临床检测样本RNA提取方法的比较研究生物技术专业

1、临床检测样本 RNA 提取方法的比较研究摘要：选择市售的三种细胞裂解液（Liaison Plus、Troll Plus 和RNAOUT）和两种 DNARNA共提试剂盒（柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒、Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒），分别对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）和乙型脑炎病毒（JEV）三种病毒 RNA 进行提取，通过琼脂糖凝胶电泳和 Real-time PCR 间接评价所提取的 RNA 质量。结果表明：对于琼脂糖凝胶电泳，上述三种细胞裂解液和 Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒对应的组均可见清晰且高亮的条带，可用于临床 RNA

2、 病毒检测以及定性分析。对于Real-time PCR，Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒 CT 值最低，Liaison Plus、Troll Plus 两种细胞裂解液其次，以上三种试剂可用于临床 RNA 病毒检测以及定量分析。关键词：RNA；提取方法；比较；临床Comparison of Methods of clinical test samples RNA extractionAbstract：Three commercially available cell sates (Liaison Plus, Troll Plus and RNAOUT)and two DNA / R

3、NA co-kits (ALCMENA double-kit, Queasy rapid DNA / RNA co-kit) were selected toextract three animal RNA viruses（PRRSV, CSFV and JEV）. The RNA quality wasevaluated indirectly by agaric gel electroplate and Real-time PCR. The result shows, for agaric gel electroplate, the clearly and highlight bands c

4、an be seen above the groups of the three cell sates and Queasy rapid DNA / RNA co-kit, which can be used for clinical RNA virus detection and qualitative analysis. For Real-time PCR, the CT value of the Queasy rapid DNA / RNA co-kit group is the lowest, and the two cell sates groups(Liaison Plus, Tr

5、oll Plus) followed. The above three reagents can be used for clinical RNA virus detection and quantitative analysis.Key words: RNA；Extraction Method；Comparison；ClinicalRNA 是生物体重要的遗传物质1。近年来，越来越多的科研结果表明，RNA 在生命进程中的作用远不止于此，在 2002 年度 Science 评选的 10 大科学成就中RNA 名列榜首。RNA 分子提取是生物学研究中的一项基本内容，是进行基因表达分析的基础2。对于

6、DNA 文库构建、荧光定量 PCR、CRT、Northern 杂交等下游分子生物学实验来说，都需要质量好的，完整性高的 RNA3。在所有 RNA 试验中最关键的因素是分离得到全长 RNA。分离出纯度高且完整的 RNA 是进行基因表达分析及 RNA 结构功能研究的基础。在所有 RNA 实验中，最关键的步骤是分离得到纯度高且完整的 RNA。，从组织细胞中分离纯粹完整的 RNA 对于分子克隆和基因表达分析等试验是至关重要的4,5Chomsky 和 Sac chi 第一次提出了用异硫氰酸胍法提取细胞内的 RNA6， 使得 RNA 的提取过程变得简便快捷。常见的 RNA 提取方法有强变性剂法7、CTAB

7、 法8、ADS-Phenol 法9以及热硼酸法10等。在商品化的今天，国内外生物试剂公司研发出了许多 RNA 提取试剂盒。比如 Tamara 公司的 Liaison Plus；Inviting 公司的 Tripoli 总 RNA 提取试剂盒以及 Pure Link RNA Mini Kit；上海生工的 UNlQ-10 柱式 Tripoli 总 RNA 抽提试剂盒；Omega 公司的 RNA 小量提取试剂盒（Bacteria RNA kit）以及高纯 RNA 抽提试剂盒（HP total RNA kit）；Engage 公司的 RN easy Protect Bacteria Mini and

