通冠胶囊对急性心肌梗塞大鼠心室重构的影响

1、通冠胶囊对急性心肌梗塞大鼠心室重构的影响                      作者：陈伯钧 苏学旭 孟丽琴 高彦利 曾靖 李然 郑佩芝 陈惠敏 【摘要】  目的探讨通冠胶囊对急性心肌梗塞（AMI）大鼠心室重构的作用。方法结扎大鼠心脏左前降支（LAD）建立急性心肌梗塞模型，随机分为假手术组(n6)、AMI对照组(n=8)、AMI卡托普利组(n=7)、AMI通冠胶囊

2、组(n=7)。卡托普利组予卡托普利灌胃，通冠胶囊组予通冠胶囊溶剂灌胃，余2组均予等量生理盐水，各组每周称体重后调整剂量，灌药持续4周。检测体重、左心室重量、心脏重量、左室重量指数（左心室重/体重）、心脏重量指数（心脏重/体重）、血浆醛固酮（ALD）、心肌血管紧张素II（A-II）、心肌组织胶原等指标。结果结扎大鼠LAD对大鼠体重和心脏重量有一定影响，且对心脏重量影响更大，而服用卡托普利或通冠胶囊能够减少这种影响，两组之间影响力无统计学差异；结扎大鼠LAD能够显著升高心肌局部A-II和血浆ALD水平，卡托普利组和通冠组能明显降低这两项指标，且对于A-II，通冠胶囊组较卡托普利组降低更明显，ALD

3、则在两组之间无统计差异；通冠胶囊和卡托普利都可使梗塞区心肌细胞体积变小，心肌纤维排列整齐，胶原增生减少，但通冠胶囊作用较卡托普利更明显。结论通冠胶囊能显著改善大鼠心肌梗塞后心脏结构，减轻心脏扩大，降低心肌局部A- 、血浆ALD水平，抑制胶原增生并改善、胶原含量，从而提示其具有不依赖于卡托普利的独立的改善心肌梗塞后心室重构的作用。 【关键词】  通冠胶囊 心肌梗塞 心室重构 卡托普利 血管紧张素急性心肌梗塞（acute myocardial infarction AMI）是一种严重威胁人类健康和生命的疾病，心肌梗塞后心室重构可导致心律失常、心功能不全、室壁瘤或心脏破裂等后果，严重影响患

4、者的生活质量和生存率。因此，减缓或逆转心室重构是防治心肌梗塞后严重并发症的关键。目前中医药对心肌梗塞后左室重构的研究较少，本研究旨在探讨通冠胶囊（主要成分为黄芪、丹参等，具有益气、活血、宽胸、通络之功效）对大鼠心肌梗塞后左室重构的影响。1  材料与方法1.1  动物  健康清洁级SD大鼠40只（雄性，体重150180 g）,由广州中医药大学实验动物中心提供（合格证号0011122）。1.2  设备及仪器  多导联生理记录仪HOGO SACHS ELEKTRONIK 79232 March F.R. Germany，TKR-200C小动物呼吸机（

5、江西特力麻醉呼吸设备公司），天平（德国赛多利斯公司），SN-695B型放免测量仪（上海原子核所日环仪器厂）。1.3  试剂  ALD、A-试剂盒（批号070225，北京科关东雅生物技术有限公司），通冠胶囊（36粒/瓶，每粒0.5g，批号06092602,生产日期2006²09²26，广州中医药大学第二附属院内制剂），卡托普利（开搏通，上海施贵宝制药有限公司），PBS溶液（NaCl 42.5 g，NaH2PO4·2H2O 1.5 g,Na2HPO4 14.5 g，三蒸水2 000 ml，使用前高压消毒）。1.4  动物分组 

6、SD大鼠40只, AMI模型通过结扎大鼠左前降支(LAD)获得，存活28只，随机分为假手术组(n6)、AMI对照组(n=8)、AMI卡托普利组(n=7)、AMI通冠胶囊组(n=7)。卡托普利组予灌卡托普利（0.5 mg/100 g），通冠胶囊组灌予通冠胶囊溶剂（1 g/100 mg），余两组均灌等量生理盐水，各组每周称体重后调整剂量，灌药持续4周。1.5  模型制备  采用结扎大鼠冠脉LAD制备AMI模型。腹腔内注射10%水合氯醛（0.30.35 mg/ 100 g）实施麻醉，左胸前备皮3.5 cm×3.5 cm，暴露皮肤，安乐碘消毒2次。标准导联方式皮下连接体表

