流式细胞术_百替生物

1、 第二十三章流式细胞术Chapter 23 Flow Cytometry第一部分 教学内容和要求一、目的要求·掌握:流式细胞仪分析和分选原理、数据的显示与分析,流式细胞仪免疫分析;熟悉:流式细胞仪在免疫学中的应用;了解:流式细胞仪的组成及在免疫分析的质量控制。二、教学内容1。流式细胞仪的原理:流式细胞仪工作原理,细胞散射光信号测定,细胞荧光信号测定,细胞分选的原理2。数据的显示与分析:参数,数据显示方式。3。流式细胞仪免疫分析:免疫检测样本的制备,常用的荧光染料与标记染色,流式细胞仪免疫分析的质量控制。4.流式细胞术在免疫学中的应用:淋巴细胞及其亚群的测定,淋巴细胞功能测定,白血病细

2、胞免疫分型,肿瘤耐药基因分析,AIDS病程分析,自身免疫性疾病相关HLA分析。第二部分 测试题一、选择题(一单项选择题(A型题1.流式细胞仪的单参数数据显示方式是A.二维的散点图B.等高线轮廓图C.分布直方图D.密度图E.三维立体显示2.关于前向散射光信号,正确的是A.反映细胞质中的颗粒成分B.可排除各种碎片对被检细胞的干扰C.用于区分淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞等D.细胞凋亡时,前向散射光信号变强E.反映细胞内部结构的形态学改变3.关于流式细胞仪,错误的叙述是A.可同时测量同一细胞的多个参数B.采用List Mode数据贮存方式C.标准荧光微球和戊二醛固定的鸡红细胞是常用的质控参考标准D.

3、只有一种数据显示方式E.12min内就能完成细胞大群体的定量分析4.分离外周血单个核细胞的常用方法是A.ELISAB.E花环试验C.尼龙毛法E.聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法(二多项选择题(X型题1.流式细胞仪的特点包括A.快速B.单细胞流C.单细胞检测D.定量E.单细胞照明2.流式细胞仪常用的荧光染料有A.异硫氰酸荧光素B.藻红蛋白C.PeCy5D.PeCy7E.ECD3.关于流式细胞仪的荧光标记染色,正确的是A.避免使用固定剂B.减少离心C.减少洗涤次数D.必须在细胞悬液中进行E.一般采用间接荧光免疫标记方法4.流式细胞仪的双参数数据显示方式有A.二维散点图B.三维立体图C.线性分布直方图

4、D.对数分布直方图E.等高线轮廓图5.流式细胞术可用于A.检测血清细胞因子水平B.检测凋亡细胞C.白血病的免疫学分型D.检测HLAE.T细胞检测及其亚群分类6.检测细胞可采用A.51Cr放法B.流式细胞术C.TUNEL法D.3H-TdR掺入法E.MTT法7.用于检测T细胞免疫功能的试验是A.淋巴细胞转化试验B.细胞毒试验C.流式细胞术D.溶血空斑试验E.结核菌素皮肤试验8.从T细胞中分离CD4+T细胞可用A.磁珠分离法B.流式细胞术C.ELISPOTD.聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法E.TUNEL法9.检测T细胞亚群可采用的方法是A.间接凝集试验B.MTT法C.间接荧光免疫法E.沉淀试验10.

5、流式细胞仪免疫分析的质量控制A.仪器的质控B. 免疫荧光对照C.双荧光或多荧光分析中荧光色的标定D.试剂标准化E.操作标准化二、填空题1.流式细胞仪的组成包括_、_和_三部分。2.流式细胞仪的散射光参数包括 _和_。其中_信号反映细胞的大小,常用于排除样品中各种碎片对被测细胞的干扰;_信号反映细胞内部结构的形态学信息,常用于区分外周血样品中的淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞。3. _和_组成细胞双信号参数散点图,是流式细胞分析中最常用的测量和显示细胞的方式。4.能对免疫细胞和其他细胞进行快速准确鉴定和分类的技术是_,使用的仪器是_,主要试剂是_。三、名词解释1.流式细胞术(flow cytome