8、Midi Kits 等。都可以从病料组织或者培养细胞中快速有效地提取出高质量高纯度的 RNA。实时荧光定量 PCR 的原理是以荧光共振能量转移原理为基础11,12。荧光共振能量转移原理是当一个荧光分子（供体分子）的荧光光谱与另一个荧光分子（受体分子）的激发光谱重叠时，供体荧光分 子自身的荧光强度衰减，受体荧光分子的荧光强度增强。Ct 值是指每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。Ct 值是实时荧光 PCR 中一个很关键的因素，C 代表循环（Cycle），t 代表阈值（Threshold）。每个模板的 Ct 值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct 值越小。利

9、用已知起始拷贝数的标准品可做出标准曲线13-15。因此，根据荧光探针的发光基团所发出的荧光强度与 PCR 产物的数量呈对应关系，只要对荧光信号进行“实时”检测并获得未知样品的 Ct 值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。与普通 PCR 相比，实时荧光定量PCR 可以利用荧光信号实时监测 PCR 反应过程中每一个循环扩增产物的变化， 可以对初始模板量进行定量分析。简单地说，实时荧光定量 PCR 的基本原理就是样本核酸扩增呈指数增长，在反应体系和条件完全一致的情况下，样本 DNA 含量与扩增产物的对数成正比，由于反应体系中的荧光染料或荧光标记物（荧光探针）与扩增产物结合发光，其荧光量与扩增

10、产物量成正比，因此通过荧光量的检测就可以测定样本核酸量16-18。大量的研究实验证明：虽然提取 RNA 的方法很多，但是其基本都是把细胞破碎以后，以除去材料中糖、蛋白质、DNA 等杂质为目标。而且材料自身物理化学性质的不同，不同的材料需要不同的提取方法19 ,20。因此，需要通过对比试验，针对不同细胞组织，选择更加合适的 RNA 提取方法。1 材料与方法1.1 试剂高致病性猪繁殖于呼吸综合症活疫苗（JXA1-R 株，中牧实业股份有限公司），猪瘟耐热保护剂活疫苗（成都天邦生物制品有限公司，），日本乙型脑炎弱毒活疫苗（SA14-14-2 株），Troll Plus 总 RNA 提取试剂（南京天为生

11、物科技有限公司），动物 RNAOUT（北京天恩泽基因科技有限公司），Liaison Plus（宝生物工程有限公司），柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒（北京天恩泽基因科技有限公司），Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒（上海快灵生物科技有限公司），氯仿（），乙醇（），异丙醇（上海申博化工有限公司），逆转录试剂盒（），Mixture（）1.2 总 RNA 提取1.2.1 细胞裂解液法提取 RNA(1) Liaison Plus 法取疫苗稀释液 100L，加 dH2O 稀释到 500uL，加 700L 细胞裂解液；剧烈振荡，静置 515min，充分反应，期间振荡摇匀；加氯仿 200L，剧

12、烈振荡，静置 5min；12000rpm/min，4离心 5min；吸取 600L 上清，加入等体积的异丙醇，沉淀RNA，缓慢摇匀；-20保存 30min 以上；12000rpm/min 离心 15min，弃上清； 加入 400L，75%的乙醇，颠倒 4 次；12000rpm/min 离心 5min，弃上清；12000rpm/min，瞬离，吸干；吹干；每空加入 3040L Release free dH2O，-80 保存备用。其中，疫苗稀释液有三种（PRRSV、CSFV 和 JEV）。每组试验设立三个重复。（2） RNAOUT 法取疫苗稀释液 100L，加 dH2O 稀释到 500uL，加 7

13、00L 细胞裂解液；剧烈振荡，静置 515min，充分反应，期间振荡摇匀；加氯仿 200L，剧烈振荡，静置 5min；12000rpm/min，4离心 5min；吸取 600L 上清，加入等体积的异丙醇，沉淀RNA，缓慢摇匀；-20保存 30min 以上；12000rpm/min 离心 15min，弃上清； 加入 400L，75%的乙醇，颠倒 4 次；12000rpm/min 离心 5min，弃上清；12000rpm/min，瞬离，吸干；吹干；每空加入 3040L Release free dH2O，-80 保存备用。其中，疫苗稀释液有三种（PRRSV、CSFV 和 JEV）。每组试验设立三个

