索试验。省时、省力，工作效率提高。传统手工操作专人每天操作3060张切片工作负荷已很繁重，且实验过程中需要不断计时，为保证满意的实验结果常常需4冰箱过夜孵育一抗。我科室新近引入的ve

6、ntana全自动免疫组化染色仪可自动完成从脱蜡、一抗孵育、二抗滴加、dab显色直至至复染的全套程序，后续仅需人工完成脱水及封片过程，这比一些文献报道的全自动免疫组化仪在功能上更加完善了5， 6， 7。机器可随开随做，一次实验可完成30张切片，整理运行时间为3 h左右。健康环保。仪器配套的进口试剂本身毒性小对外界污染少，且备有废液回收系统，可将染色过程中的废液集中回收。自动完成显色过程避免了手工操作时dab显色液对工作人员的危害6。关于仪器操作与手工操作的差异笔者大致总结如下：步骤差异：仪器操作有一些额外步骤，如：新到试剂需注册，一抗条件需摸索后录入电脑，但均为一次性；带组织及标签的玻片需浸泡牛

7、奶中防止脱片；显色复染结束后梯度酒精脱水前先进洗洁精溶液中洗涮充分去掉玻片上的油膜成分；机器需要定期保养等。试剂差异：仪器配套试剂均为国外进口专利试剂，如抗原修复液名为细胞前处理清洗缓冲液（cell condition solution，cc1），是tris缓冲液，ph值呈弱碱性，温度升高时可水解氨基和醛基之间的共价键，使蛋白质分子复性，增加抗体的通透性。通过促进抗原抗体间的结合能力，增强反应的敏感性和特异性。笔者查到有学者也认为高ph值的抗原修复液效果优于传统的ph6.0枸橼酸液，是今后的必然趋势8。此外机器配套一种改良的mayer苏木精，复染效果稍不同于手工染色，使细胞核着色略似浅天蓝色。

8、仪器操作对切片平整程度要求高。组织切片若有折叠、刀痕、气泡、褶皱等可造成切片厚薄不均时，可能导致上机滴加试剂后出现气泡，致使反应不理想，形成非特异性染色9。综上所述，全自动免疫组化染色仪具有省时、省力、操作简易、结果准确可靠以及健康环保等优点，其为提高病理科免疫组化工作效率、实现标准化和质量控制提供了便捷而可靠的工具4。在病理学界倡导标准化及质量控制的大势所趋下，全自动免疫组化染色仪必将会成为临床病理乃至科研工作中不可或缺的设备之一，并在各医院病理科长远发展中扮演重要角色。参考文献1杨月红，袁静萍，袁修学，等.自动免疫组化仪的使用体会j.临床与实验病理学杂志，2011，27（3）：333-33

9、4.2罗玉凤，曹金伶.简介免疫组化染色机j.诊断病理学杂志，2012，19（4）：319.3马铁，纪莲，姜卫国.新型全自动免疫组化染色机在临床病理工作中高标准化应用体会j.中国医科大学学报，2012，41（7）：662-663.4余琦，李宁，杨江辉，等.全自动免疫组化染色仪与手工免疫染色的比较j.局解手术学杂志，2010，19（2）：83-85.5罗小平，胡维维，伍尚金.全自动免疫组化染色仪与人工操作的比较j.医疗卫生装备，2007，28（4）：59-60.6于兰，何松，陈亚丽.全自动免疫组化染色仪的应用体会j.临床与实验病理学杂志，2009，25（2）：215-216.7姜冰，杨军，彭长缨，等.全自动免疫组化染色仪在临床病理的应用j.中国现代医学杂志，2008，18