6、try,FCM2.细胞分选(cell sorting3.List Mode4.荧光补偿技术(fluorescent compensation四、问答题1.简述流式细胞仪的工作原理。2.论述流式细胞术在免疫学中的应用。3.简述细胞分选的原理。第三部分参考答案与题解一、选择题(一单项选择题(A型题1.C2.B3.D4.E(二多项选择题(X型题1.ABCDE2.ABCDE3.ABCD4.ABE5.BCDE6.BC7.ABCDE8.AB 9.CD 10.ABCDE二、填空题1.流动室与液流驱动系统激发光与光束成形系统细胞信号检测与分析处理系统2.FS SS FS SS3.FS SS4.流式细胞术流式细

7、胞仪荧光标记的单克隆抗体三、名词解释1.流式细胞术:是指借助流式细胞仪,精确、快速地对生物细胞的理化特性和生物学特性进行多参数定量分析,并对特定细胞群体分选的新技术。2. 细胞分选:是指从细胞群体中将选定的细胞分离出来。3. List Mode方式:是指用表格将每一个被测细胞的众多原始数据全部记录下来,形成数据文件。4. 荧光补偿技术:是指利用已知标准样品或根据细胞样品的生物学意义,合理设置各荧光信号之间的相互补偿值。四、问答题1.流式细胞仪是一种在计算机技术支持下高度自动化的显微荧光脉冲分光光度仪,可分为三个部分:(1细胞流动室及其液流驱动系统:细胞样品和包裹在外的鞘液在气体正压的驱动下一起

8、流经流动室,其中的细胞一个一个排列成单行,逐个以相同的速度、相同的轨迹通过检测区,此为流式细胞仪的单细胞流技术;(2激发光及其光束成形系统:流式细胞仪的激发光大多采用氩离子气体激光器,也可采用半导体激光器。仪器中一般都采用两块相互垂直放置的柱面透镜组成光束成形系统,对激光束进行适当的聚焦,形成截面为椭圆形的照射光斑即检测区。椭圆形光斑的检测区能保证样品中细胞是一个一个分别受到光照,并且每一受检细胞都受到一致的光照激发,此为流式细胞仪中的单细胞照明技术;(3细胞信号检测与分析处理系统:细胞受到激发光照射时,产生散射光和荧光信号。光电倍增管及其电子线路将每一细胞的光信号转换为相应的电信号,后者再通

9、过模数转换器( ADC 量化为数字信号,由计算机采集、分析、显示与存贮等,此为流式细胞仪的单细胞检测技术。2.(1淋巴细胞及其亚群的测定:通过FCM检测淋巴细胞的CD分子,可鉴定淋巴细胞并计算出淋细胞各亚群的百分率;(2淋巴细胞功能测定:通过FCM检测淋巴细胞的表面受体及各种细胞因子,可区分各种淋巴细胞,并推测其功能。FCM还可快速测定混合淋巴细胞培养、细胞介导细胞毒、细胞吞噬功能等;(3白血病细胞免疫分型:FCM 能快速、精确地分析白血病细胞系免疫表型的来源及分化阶段,用于各种血液肿瘤的原发性诊断、鉴别、分型分期、疗效观察、残存瘤细胞检测、肿瘤复发的早期发现、骨髓移植后的成功与再生检测;(4肿瘤耐药基因分析:FCM能快速检测细胞P-gp表达,报告MDR并提示预测疗效,及时更改治疗方案;(5AIDS病程分析:通过FCM检测Th细胞绝对计数、Th/Tc比值,可及时进行药物治疗干预和疗法评估;(6自身免疫性疾病相关HLA分析:通过FCM检测细胞某些HLA异常表达,可用于多种生理和病理状态的研究。3. 细胞分选(cell sorting是指从细胞群体中将选定的细胞分离出来。细胞分选时,振荡装置充电产生每秒4万次的振动频率,使喷嘴射出一连串均匀的成千上万个小液滴,流动