14、重复。（3） Troll Plus 法取疫苗稀释液 100L，加 dH2O 稀释到 500uL，加 700L 细胞裂解液；剧烈振荡，静置 515min，充分反应，期间振荡摇匀；加氯仿 200L，剧烈振荡，静置 5min；12000rpm/min，4离心 5min；吸取 600L 上清，加入等体积的异丙醇，沉淀RNA，缓慢摇匀；-20保存 30min 以上；12000rpm/min 离心 15min，弃上清； 加入 400L，75%的乙醇，颠倒 4 次；12000rpm/min 离心 5min，弃上清；12000rpm/min，瞬离，吸干；吹干；每空加入 3040L Release free d

15、H2O，-80 保存备用。其中，疫苗稀释液有三种（PRRSV、CSFV 和 JEV）。每组试验设立三个重复。1.2.2 柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒法提取 RNA在 1.5mL 离心管中加入 100L 疫苗稀释液，加入 600L 溶液 A，振荡 30s 混匀后室温放置 10min（溶液 A 在 4放置后可能产生沉淀，使用前必须放入 65水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用）；短暂离心后，将 500L 溶液转移到离心吸附柱中，室温放置 2min；12000rpm 室温离心 1min，弃收集管中的的穿透液，把离心柱放回到收集管中；将剩余的溶液短暂离心后全部转移到上一步的离心柱中，室温放置 2

16、min；12000rpm 室温离心 1min，弃收集管中的的穿透液，把离心柱放回到收集管中；加入 700L 的通用洗柱液到离心吸附柱中，12000rpm 室温离心 1min，弃收集管中的穿透液，把离心柱放回到收集管中；12000rpm 室温离心 1min（干甩），弃含穿透液的离心管；将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的 Freebase 的 1.5mL 离心管中，在离心吸附柱的中心加入 3040L 的洗脱液，然后室温放置 2min；12000rpm 离心 1min，离心管中为 RNA 溶液，-80保存备用。其中，疫苗稀释液有三种（PRRSV、CSFV 和 JEV），每组试验设立三个重复。1.2

17、.3 Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒法提取 RNA在 1.5mL 了离心管中加入 100L 处理好的样本液，然后加入 300L 核酸提取液，振荡混匀，室温静置 23min；加入 400L 异丙醇，振荡混匀，12000rpm 离心 5min，弃净溶液；加入 600L 50%异丙醇，振荡混匀，12000rpm 离心 1min，弃净溶液； 加入 600L 75%乙醇，振荡混匀，12000rpm 离心 1min，弃净溶液；离心管短暂离心 510s 后，用 10L 枪头弃净溶液，若管底出现少量沉淀，可开盖室温干燥23min；加入 1030uL 洗脱液，振荡混匀后短暂离心，置于-80保存备

18、用。其中，疫苗稀释液有三种（PRRSV、CSFV 和 JEV），每组试验设立三个重复。1.3 RNA 质量检测1.3.1 琼脂糖凝胶电泳检测分别取 RNA 样品 6L，加入 Ac Curt Reaction Mix（4X）2L，混匀后室温放置2min；加入 Ac Curt Reaction Shoppe（r 5X）2L，5X All-in-One RT Choirmaster 4L，Antinuclear H2O 6L，总体系为 20L 进行 CRT（25 10min，42 50min， 85 5min）。将反应生成的 DNA 分别用于普通 PCR，分别取 RNA 45 µL，在1.