7、心电图，行术前心电图检查并记录。连接呼吸机，行经口气管插管，调节呼吸机参数，频率为90次/min，保证有效通气量为1.0 ml/(g·min)。左胸前3、4肋间隙依次剪破皮肤、胸膜，分离胸大肌、胸小肌，避免损伤内乳动脉和肺脏，暴露心脏，上推胸腺，剪开心包。观察冠脉分布，于左心耳肺动脉圆锥左缘处粉红色动脉下12 mm处，用无创缝合针引80缝合线穿过，并结扎第1道线，观察结扎环下心肌颜色变为苍白，心电图示ST段抬高表示成功，再结扎第2道线。迅速清理胸腔内淤血，鼓肺，层层缝合胸膜、胸肌、皮肤。术中密切观察大鼠生命体征，术后注意暖箱保暖。假手术组不结扎冠脉，余同上述操作。1.6 

8、检测指标   体重、左心室重量、心脏重量、左室重量指数（左心室重/体重）、心脏重量指数（心脏重/体重）、血浆醛固酮（ALD）、心肌血管紧张素II（A-），心肌组织胶原。1.7  检测标本的采集  将各组大鼠麻醉后，称重，常规消毒，然后沿腹正中线剪开腹腔，腹主动脉取血2 ml置肝素管中，离心取血浆2 ml，于20冰箱保存，待测血浆醛固酮（ALD）；随即取出心脏先用滤纸将心脏拭干，用电子天平称取心脏重量，然后将左心室分离，称取其重量，沿左心室冠状面直径最大处剪取2 mm厚度心肌（梗塞区）置于10甲醛固定、保存待查心肌胶原含量，将剩余心肌去除左右心耳并大血管后

9、称重，剪碎，与PBS液一起置于研磨器中，在低温环境下研磨，将研磨液置于离心管中，在4环境下，10 000 r/min离心，取上清液1.5 ml于EP管中低温（20）保存，待测心肌局部血管紧张素（A-）。1.8  统计学处理   所有计量资料均采用t检验，均由SPSS13.0软件包处理，以P<0.05表示有显著统计意义。2  结果2.1  4周后AMI大鼠心脏重量、左心室重量、心脏重量指数、左心室重量指数的变化  4周后AMI对照组、卡托普利组和通冠胶囊组大鼠体重均较假手术组减轻(P<0.01)；卡托普利组和通冠胶囊组体重分

10、别与AMI对照组比较，均重于后者，两组均有显著统计意义(P<0.01)；卡托普利组和通冠胶囊组比较无统计意义(P>0.05)。心脏重量、左心室重量、心脏重量指数和左心室重量指数等各项指标，AMI对照组、卡托普利组和通冠胶囊组均高于假手术组，比较有显著统计意义(P<0.01)；其中，卡托普利组和通冠胶囊组分别与AMI对照组比较，卡托普利组和通冠胶囊组均低于后者(P<0.01)；卡托普利组和通冠胶囊组比较，无统计意义(P>0.05)。提示结扎大鼠LAD对大鼠体重和心脏重量有一定影响，且对心脏重量影响更大；而服用卡托普利或通冠胶囊能够减少这种影响，两组之间影响力无统计差

11、异。见表1。表1  4周后大鼠体重、心脏重量指数、左心室重量指数的变化（略）与假手术组比较，*P<0.01；与AMI对照组比较，#P<0.01；与卡托普利组比较，P0.012.2  心肌局部血管紧张素(A-)、血浆醛固酮(ALD)的变化4周后检测大鼠A-II、ALD，对照组、卡托普利组和通冠胶囊组与假手术组比较有显著统计学意义(P<0.01)；卡托普利组和通冠组分别与对照组比较，两组均有显著统计意义(P<0.01)；通冠组与卡托普利组A-II含量比较有显著统计意义(P<0.01)；通冠组与卡托普利组ALD含量比较，无统计意义(P>0.05

12、)。提示结扎大鼠LAD能够显著升高心肌局部A-II和血浆ALD水平，卡托普利组和通冠组能明显降低这两项指标，通冠胶囊组降低A-II的作用较卡托普利组更明显，ALD则在两组之间无统计差异。见表2。1         表2  4周后大鼠A-II、ALD变化（略）与假手术组比较，*P0.01；与AMI对照组比较，#P0.01，与卡托普利组比较，P0.012.3  心肌胶原的表达  心肌VG、HE染色图片见图18。图1  假手术组4周后大鼠心肌VG染色（略）  &

13、#160;    图2  假手术组4周后大鼠心肌HE染色（略）图3  对照组4周后大鼠心肌VG染色（略）       图4  对照组4周后大鼠心肌HE染色（略）图5  卡托普利组4周后大鼠心肌VG染色（略）       图6  卡托普利组4周后大鼠心肌HE染色（略）图7  通冠胶囊组4周后大鼠心肌VG染色（略）    