19、0%的琼脂糖凝胶上进行电泳检测，85 V 恒压 25 min。紫外灯下照射观察条带，并拍照记录结果。其中，RNA 样品有三种（PRRSV、CSFV 和 JEV），每组试验设立三个重复。1.3.2 Real-time PCR分别取 RNA 样品 6L，加入 Ac Curt Reaction Mix（4X）2L，混匀后室温放置2min；加入 Ac Curt Reaction Shoppe（r 5X）2L，5X All-in-One RT Choirmaster 4L，Antinuclear H2O 6L，总体系为 20L 进行 CRT（25 10min，42 15min， 85 5min）。其中，

20、RNA 样品有三种（PRRSV、CSFV 和 JEV），每组试验设立三个重复。而后配置 Real-time PCR 体系，如下：体系：SYBR Premix EX Ta （2x）： 10 AL PCR Forward Primer：0.6 ALPCR Reverse Primer：0.6 ALDNA 模板2 AL三蒸水6.8 AL总 20 AL两步法 PCR 扩增标准程序：Stage1：预变性Reps：195 30 秒Stage2：PCR 反应Reps：40 95 5 秒60 30 秒反应结束后确认 Real-time PCR 的扩增曲线和融解曲线，按照内参基因和目的基因的扩增结果，应用 2C

21、T 的方法技术最终的 CT 值；评价扩增的效果，间接评价核酸的提取效果。上述反应应用 ABI 7300 荧光定量 PCR 仪（美国 Applied Bio systems 公司）进行。其中，每组试验设立三个重复。2.结果2.1 琼脂糖凝胶电泳检测结果2.1.1 高致病性猪繁殖于呼吸综合症活疫苗（JXA1-R 株）检测结果从图 1 可以看出，Liaison Plus、RNAOUT、Troll Plus 和 Queasy 快速DNA/RNA 共提试剂盒对应的组，电泳条带亮度和清晰度很高，彼此之间无肉眼可见差距；柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒对应的组未发现条带，表现不理想。图 1 PRRSV D

22、NA 琼脂糖凝胶电泳结果（M 为 Marker，0 为空白对照，1-3、4-6、7-9、10-12、13-15 分别为 3 个平行组，依次对应Liaison Plus、RNAOUT、Troll Plus、柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒、Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒）2.1.2 猪瘟耐热保护剂活疫苗检测结果从图 2 可以看出，Liaison Plus、RNAOUT、Troll Plus 和 Queasy 快速DNA/RNA 共提试剂盒对应的组，电泳条带亮度和清晰度很高。其中，Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒对应的组条带最清晰、亮度最高；Liaison Plus

23、 和RNAOUT 对应的组条带中度清晰、亮度中等，但两组之间无肉眼可见差距； Troll Plus 对应的组清晰度较低，亮度低；柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒对应的组未发现条带，表现不理想。图 2 CSFV DNA 琼脂糖凝胶电泳结果（M 为 Marker，0 为空白对照，1-3、4-6、7-9、10-12、13-15 分别为 3 个平行组，依次对应Liaison Plus、RNAOUT、Troll Plus、柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒、Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒）2.1.3 日本乙型脑炎弱毒活疫苗检测结果从图 3 可以看出，Liaison Plus、RNAOU

24、T、Troll Plus 和 Queasy 快速DNA/RNA 共提试剂盒对应的组之间，电泳条带亮度和清晰度很高。其中，Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒对应的组条带最清晰、亮度最高；LiaisonPlus 和 RNAOUT 对应的组条带中度清晰、亮度中等，但两组之间无肉眼可见差距；Troll Plus 对应的组清晰度较低，亮度低；柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒对应的组未发现条带，表现不理想。图 3 JEV DNA 琼脂糖凝胶电泳结果（M 为 Marker，0 为空白对照，1-3、4-6、7-9、10-12、13-15 分别为 3 个平行组，依次对应Liaison Plus、R

25、NAOUT、Troll Plus、柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒、Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒）2.2 Real-time PCR 检测结果2.2.1 高致病性猪繁殖于呼吸综合症活疫苗（JXA1-R 株）检测结果从图 4 可以看出，Liaison Plus、RNAOUT、Troll Plus、柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒和 Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒对应的组 CT 值均较低。其中，Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒对应的组 CT 值最低；Liaison Plus 和RNAOUT 对应的组 CT 值其次，但两组间差距不明显；Troll

26、Plus 对应的组 CT 值稍高；柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒对应的组 CT 值最高。图 4 PRRSV Real-time PCR 检测结果（Tamara、天恩泽、天为、天恩泽盒、快灵盒依次对应 Liaison Plus、RNAOUT、Troll Plus、柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒、Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒）2.2.2 猪瘟耐热保护剂活疫苗检测结果从图 5 可以看出，Liaison Plus、RNAOUT、Troll Plus、柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒和 Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒对应的组 CT 值均较低。其中，Queasy

27、 快速 DNA/RNA 共提试剂盒对应的组 CT 值最低；Liaison Plus 和RNAOUT 对应的组 CT 值其次，但两组间差距不明显；Troll Plus 和柱式病毒DHARNA 双提试剂盒对应的组 CT 值稍最高，但两组间差距不明显。图 5 CSFV Real-time PCR 检测结果（Tamara、天恩泽、天为、天恩泽盒、快灵盒依次对应 Liaison Plus、RNAOUT、Troll Plus、柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒、Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒）2.2.3 日本乙型脑炎弱毒活疫苗检测结果从图 6 可以看出，Liaison Plus、RNAOU

28、T、Troll Plus、柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒和 Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒对应的组 CT 值均较低。其中，Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒对应的组 CT 值最低；Liaison Plus 和RNAOUT 对应的组 CT 值其次，但两组间差距不明显；Troll Plus 对应的组 CT值稍高；柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒对应的组 CT 值最高。图 6 JEV Real-time PCR 检测结果（Tamara、天恩泽、天为、天恩泽盒、快灵盒依次对应 Liaison Plus、RNAOUT、Troll Plus、柱式病毒 DHARNA 双提试

29、剂盒、Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒）3 讨论RNA 的提取是分子生物学的基础21，如何提取从动物细胞和组织中提取高质量的 RNA 更是科研研究和病原诊断的关键。只有获得高纯度、高浓度和完整性好的 RNA 才能更好的进行下游反应，如 DNA 文库构建、荧光定量 PCR、CRT、Northern 杂交等下游分子生物学实验。RNA 的提取关键在于组织细胞裂解。组织裂解方法有很多，包括胍盐裂解法、碱裂解法、CTAB 裂解法和酚油抽提法等，这类方法虽然具有提取高纯度核酸的优点，但是普遍存在实验步骤多、操作繁琐、耗时长以及部分存在毒性等缺点22。随着生物产业的商业化发展，很多试剂公司根据

30、组织裂解的方法设计出了很多商品化试剂，比如 Tamara 公司的 Liaison Plus、天为生物科技有限公司的 TrollPlus，天恩泽基因科技有限公司的动物 RNAOUT 等。这些试剂可以从动物组织、培养细胞和微生物中简单、快速的提取 RNA，且获得的 RNA 完整性好，纯度高操作过程简单，并且毒性小，实验危险性小。通常情况下，分子生物学试验只需单独提取一种类型的核酸（DNA/RNA）或蛋白质。如果想要同时获得 DNA、RNA 以及蛋白质，则需要分别提取。显然这种方式效率不高，因此，随着科技的进步，出现了很多商品化试剂盒，如天恩泽基因科技有限公司的柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒法、

31、快灵生物科技有限公司的 Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒等。此类方法操作起来简便，时间短，可以同时提取 DNA 和 RNA，毒性小，且获得的核酸完整性好，纯度高等。笔者所在实验室选取了市售的三种细胞裂解液（Liaison Plus、Troll Plus 和RNAOUT）和两种 DNARNA 共提试剂盒（柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒、Queasy 快速DNA/RNA 共提试剂盒）。分别对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）和乙型脑炎病毒（JEV）三种疫苗毒的 RNA 进行提取，而后进行 CRT 将所提取的 RNA 转换成 DNA，分别用于普通 PCR 并