14、   图8  通冠胶囊组4周后大鼠心肌HE染色（略）    图12显示心肌细胞排列整齐，未见炎性细胞浸润，未见明显胶原增生；由图34可见梗塞区心肌细胞坏死，为广泛胶原纤维所代替，非梗塞区心肌细胞肥大，排列紊乱，间质胶原增生；由图56可见，与AMI对照组比较，心肌细胞体积减小，心肌纤维排列相对整齐，胶原有所减轻；由图78可见，与AMI对照组比较，心肌细胞体积变小，心肌纤维排列相对整齐，胶原有所减轻。与卡托普利组比较，心肌细胞排列略见紊乱。3  讨论    急性心肌梗塞后心室重构指心肌梗塞

15、后心室大小、结构、形态以及心脏功能的变化过程，主要包括心肌梗塞区膨出、非梗塞区心肌肥大、室壁增厚、心肌间质纤维化，最终导致整个心室进行性扩张、失去正常的心腔形态、心脏收缩功能减低。    心室重构的发生原因目前研究较多的是肾素血管紧张素系统 (renin angiotensin system，RAS)。在心肌梗塞后RASS激活，出现血管紧张素转换酶、血管紧张素原mRNA和血管紧张素受体的上调，血管紧张素(A-)能通过多种机制导致心室重构，包括促进心肌细胞蛋白合成、心肌成纤维细胞中DNA合成及细胞凋亡。醛固酮具有不依赖A-的独立作用，特别是在心肌和血管重塑功能方面1

16、，心肌细胞、心脏成纤维细胞、内皮细胞具有高亲和力的醛固酮受体，醛固酮与之结合后促进心脏细胞的I型和型胶原基因表达，使胶原合成增加，对心肌小节的数量排列及心肌细胞直径大小等产生影响，心肌间质和部分血管周围胶原聚集，促进心肌间质纤维化，造成心室重塑和动脉内膜、中膜组织增厚、平滑肌纤维增生2。大量研究发现炎症与AMI后心室重构有关，且抗炎可以减轻心室重构3。心室重构还与梗塞部位、室壁应力和血液供需比相关，也有研究表明，细胞凋亡致心肌的丢失可能对进行性左室扩张和心肌细胞的肥大有作用。    本研究之所以选卡托普利作为对照组，是因为近年来几个大规模、多中心、双盲对照的临床研

17、究如SAVE试验、AIRE试验、TRACE试验等都证实ACEI能缓解和消除心衰症状，改善血液动力学与左室功能，提高运动耐量，改善生活质量，减缓和逆转心室重塑，从而减少心衰发病率和病死率，目前卡托普利已成为临床公认且有效的防治心室重构的药物。    本研究证实通冠胶囊与卡托普利对急性心梗大鼠体重和心脏重量有一定影响，且对心脏重量影响更大，两组之间影响力无统计差异，二者能显著降低AMI大鼠心肌局部A-II和血浆ALD水平，通冠胶囊组对A-II的降低作用较卡托普利组更明显，对ALD的影响两组之间无统计差异，通冠胶囊和卡托普利都可使梗塞区心肌细胞体积变小，心肌纤维排列整齐

18、，胶原增生减少，但通冠胶囊作用较卡托普利更明显。表明通冠胶囊能显著改善大鼠心肌梗塞后心脏结构，减轻心脏扩大，降低心肌局部A-、血浆ALD水平，抑制胶原增生并改善、型胶原含量，从而提示其具有不依赖于卡托普利的独立的改善心肌梗塞后心室重构的作用。    急性心肌梗塞属中医的“真心痛”范畴，其根本病机就是“本虚标实”。本虚中以气虚为基础，标实则以血瘀多见。通冠胶囊是我院自行研制的中成药，由黄芪、丹参等药物组成，具有益气、活血、宽胸、通络的功效，曾治宇等4通过实验证实黄芪可以降低大鼠心肌梗塞后血浆和心脏血管紧张素及血浆醛固酮的浓度并降低非梗塞区左室心肌型及型胶原的比值。药理研究显示丹参可以使自发性高血压大鼠的左心室质量指数、心肌细胞的直径和面积以及心肌组织胶原比例、血管周围胶原面积和管腔面积比例显著降低5，同时也可降低心室、型胶原6，逆转由A-引起的心脏成纤维细胞的增殖和、型胶原基因的表达水平7，从而逆转心室重构的发生。陈伯钧等8通过临床观察，发现通冠胶囊可有效地降低LVEDVI 和LVESVI，升高E/A和LVEF，从而抑制AMI后舒张末内径的扩大，改善心室局部运动障碍和整体左室功能的作用。【】  1 顾复生.醛固酮对心力衰竭的有害作用与醛固酮(受体)拮抗剂J.循环杂志，2002，17（4）：264.2 Weber KT，Bri