32、进行琼脂糖 凝胶电泳和 Real-time PCR，之后分别通过琼脂糖凝胶电泳条带清晰度、亮度和Real-time PCR CT 值来间接对所提取 RNA 质量作评价和比较。琼脂糖凝胶电泳结果表明，对于 PRRSV，Liaison Plus、RNAOUT、Troll Plus 和 Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒所对应的组均可见清晰度高，亮度高的条带，表明对应 DNA 质量好，间接表明所提取的 RNA 质量好。因此，上述试剂可用于临床 PRRSV 的病毒检测以及定性分析。对于 CSFV，Queasy 快速DNA/RNA 共提试剂盒所对应的组条带最清晰、亮度最高，其次是 Liais

33、on Plus 和 RNAOUT，Troll Plus 稍差。因此，对于临床 CSFV 的病毒检测以及定性分析，首选 Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒、Liaison Plus 和 RNAOUT。对于JEV，Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒所对应的组条带最清晰、亮度最高， 其次是 Liaison Plus 和 RNAOUT，Troll Plus 稍差。因此，对于临床 JEV 的病毒检测以及定性分析，首选 Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒、Liaison Plus 和 RNAOUT。Real-time PCR 结果表明，对于 PRRSV，Queasy 快

34、速 DNA/RNA 共提试剂盒对应的组 CT 值最低，表明对应的 DNA 浓度和纯度最好，间接说明所提取的 RNA 质量最好。其次是 Liaison Plus 和 RNAOUT，柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒和 Troll Plus 表现不理想。因此，对于临床 PRRSV 的病毒检测以及定量分析， 首选 Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒、Liaison Plus 和RNAOUT。对于 CSFV，Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒对应的组 CT 值最低，表明对应的 DNA 浓度和纯度最好，间接说明所提取的 RNA 质量最好。其次是 Liaison Plus 和RNA

35、OUT，柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒和 Troll Plus 表现不理想。因此， 对于临床 CSFV 的病毒检测以及定量分析，首选 Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒、Liaison Plus 和 RNAOUT。对于 JEV，Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒对应的组 CT 值最低，表明对应的 DNA 浓度和纯度最好，间接说明所提取的RNA 质量最好。其次是 Liaison Plus 和 RNAOUT，柱式病毒 DHARNA 双提试剂盒和 Troll Plus 表现不理想。因此，对于临床 JEV 的病毒检测以及定量分析，首选 Queasy 快速 DNA/RNA 共

36、提试剂盒、Liaison Plus 和 RNAOUT。本次实验仅仅对 PRRSV，CSFV 和 JEV 三种 RNA 病毒的疫苗毒 RNA 进行提取比较。以上三种病毒均为临床常见的 RNA 病毒，具有代表性。通过比较分析实验结果，笔者认为当临床需要对 PRRSV，CSFV 和 JEV 三种 RNA 病毒进行检测时，可首选 Queasy 快速 DNA/RNA 共提试剂盒和 Liaison Plus 和 RNAOUT 两种细胞裂解液，获得的 RNA 质量好，利于后续实验的进行。随着科学技术的进步，市面上已经出现自动核酸提取仪，如 ABI 公司的 ABI PRISMTM 6100 核酸提取仪，半个小

37、时即可完成 96 个样品的纯化工作，并且可纯化来自多种生物样本的总 RNA 和基因组 DNA23。随着科技的发展，类似的仪器也在不断出现和升级，但由于成本较高，且有时并不需要同时提取 96 个样本，因此多数高校和科研机构并未普及。每种 RNA 提取方法均有其各自的优势，如何选择合适的 RNA 提取方法应根据提取对象、所需浓度和数量、时间以及纯度等来综合选择。随着科学技术的进步， 相信动物组织 RNA 提取的方法会越来越简便、快速、高效。致谢参考文献：1 Jun H L, Chan H T. A simple rapid and effective method for total RNA ex

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